乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA与乙肝标志物和肝功能指标关系的分析

王海滨 张冬青 陈 赵 娇

（解放军总医院第一附属医院检验科，北京 100048）

乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA与乙肝标志物和肝功能指标关系的分析

（解放军总医院第一附属医院检验科，北京 100048）

目的：探讨慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）患者乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）定量检测水平与乙肝标志物和肝功能指标之间的关系。方法：采用实时荧光定量-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测2 374例慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清中HBV-DNA含量，用电化学发光免疫分析方法检测慢性乙肝患者血清乙肝标志物，用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标。结果：2 374例慢性乙肝患者血清中HBV-DNA阳性率为45.4%（1 078例），HBeAg的检出率为29.6%（704例）；501例HBsAg(+)、HBeAg(+)、 HBcAb(+)模式的患者HBV-DNA检出率达75.4%（378例），1 586例HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式的患者HBV-DNA检出率为34.3%（544例）。与HBV-DNA阴性组比较，HBV-DNA阳性组的丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）的水平均明显升高（P＜0.05），且其水平随着病毒复制量的增加而增加。结论：在反映HBV复制方面，HBV-DNA的阳性率明显高于HBeAg，因此应定期进行血清HBV-DNA的定量检测，评估病毒的复制情况，同时检测血清ALT、AST、AFU水平，以尽早发现肝功能的损害，达到早期治疗的目的。

肝炎，乙型，病毒性 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 肝功能 α-L-岩藻糖苷酶

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）属嗜肝细胞DNA病毒科，由其所导致的乙型病毒性肝炎（乙肝）是我国最为常见的传染性疾病之一。HBV血清学标志物的检测是目前诊断乙肝最常用的指标。临床上常常把乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）作为乙肝患者抗病毒治疗监测指标之一[1]，但是大量数据显示血清HBeAg不能如实反映体内HBV复制的变化。乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）是判断HBV复制活动的最直接也是最准确的依据。血清丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase, AST）被认为是肝细胞损伤最敏感的指标。α-L-岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase, AFU）是一种溶酶体酸性水解酶，在肝、肾等组织中活性较高，与HBV感染密切相关。本研究中对乙肝患者HBV-DNA含量与血清学标志物、肝功能指标的检测意义进行了分析。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2012年1月—2015年1月来我院就诊的慢性乙肝患者2 374例；诊断标准符合中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版》的诊断标准[2]，除外甲、丙、丁、戊型肝炎患者，其他原因引起的肝功能损害以及心肺功能不全的患者。其中男1 637例，女737例，年龄30～66岁，平均（46.53±14.59）岁。选择同期无HBV感染的健康体检者50例作为对照组，其中男33例，女17例；年龄29～62岁，平均（45.86±14.54）岁。两组间性别、年龄比较，差异无显著性（P＞0.05），具有可比性。所有患者均抽取晨空腹静脉血5 ml，室温静置，待血液完全凝固后离心分离取血清，3 500 r/min 离心10 min，2～8 ℃冰箱保存，48 h内完成血清HBV-DNA、血清学标志物、ALT、AST和AFU的检测。

1.2 检测方法

1.2.1 血清HBV-DNA的定量测定 HBV-DNA定量检测试剂盒由上海复星长征医学科学有限公司提供，基于TaqMan探针实时荧光PCR技术，操作严格按照说明书，检测采用罗氏LightCycler480Ⅱ型实时定量PCR检测仪，每次实验设立5种HBV-DNA标准品，浓度分别为3.0×107、3.0×106、3.0×105、3.0×104、3.0×103IU/ml，并且设阴性、阳性对照，最低定量限为1.0×102IU/ml，大于5.0×102IU/ml为阳性结果。

1.2.2 血清学标志物的检测 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、HBeAg、e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）均采用电化学发光免疫进行分析，试剂盒由罗氏诊断产品有限公司提供，采用Roche cobas 6000分析仪进行检测，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.3 血清ALT、AST、AFU的检测 应用日本HITACHI公司7600全自动生化分析仪进行检测，ALT、AST测定试剂盒由北京德曼公司提供，采用连续监测法进行检测，AFU试剂由四川迈克科技有限责任公司提供，采用MG-CNPF法测定。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析，计量数据用x±s表示，两组正态分布计量资料均数比较用t检验；非正态分布计量资料数据以中位数表示；计数资料以率表示，结果差异比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异具有显著性。

2 结 果

2.1 不同血清学模式乙肝患者HBV-DNA检测结果 在2 374例慢性乙肝患者中，共有1 078例HBV-DNA阳性, 阳性率45.4%。将慢性乙肝患者的血清学模式分为以下4种（表1）：①HBsAg(+)、HBeAg(+)、 HBcAb(+)模式：即“大三阳”，共501例（21.1%），HBVDNA阳性率达75.4%，HBV-DNA平均含量为2.2×108IU/ml。本血清模式存在病毒高复制状态。②HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式，即“小三阳”，共1 586例（66.8%），HBVDNA阳性率为34.3%，HBV-DNA平均含量为4.2×106IU/ml。说明有部分HBeAg转阴患者存在病毒高复制。③HBsAg(+) 、HBeAg(+) 、HBeAb(+)、HBcAb(+) 模式：203例（8.6%），HBV-DNA阳性率为71.9%，HBV-DNA平均含量为1.8×107IU/ml。④HBsAg(+)、HBcAb(+) ：84例（3.5%），HBV-DNA平均含量为9.5×105IU/ml。见表1。

2.2 HBeAg与HBV-DNA的关系 以HBV-DNA＞5.0×102IU/ml作为血清HBV-DNA阳性标准，2 374例乙型肝炎患者中HBV-DNA阳性1 078例（45.4%）；HBeAg阳性704例（29.6%），HBeAg阳性率与HBV-DNA阳性率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 乙肝患者不同血清学模式HBV-DNA检测结果

表2 HBeAg与HBV-DNA检测结果（例）

2.3 不同病毒量组的血清ALT、AST、AFU水平的比较 根据血清HBV-DNA的检测结果，将慢性乙肝患者分为4组。与正常对照组比较，慢性乙肝患者的AST、AFU水平均显著升高（P＜0.05）；与HBV-DNA＜5.0×102IU/ml比较，HBV-DNA＞5.0×102IU/ml患者的ALT、AST、AFU的水平均明显升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；且随着病毒复制量的增加，ALT、AST的水平均明显升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

3 讨 论

乙型肝炎病毒检测常用方式为两对半（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb），感染后可呈现多种血清学模式，其中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）一直被作为乙型病毒感染管理的依据[3-4]，乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）的转归是抗病毒治疗最明显的指标，HBV-DNA是反映HBV在体内复制的最准确的指标，但HBsAg与反映病毒复制的HBV-DNA合成途径不同，在血清中的表达不平行[5]。我们回顾性分析了2 374例慢性乙肝患者的临床资料，发现HBV感染者中以男性最多见，男性患者是女性的2.22倍，这与文献报道基本一致[6]。在“大三阳”[HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+) ]和“一三四五阳”[HBsAg(+) 、HBeAg(+) 、HBeAb(+)、HBcAb(+)]的血清学模式中HBV-DNA阳性率较高，说明这两组患者体内存在HBV高复制状态，而“小三阳”[HBsAg(+)、 HBeAb(+)、HBcAb(+)]和“一五阳”[HBsAg(+) 、HBcAb(+)]模式中HBV-DNA阳性检出率分别为34.3%和11.9%，病毒复制数量较前两组明显下降，说明在HBV感染者体内HBeAg(+) 向HBeAb(+)转换的过程中，病毒的复制数量逐渐降低。通常认为HBeAg(+)是HBV复制活跃的重要指标，但是本研究结果显示“小三阳”和“一五阳”并不表明HBV复制的完全终止或病症的完全消失。但是有部分“大三阳”患者体内检测不出HBV - DNA，可能与HBV突变、HBV与肝细胞的整合、试剂的敏感性差等相关[7]；“小三阳”中约有34.3%的患者HBV-DNA阳性，说明HBeAg虽然转阴，但是病毒并没有停止复制[8]。近年来研究发现，HBeAg阴性，而HBVDNA呈阳性的患者容易并发肝硬化[9]。因此，用HBV-DNA描述HBsAg(+)患者体内病毒复制情况较HBeAg更为灵敏，乙肝患者血清学模式必须结合HBV-DNA检测才能更加准确反映机体的真实情况。

肝脏组织炎症活动增强时HBV-DNA载量明显升高，病毒的活跃复制可能会导致肝脏组织炎症反应，更易并发严重疾病，病毒水平的监测对病情的判断具有重要的价值，但是肝组织内的病毒含量变化受多种因素影响，如机体的免疫力、免疫耐受和病毒变异等[10]。ALT、AST可以反映肝内炎症的活动程度，是常用的肝细胞损伤诊断指标， AFU与HBV感染有明显相关性，病毒复制活跃激发肝脏组织炎症反应，使肝细胞出现变性、炎性细胞浸润和肝脏纤维组织增生，从而使血清ALT、AST和AFU的活性增加。本研究中发现与HBV-DNA阴性组比较，HBV- DNA阳性组的ALT、AST、AFU的水平均明显升高，差异具有统计学意义。ALT、AST、AFU水平的检测还有助于乙肝并发症发展的预测[11]。

表3 不同病毒量组乙肝患者的ALT、AST、AFU水平的比较

HBV感染可引起各种急、慢性乙肝及肝硬化等疾病，积极有效监测并治疗乙肝患者的病情是刻不容缓的重要任务。因此慢性乙肝患者应定期进行血清HBV-DNA的定量检测和ALT、AST和AFU水平的检测，以提高HBV检出率，了解HBV在体内复制的真实情况，这对于慢性乙肝患者抗病毒治疗方案制定和防止疾病进展有重要意义。

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［6］施志农,陈继梅.1546例乙型肝炎患者血清HBV-M﹑HBVDNA﹑肝功能检测结果分析[J].中华全科医学, 2011,9(6):966-968.

［7］吴健林,曾志励,李国坚,吴继周,陈茂伟,郑奕,张丰晓.乙型肝炎抗原阴性、阳性慢性乙型肝炎患者细胞免疫状态与乙型肝炎病毒DNA水平相关性分析[J].临床荟萃,2008,23(3):166-168．

［8］施志农,陈继梅.1546例乙型肝炎患者血清HBV-M、HBVDNA肝功能检测结果分析[J].中华全科医学,2011, 9(6):966-968.

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［11］张明珠,何广元,覃强,邹天柱,李琳,杨镍.血清α-L-岩藻糖苷酶活性与乙型肝炎相关性研究[J].宁夏医学杂志,2007,29(5):428-429.

Analysis of the relationship among the serum DNA levels of hepatitis B virus, serum hepatitis B markers, and liver function in patients with chronic hepatitis B

Wang Haibin, Zhang Dongqing, Chen Man, Zhao Jiao.
Department of Clinical Laboratory, the First Hospital Affiliated to the Chinese PLA General Hospital, Beijing 100048, China

Objective: To investigate the relationship among the serum DNA levels of hepatitis B virus (HBV-DNA), serum marker of hepatitis B, and the concentration of alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminase (AST), α-L-fucosidase (AFU) in patient with chronic hepatitis B. Methods: HBV-DNA, serum markers of HBV and liver function (ALT, AST, AFU) were determined in 2 374 patients with chronic hepatitis B. Serum levels of HBV-DNA and serum markers of HBV were determined with real-time polymerase chain reaction and electrochemical luminescence immunoassay, respectively. The indices of liver function were determined by the automatic biochemical analysis instrument. Results: The positive rate of HBV-DNA and HBeAg was respectively 45.4% (1 078 cases) and 29.6% (704 cases) in 2374 patients. The positive rate of HBV-DNA in the patients with HBsAg(+) HBeAg(+)HBcAb(+) was 75.4% (378 cases), and it was 34.3% (544 cases) in patients with HBsAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+) . The levels of ALT, AST and AFU in positive HBV-DNA group were significantly higher than those in negative HBV-DNA group (P＜0.05), and their levels were higher with the elevation of the level of HBV-DNA. Conclusions: As an evaluating indicator for replication of hepatitis B virus, the serum level of HBVDNA is more sensitive than that of HBeAg. HBV-DNA should be determined regularly to assess the replication of hepatitis B virus, and ALT, AST and AFU should be determined simultaneously to assess the degree of damage to liver function earlier.

Hepatitis B Hepatitis B virus-DNA Liver function α-L-fucosidase

10. 3969/j. issn. 1672-8521. 2015. 03. 013

2015-05-27）

国家重大科学仪器设备开发专项（2013YQ1904670703）