HPLC法测定附子理中丸（浓缩丸）中甘草苷的含量

陈欣

（大同市食品药品检验检测中心，山西 大同 037006）

HPLC法测定附子理中丸（浓缩丸）中甘草苷的含量

陈欣

（大同市食品药品检验检测中心，山西 大同 037006）

目的：建立高效液相色谱法测定“附子理中丸（浓缩丸）”中甘草苷含量的方法。方法：以岛津shim－packVP－ODS C18柱（250 mm×4.6 mm）为色谱柱，以乙腈－0.5%醋酸溶液（19∶81）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为276 nm。结果：甘草苷在0.030 52 μg～0.305 2 μg范围内呈良好的线性关系；平均回收率为101.8%，RSD=1.32%（n=5）。结论：所建方法简便、准确、重复性好，可用于附子理中丸（浓缩丸）中甘草苷的含量测定。

附子理中丸（浓缩丸）；含量测定；HPLC；甘草苷

附子理中丸是由附子（制）、党参、白术（炒）、干姜、甘草组成的复方制剂，具有温中健脾之功效［1］。用于脾胃虚寒、脘腹冷痛、呕吐泄泻、手足不温等症，还可用于儿科疾病，如泄泻、喜唾、流涎等［2］。近年来发现，经中医辨证灵活使用，对急性胃肠炎、溃疡性结肠炎、胃及十二指肠溃疡、小儿慢性腹泻、男性不育症、脚气病等也有较好疗效［3］。本方收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第7册［4］，原质量标准对方中药物未制订含量测定标准，为此我们采用HPLC法测定其中甘草苷的含量，经历了多次实验，建立了“附子理中丸（浓缩丸）”中甘草苷含量测定方法［5］，此方法简单、快速、准确可靠，重现性好。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

日本岛津LC－2010AHT型高效液相色谱仪（自动进样、LC－solution色谱工作站），岛津shim－pack VPODS C18色谱柱（250 L×4.6 mm），AS20500A超声波清洗机，电子分析天平（MS105DU型、BT224S型）。

1.2 药物与试剂

乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111610－201005，含量为94.9%，使用前无需处理），附子理中丸（浓缩丸，马鞍山市制药股份有限公司，生产批号：20120123、20120917；河南省宛西制药股份有限公司，生产批号：130102；兰州大宝制药有限公司，生产批号：81121133）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性实验

色谱柱：岛津shim－pack VP－ODS C18色谱柱（250 L×4.6 mm）；流动相：乙腈－0.5%醋酸溶液（19∶81）；流速：1.0 mL/min；检测波长：276 nm；进样量：10 μL；柱温：室温。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取甘草苷对照品8.04 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再精密量取5 mL至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，研细（过3号筛），取样约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密

加入70%乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W，频率25 kHz）40 min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜（0.45 μm），即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备

按照附子理中丸（浓缩丸）的生产工艺，制备不含甘草的附子理中丸（浓缩丸）模拟，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备，得阴性对照品溶液。

2.5 专属性实验

在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，供试品溶液的色谱图在与对照品溶液色谱图相应的位置上有相同的色谱峰，阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱图相应的位置上无色谱峰干扰，高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.6 线性范围考察

精密量取“2.2”项下的甘草苷对照品溶液（15.26 μg/mL）2 μL、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归计算，回归方程为Y=1 623.2X+2 240.3，R=0.999 9，结果表明：甘草苷在0.030 52 μg～0.305 2 μg范围内线性关系良好。

2.7 精密度实验

吸取上述对照品溶液（15.26 μg/mL），连续进样6次，每次10 μL，在上述色谱条件下测定甘草苷峰面积，并计算RSD为0.83%，结果表明精密度实验符合有关规定。

2.8 稳定性实验

在室温条件下，取同一供试品（马鞍山市制药股份有限公司，批号：20120123）溶液，按样品测定方法分别放置0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h后进样，测定甘草苷峰面积，计算RSD为0.94%，表明甘草苷在24 h内稳定性良好。

2.9 重复性实验

取同一批号（马鞍山市制药股份有限公司，批号：20120123）样品，取样6份，按“2.3”项下的方法制备测定，做平行实验，每份进样2针，甘草苷含量平均值为1.040 6 mg/g，RSD为0.90%，结果表明重复性实验符合有关规定。

2.10 加样回收率实验

精密称取重复性考察测定后已知含量的样品，按供试品测定方法减半取量，每份约0.4 g，共称取5份，分别置50 mL容量瓶中，再分别精密加入甘草苷对照品溶液（15.26 μg/mL）25 mL，按供试品溶液制备法制备，并按以上色谱条件测定，计算回收率，结果甘草苷平均回收率为101.8%，RSD为1.32%，结果表明加样回收率实验符合有关规定。结果见表1。

表1 甘草苷回收率实验测定结果

2.11 样品测定

接上述测定方法对4批不同生产企业和批号的样品中的甘草苷进行测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨 论

经UV－2450紫外分光光度计扫描紫外光谱图，选择甘草苷测定波长为276 nm。在供试品制备中，对提取超声时间（30 min、40 min、60 min）进行了考察，结果表明，样品中甘草苷超声处理40 min即可提取完全。实验以甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5）、乙腈-0.5%醋酸溶液（20∶80）、乙腈-0.5%醋酸溶液（19∶81）为流动相，考察了色谱分离情况，结果乙腈-0.5%醋酸溶液（19∶81）为流动相时，甘草苷分离效果最佳。

通过对“附子理中丸（浓缩丸）”不同生产企业的4批样品测定结果发现，甘草苷含量存在的差异较大，不同生产企业间的甘草苷含量存在明显差异，同一生产企业的不同批号间甘草苷含量也存在明显的差异，可能是由于所用原料的质量不同导致，所以建议在以后制订标准时予以考虑。用HPLC测定“附子理中丸（浓缩丸）”中甘草苷的含量，具有样品处理简单、回收率好、重复性好、稳定性好等优点，可以作为“附子理中丸（浓缩丸）”中甘草苷含量测定的检测方法，能有效地控制制剂质量。

［1］国家药典.中华人民共和国药典［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］黄鹤洁.附子理中丸儿科应用四则［J］.中国现代医药杂志，2006，8（12）：123.

［3］张颖，姜首彦.附子理中丸临床用药方案研究［J］.首都医药，2007，22（5）：53.

［4］中华人民共和国药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第7册［S］.1993：86.

［5］李翠，徐必学，张永萍，等.甘草中甘草苷的含量测定方法研究［J］.时珍国医国药，2009，20（3）：564-565.

（编辑：梁葆朱）

临床研究与经验

Clinic Research and Experience

西医断病，中医辨证，两者似乎截然不同。但如果戴上分子医学的眼镜，你就会发现证原来是寓于病之中的。从病识证，揭示了一条分子诊断和分子治疗的新途径。

HPLC determination of liquirtin in Fuzi Lizhong pills（concentrated pills）

Chen Xin
（Food and Drug Control Center of Datong，Datong Shanxi 037006）

Objective：To establish a determination method for liquirtin in Fuzi Lizhong pills（concentrated pills）by HPLC.

Fuzi Lizhong pills（concentrated pills）；contents determination；HPLC；liquirtin

R284.2

A

1671-0258（2015）05-0030-03

陈欣，主管药师，E－mail：zhangshuosheng@aliyun.com

Methods：The separation was performed on a shim－pack VP－ODS C18column（250 mm×4.6 mm），and the mobile phase was consisted of acetonitrile and 0.5%ethanoic acid（19∶81）with a flow－rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 276 nm.Results：Liquirtin was in good linear in the range of 0.030 52 μg～0.305 20 μg，and the average recovery rate was 101.8%，RSD=1.32%（n=5）.Conclusion：The method is simple，reliable and good repeatability and could be used for determination of liquirtin in Fuzi Lizhong pills（concentrated pills）.