Survivin和Livin在初诊急性白血病患儿中的表达

王留霞

(鄢陵县人民医院儿科，河南 许昌461000)

Wang Liuxia

(Department of Pediatrics，the People’s Hospital of Yanling，Xuchang 461000，China)

Survivin 和Livin 蛋白均是凋亡抑制蛋白家族成员，在多种肿瘤中均存在高表达，对肿瘤的发生、发展、浸润、转移等具有明显促进作用［1］。为进一步探讨儿童急性白血病的发病机制，并为儿童急性白血病治疗新方法的探讨提供依据，作者采用免疫组化S-P 法检测了89 例初诊急性白血病患儿中Survivin 和Livin 蛋白的表达，并探讨两者之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集郑州市儿童医院和鄢陵县人民医院2010年1月至2014年12月收治的经临床病理确诊的急性白血病患儿89 例，均为初诊患者，其中男49 例，女40 例;年龄9 个月～14 岁，中位年龄7.5 岁;急性淋巴细胞白血病58 例，急性髓细胞白血病31 例。收集同期住院的30 例非恶性血液病患儿作为对照，其中男17 例，女13 例;年龄2 ～15 岁，中位年龄8 岁;疾病类型:特发性血小板减少性紫癜21 例，营养性贫血9 例)。2 组性别、年龄等基本资料比较差异无统计学意义(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫组化S-P 法检测Survivin 和Livin 蛋白 2组所有患儿均抽取骨髓标本，经涂片、自然晾干后，用乙醇乙醚液固定，室温晾干，保存于－30 ℃冰箱中待测。然后采用免疫组化S-P 法检测骨髓细胞中Survivin 和Livin 蛋白表达情况，操作步骤参照试剂盒说明书进行，并以PBS 液代替一抗作为对照。Survivin和Livin 蛋白鼠抗人单克隆抗体及S-P 免疫组化试剂盒等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 结果判定 以细胞被染成棕黄色且红细胞及背景不着色为阳性，高倍镜(×400)下观察1 000 个细胞，计数阳性细胞数，＜5%为阴性，≥5%为阳性［3］。

1.4 化疗方案选择及疗效评估 急性淋巴细胞白血病采用VDLP 方案(长春新碱、柔红霉素、门冬酰胺酶、强的松)方案进行诱导缓解化疗，急性髓细胞白血病采用DAE 方案(柔红霉素、阿糖胞苷、VP16)或HAD(高三尖衫酯碱、阿糖胞苷、柔红霉素)方案进行诱导缓解治疗。化疗疗效分为完全缓解、部分缓解、未缓解，以完全缓解+部分缓解计算缓解率。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0 进行统计分析，率的比较采用χ2检验，相关性分析选用Pearson 相关性分析方法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达情况 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达阳性率分别为67.4%、69.7%，高于非恶性血液病患儿的6. 7%、13. 3% (χ2= 33. 180、28. 281，P ＜0.05)。见表1。

表1 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达情况n(%)

2.2 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达的相关性 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin蛋白表达呈正相关关系(r =0. 428，P ＜0. 05)。见表2。

表2 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达的相关性

2.3 初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达与化疗缓解率的关系 所有确诊白血病患儿接受白血病化疗方案的常规化疗后，Survivin 和Livin 蛋白阳性患 儿 缓 解 率 分 别 为45. 0% (27/60)、46. 8%(29/62)，低于Survivin 和Livin 蛋白阴性患儿的93.1% (27/29)、96. 3% (26/27)(χ2= 18. 960、19.536，P ＜0.05)。

3 讨论

白血病是严重威胁人类健康生命安全的血液系统恶性克隆性疾病，血液学指标以白血病细胞的失控性增殖为主要表现，正常的造血功能受到抑制。近年来，随着环境污染的加重，白血病的发病率呈逐年上升趋势，且有低龄化趋势，儿童白血病的发病率明显增多。研究［2］证实，细胞凋亡的异常是在白血病的发生发展过程中具有重要作用，细胞凋亡抑制的发生是导致机体白细胞水平的急剧上升的关键。

细胞凋亡蛋白是整个细胞凋亡控制系统的关键控制因素，包括促进凋亡的蛋白和抑制凋亡的蛋白。其中凋亡抑制蛋白是抑制细胞凋亡的一类蛋白，该蛋白氨基末端均包含一个BIR 结构，该蛋白水平异常升高导致细胞凋亡的不足，进而促进肿瘤的发生和进展［3］。Survivin 和Livin 均是凋亡抑制蛋白家族的重要成员。Survivin 的相对分子质量为16 500，为相对分子质量最小的凋亡抑制蛋白，主要通过与其他蛋白结合形成染色体通道蛋白复合体参与调控纺锤体的组装和细胞周期检测点的调控［4］。于广倩等［5］的研究发现，Survivin 蛋白在急性白血病的骨髓细胞中存在高表达，明显高于非血液病患者，且白血病的急性期Survivin 蛋白表达水平高于缓解期。Livin 蛋白分为Livinα 和Livinβ，两者在人体内的表达部位及水平具有明显差异。Livin 蛋白主要通过与其下游效应分子Caspase 结合形成复合物发挥抗凋亡作用，主要Caspase 分子为Caspase3 和Caspase7［6］。Livin 蛋白特异性表达于人的胚胎组织、胎盘组织以及大多数人类实体瘤细胞，在胎儿发育过程中多种组织高表达，如胸腺、脑、肾和肝;在正常成人体内，Livin 蛋白主要表达于心脏、肺、脑、脾、卵巢、骨骼肌和淋巴细胞，但表达水平较低［7］。马彩云等［8］研究发现，Livin 蛋白在急性白血病患儿骨髓细胞中的表达明显高于非恶性血液病患儿，且阳性表达Livin 蛋白的急性白血病患儿的缓解率明显低于阴性表达Livin 蛋白的患儿。

本文结果显示，初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达阳性率分别为67.4%、69.7%，高于非恶性血液病患儿的6.7%、13.3%，提示急性白血病患儿体内存在Survivin 和Livin 蛋白的高表达。初诊急性白血病患儿Survivin 和Livin 蛋白表达呈正相关关系，提示在白血病的发生发展过程中可能具有协同促进作用。Survivin 和Livin 蛋白阳性患儿缓解率分别为45.0%、46.8%，低于Survivin 和Livin 蛋白阴性患儿，提示Survivin 和Livin 蛋白阳性表达患儿可能对化疗不甚敏感。本研究以往研究［6－9］报道的结果相似。

总之，Survivin 和Livin 蛋白在初诊急性白血病患儿中高表达，可能协同参与了儿童急性白血病的发生、发展，两者联合检测可用于儿童急性白血病的辅助诊断，而且根据本文关于化疗缓解率与Survivin 和Livin蛋白缓表达情况的关系研究也可为儿童急性白血病的化疗方案选择提供一定的参考依据。

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