HPLC法同时测定山栀茶中的3种苷类成分

乔 里， 汪石丽， 关焕玉， 廖尚高， 刘丽娜， 李勇军*

（1.贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室，贵州贵阳550004；2.贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州贵阳550004；3.贵州医科大学附属医院，贵州贵阳550004）

HPLC法同时测定山栀茶中的3种苷类成分

乔 里1，3， 汪石丽1， 关焕玉2， 廖尚高2， 刘丽娜1， 李勇军2*

（1.贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室，贵州贵阳550004；2.贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州贵阳550004；3.贵州医科大学附属医院，贵州贵阳550004）

目的 建立HPLC法同时测定山栀茶Pittosporum glabratum Lindl.中3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素-4，4′-O-双-β-D-葡萄糖苷、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷的含有量。方法 山栀茶提取液分析采用Diamosil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长210 nm。结果 这3种成分均达到基线分离，线性关系良好 （r≥0.999 9），加样回收率在98.5%～100.5%之间，RSD均小于3%。结论 该方法灵敏准确、可靠稳定，可用于山栀茶药材的质量评价。

山栀茶；3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷；丁香脂素-4，4′-O-双-β-D-葡萄糖苷；异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷；HPLC

山栀茶为海桐花科海桐花属植物光叶海桐Pittosporum glabratum Lindl.的干燥根［1］，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中，具有镇静、散瘀、止痛等作用，常用于神经衰弱、风湿性关节炎等疾病［1-7］。文献 ［8-10］ 报道，山栀茶主要含有三萜类、木脂素类、环烯醚萜类等成分，其醇提取物具有镇痛和降压作用［11-12］。目前，尚无关于山栀茶质量控制方面的文献报道，本实验根据该植物具有镇静、散瘀止痛的效果，选用镇痛模型来筛选其活性部位，并利用HPLC法对该部位的化学成分进行了研究，结果从中分离得到具有代表性和专属性的苷类成分，分别为3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷 （S1）、丁香脂素-4，4′-O-双-β-D-葡萄糖苷 （S2）、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷 （S3），该方法可用于山栀茶的质量评价。

1 仪器与试药

Prominenece UFLC超快速HPLC色谱仪，包括LC-20AD二元梯度泵、SIL-20A自动进样器、DGU-20A3在线真空脱气机、SPD-20A紫外检测器、CTO-20A柱温箱、LC-Solution色谱工作站（日本岛津公司）；Water Purifier超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）；AE240电子天平 （十万分之一，梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素-4，4′-O-双-β-D-葡萄糖苷、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷（均为本实验室自制，经核磁共振光谱鉴定，纯度以峰面积归一化法计算，均大于98.0%）。乙腈和磷酸均为化学纯、其余试剂均为分析纯 （国药集团化学试剂有限公司）。山栀茶采收于贵州省，经贵阳医学院生药学教研室龙庆德副教授鉴定为光叶海桐Pittosporum glabratum Lindl.的干燥根和茎枝。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；流动相为乙腈 （A）-0.1%磷酸水溶液 （B），梯度洗脱 （0～16 min，12%A；16～19 min，12%～15%A；19～39 min，15%A）；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；紫外检测波长210 nm；进样量10μL。在该色谱条件下，各指标成分色谱峰的分离度均大于1.5，见图1。

2.2 对照品溶液的制备和线性关系考察 精密称取S1、S2、S3适量，加入50%甲醇制成质量浓度分别为45.50、63.50、9.05μg/mL的混合对照品溶液，即得。然后，分别精密吸取1、2、4、8、16、22μL进样，在 “2.1”项色谱条件下测定，以各成分峰面积为纵坐标 （Y），进样量 （μg）为横坐标 （X），进行回归计算，结果S1、S2、S3的回归方程和相关系数分别为Y=1.80×106X-6.07×104（r= 0.999 9）、Y=3.40×106X-1.47×105（r= 0.999 9）、Y=2.10×106X-4.61×104（r= 0.999 9）。由此可知，S1、S2、S3分别在0.045 5～1.001、0.063 5～1.397、0.009 05～0.199 1μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取药材 （批号20121112）粉末 （过40目筛）1.0 g，加入50%甲醇20 mL，称定质量，加热回流提取1 h，放冷，

再称定质量，50%甲醇补足减失质量，振摇混匀，过滤，取续滤液1.5 mL，离心10 min（10 000 r/min），取上清液，即得。

2.4 精密度、稳定性、重复性试验 在 “2.1”项色谱条件下，对同一供试品溶液连续测定6次，计算出S1、S2、S3的RSD分别为0.7%、0.6%、0.7%，表明仪器精密度良好。

取同一供试品溶液适量，在 “2.1”项色谱条件下分别于0.5、1、2、4、8、24 h内测定，记录峰面积，计算出S1、S2、S3的RSD分别为1.2%、0.8%、1.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

精密称取同一批号药材6份，每份1.0 g，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在 “2.1”项色谱条件下进行测定，计算出S1、S2、S3的RSD分别为1.3%、0.5%、1.1%，表明该方法重复性良好。

2.5 加样回收试验 精密称取含有量已知的同一批号药材 （批号20121112）6份，每份0.5 g，分别精密加入含有3种被测成分 （S1 0.011 375 mg/mL、S2 0.017 725 mg/mL、S3 0.003 475 mg/mL）的混合对照品溶液20 mL，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，在 “2.1”项色谱条件下测定，计算各成分的含有量和回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）Tab.1 Resu It of recovery tests（n=6）

2.6 样品测定 精密称取不同产地药材粉末18批，每批1.0 g，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，在 “2.1”项色谱条件下测定，根据外标法进行计算，结果见表2。

表2 样品测定结果Tab.2 Determ ination resu It of sam p Ies

3 讨论

3.1 样品溶液制备 本实验分别以甲醇 （100%、

70%、50%、30%）、70%乙醇为溶剂，用索氏、回流和超声法进行提取，并考察了提取时间。结果发现，50%甲醇回流提取1 h时效率最高。

3.2 检测波长的选择 本实验采用DAD检测器对待测成分在190～400 nm波长范围之内进行紫外扫描，发现3个化合物在210 nm处均有较大吸收，而且峰形好、干扰少、色谱图较理想，故选择210 nm作为检测波长。

3.3 流动相的选择 本实验考察了不同流动相（甲醇-0.1%磷酸水溶液、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-水）对各成分峰型及分离度的影响，发现含甲醇的流动相对S3不能有效分离，并且加入含磷酸的流动相时，基线更平稳。最终选择乙腈-0.1%磷酸水溶液作为流动相。

［1］ 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材民族药材质量标准：2003年版［S］.贵阳：贵州科技出版社，2003：48.

［2］ 中药辞海编辑委员会.中药辞海［M］.北京：中国医药科技出版社，1993：489.

［3］ 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编［M］.北京：人民卫生出版社，1996.

［4］ 国家中医药管理局 《中华本草》编委会.中华本草：第4卷［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：61.

［5］ 国家中医药管理局 《中华本草》编委会.中华本草：苗药卷［M］.上海：上海科学技术出版社，2004：261.

［6］ 江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，2001，184.

［7］ 中国科学院 《中国植物志》编辑委员会.中国植物志：第35卷［M］.北京：科学出版社，1979：11.

［8］ 聂田田，赵焕新，白 虹，等.光叶海桐根的化学成分［J］.中国天然药物，2011，9（3）：180-184.

［9］ 赵焕新，聂田田，郭焕杰，等.光叶海桐根中的一个新三萜类化合物［J］.药学学报，2013，48（6）：887-890.

［10］ Zhao H X，Nie T T，Guo H J，et al.Two new neolignan glycosides from Pittosporum glabratum Lindl.［J］.Phytochem Lett，2012，5（2）：240-243.

［11］ 杨华中，周玉英，肖永新，等.光叶海桐茎叶镇痛作用实验研究［J］.中国现代医学杂志，1996，6（3）：14-15.

［12］ 肖永新，杨华中，周玉英，等.光叶海桐茎叶总皂甙（SPGL）对心肌收缩力及血压的影响［J］.中药药理与临床，1992，8（5）：29-30.

SimuItaneous determ ination of three gIycosides in Pittosporum glabratum by HPLC

QIAO Li1，3， WANG Shi-li1， GUAN Huan-yu2， LIAO Shang-gao2， LIU Li-na1， LIYong-jun2*

（1.Guiyang Medical University，Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，Guiyang 550004，Ghina；2.Guiyang MedicalUniversity，Engineering Research Genter for the Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Ghinese Medicine，Ministry of Education，Guiyang 550004，Ghina；3.The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Ghina）

AIM To establish an HPLCmethod for simultaneously determining the contents of 3，4，5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside，syringaresinol-4，4′-bis-O-β-D-glucopyranoside and isolariciresinol 9′-O-β-D-glucopyranoside in Pittosporum glabratum Lindl.METHODS The analysis of P.glabratum extractwas performed on Diamonsil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）with gradient elution，mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid aqueous solution，flow rate was1.0 mL/min，detection wavelength was set at210 nm，and column temperaturewasmaintained at30℃.RESULTS These three constituents reached the baseline separationswith good linear relationships（r≥0.999 9），whose average recoverieswere in the ranges of 98.5%-100.5%，and RSDswere all less than 3%.CONCLUSION Thismethod is sensible，accurate，reliable and stable，which can be used for the quality evaluation of P.glabratum.

Pittosporum glabratum Lindl.；3，4，5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside；syringaresinol-4，4′-bis-O-β-D-glucopyranoside；isolariciresinol 9′-O-β-D-glucopyranoside；HPLC

R284.1

A

1001-1528（2015）11-2448-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.024

2014-07-02

国家科技支撑计划课题 （2013BAI11B01）；贵州省科学技术基金项目 （20102217）；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项 （黔科合中药字 ［2013］5062，黔科合重G字 ［2013］4001）；贵州医学院院基金 （2012021号）

乔 里（1988—），男，硕士，研究方向为中药质量标准。Tel：15186975613，E-mail：rootulysses@aliyun.com

*通信作者：李勇军 （1973—），男，硕士，教授，研究方向为药效物质基础、中药新药制备工艺及质量标准。Tel：（0851）6908468，E-mail：liyongjun026@126.com