羊水亲子鉴定中STR基因座D5S818二步突变1例

杨璐瑜 张核子 张付瑶 叶宗博 张茵 胡利平

(1.广东华曦法医物证司法鉴定所 广东深圳 518000;2.昆明医科大学 云南昆明 650500)

短串联重复序列(short tandem repeats,STR)是人类的一类重要遗传标记,因其多态性丰富,扩增片断长度短,广泛地应用于亲子鉴定中。但是,STR 基因座在遗传的过程中发生突变的概率较高,因此在鉴定过程中是个不容忽视的问题,要值得注意。笔者在工作中遇一例较罕见的母亲发生二步突变的羊水检材鉴定,现报道如下。

1 案例资料

1.1 案情简介

李某(孕17周+),自然受孕,未确定腹中胎儿父亲是否为其老公,特委托本鉴定所鉴定是否存在亲子关系。

1.2 检验方法

胎儿羊水5ml、男方带毛囊毛发2根、女方血样备用。采用Chelex-100 法分别提取DNA。经PowerPlexR21 (普洛麦格生物技术有限公司)、AGCU EX22(无锡中德美联生物技术有限公司)复合扩增系统以及Investigator ArgusRX-12(德国QIAGEN公司)扩增系统进行扩增,扩增产物在ABI3500型DNA测序仪上电泳,由GeneMapper ID X1.3软件进行结果分析。

2 结果

2.1 22个常染色体STR基因座分型结果

同时应用PowerPlexR21和AGCU EX22复合扩增系统,胎儿与孕妇在D5S818位点的分型结果一致,不符合遗传规律。结果见表1。

表1 22个常染色体STR基因座分型结果

2.2 12个位点X-STR基因座分型结果

分析12位点X-STR基因座检测结果,胎儿的X-STR分型均能从孕妇及可疑父的分型中找到来源,符合X染色体遗传规律,结果见表2。

2.3 STR亲权指数,累计亲权指数及亲权概率的计算

亲权指数(paternity index,PI)、累积亲权指数(cumulative paternity index,CPI)及相对父权概率(relative chance of paternity,RCP)的计算按文献报道的方法计算,计算所使用的相关等位基因分布频率数据来自文献［1-2］和司法部司法鉴定科学技术研究所2014年亲权鉴定能力验证资料中的相关数据,以及无锡中德美联生物技术有限公司所提供的频率表。经统计分析,本例22个STR总CPI值为3.32×1012,累积亲子关系概率(RCP)为99.9999999999%,超过了认定父权的标准,因此可以确定可疑父是胎儿的生物学父亲。

3 讨论

羊水中含有丰富的胎儿细胞成分,是很好的生物学检材,在本案例中,用两个不同厂家的扩增试剂对相同样本进行检验,结果一样,而且孕妇为自然妊娠,因此胎儿与孕妇的亲子关系是确定的,因此可以确定胎儿在D5S818位点发生母源性突变,父权指数应按照符合遗传规律的方法计算。增加的12位点X-STR的基因座未发现不符合遗传规律地情况,进一步验证了孕妇与胎儿之间的亲子关系。X染色体特异性的STR作为特殊的遗传标记具有重要的应用价值,是常染色体STR分型的重要补充方。现有的资料表明,STR突变是DNA 复制滑动的结果或DNA复制的错误修复而造成的,STR突变是符合逐步突变模式(Stepwise Mutation Model,SMM)的,即每次突变只改变一个重复单位,两个或更多个重复单位的变化是在前一次突变基础上发生的,也就是多步突变是逐步形成的。STR基因座90%的突变为一步突变即1个重复单位的加或减,大于10个重复单位的基因座突变相比重复单位小于10的较多;一般的规律是突变来自父方是来自母方的0.7-14倍,多数基因座为3-6倍。本案例中的突变是由11到13,发生了两步突变,并且是母系来源的,国内尚未见报道。因此,在今后的鉴定工作中,在出现可能是突变的情况时,要注意以下几点:①应该用不同批次相同的试剂盒以及不同厂家的试剂盒进行重复验证,保证分型的正确;②如果是二联体,在补充亲生母亲的样本的同时增加STR位点。③必要时可进行测序来验证是否为真的突变。

表2 12个位点X-STR基因座分型结果

[1]周娟娟,洪素云.中国汉族人群15个因座遗传多态性研究及法医学应用[J].中国免疫学杂志,2004,(12):841-842．

[2]黄霞,王芳,王蓉感,等.重庆地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性研究[J].重庆医学,2008,37(1):58-60．