阳江地区地贫初筛（血常规法）阳性家庭发生率与地贫基因检测结果的调查研究

敖 东 李梅桂 唐元红 李 娅

广东省阳江市妇幼保健院，广东阳江 529500

阳江地区地贫初筛（血常规法）阳性家庭发生率与地贫基因检测结果的调查研究

敖 东 李梅桂 唐元红 李 娅

广东省阳江市妇幼保健院，广东阳江 529500

目的 探讨血常规法和基因检测在地中海贫血中的临床价值。 方法 收集阳江地区600对国家免费孕前优生检验标本（疑似地贫），按照操作规程检验上述对象的MCV、MCH，将初筛结果同地贫基因检测结果进行比较。 结果 双方夫妻MCV、MCH下降300对（600人），基因检测确诊519人，符合率86.5%；夫妻单方MCV、MCH下降300对（600人），基因确诊244人，符合率81.33%，单方MCV、MCH正常基因携带率4.0%。 结论 地贫高发地区血常规和基因检测配合应用对地贫的检出有重要的指导意义。

阳江地区；地中海贫血；血常规；地贫基因

地中海贫血（简称地贫），是全球最大的单基因遗传病之一，该病在全球都有分布，也是我国目前最常见的遗传血液病，而广东省的发病率达11.66%，排在全国第2位[1-2]。地贫基因携带者和重型地贫患儿给家庭、社会带来沉重的经济负担和不可估量的精神负担[3]。本研究对阳江地区地贫初筛阳性家庭发生率和地贫基因的检测结果进行调查研究，以期提高该病的检出率，现将其报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2012年6月～2014年8月阳江地区600对（1200人）国家免费孕前优生检验标本（疑似地贫），男600人，女600人，均为夫妻关系，年龄21～36岁，平均（29.8±3.6）岁。

1.2 地贫初筛

采取血常规法检查红细胞平均体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）。检测仪器：西门子血液自动分析仪测定，MCV正常范围80 ～ 90fL，低于80L提示阳性，MCH正常范围27 ～ 31pg，低于27pg提示阳性。

1.3 地贫基因检测

用EDTA-K2抗凝血2mL用全血DNA快速提取试剂从抗凝全血中抽提人基因组DNA，严格按照操作说明进行，所有初筛夫妻的基因检测卡上填写相关资料和MCV、MCH，检测仪器：PCR扩增仪（GeneAmp PCR System 9700），试剂盒（潮州凯普生物化学有限公司）主要成份：α-地贫PCR MIX、α-地贫DNA聚合酶、β-地贫PCR MIX、β-地贫DNA聚合酶、UNG酶、杂交液、WB1、封阻液、酶标液、杂交膜、NBT/BCIP、阴性对照。检验方法：DNA分离提取、配制PCR扩增试剂（含α-地贫和β-地贫扩增试剂）、加样、地贫基因扩增程序（α基因：50℃ 15min，95℃ 10min，然后95℃ 1min，68℃30s，72℃ 30s，共35个循环，72℃延伸5min；β基因条件：50℃ 15min，95℃ 10min，然后94℃ 1min，55℃ 30s，72℃ 30s，共35个循环，72℃延伸5min）、杂交实验前的准备、PCR产物杂交过程显色过程、结果的判定（将扩增产物同地贫基因突变寡核苷酸探针进行反向点杂交，确定基因突变类型）。将反馈回来的地贫基因结果与本中心的筛查结果比对统计。符合率=基因阳性/初筛阳性×100%。

1.4 统计学分析

本研究使用Excel 2003软件对数据进行统计，计数资料用对数、人数和百分比表示。

2 结果

双方夫妻MCV、MCH下降300对（600人），基因检测确诊519人，符合率86.5%，MCV、MCH同时下降用基因检测确诊的夫妻中，α基因异常有311例（-SEA基因缺失253例占81.35%、-α3.7基因缺失37例占11.90%、-α4.2基因缺失9例占2.89%、ααQS/αα基因突变6例占1.93%、αα/ ααWS基因突变6例占1.93%）；β基因异常154例（-17/β基因突变11例占7.14%、-28/β基因突变56例占36.36%、14-15/β4基因突变4例占2.60%、41-42/β基因突变57例占37.01%、71-72/β基因突变9例占5.84%、654/β基因突变17例占11.04%）。αβ混合型地贫27例。519例基因异常中有228例是α同型地贫基因、有76例夫妻是β同型地贫，对子代的遗传机率是： 1/4为正常胎儿，1/2为轻型地贫（同父母一样），而1/4为重型地贫患者。其中重型α地贫患者（血红蛋白Barts病）胎儿大多在30～40周时死于宫内，或早产或流产，有的出生后数小时内死亡。重型β地贫患者出生时接近正常，但6个月后逐渐出现临床症状，而是心力衰竭和肝纤维化及肝功能衰竭，是导致患儿死亡的重要原因之一，多于5岁前死亡，见表1。

夫妻单方MCV、MCH下降300对（600人），基因确诊244人，符合率81.33%，a基因异常有154例（--SEA基因缺失113例占73.38%、-α3.7基因缺失17例占11.04%、-α4.2基因缺失19例占12.34%、ααQS/αα基因突变3例占1.95%、αα/ααWS基因突变2例占1.298%）；β基因异常66例（-17/β基因突变5例占7.58%、-28/β基因突变24例占36.36%、41-42/β基因突变22例占33.33%、71-72/β基因突变4例占6.06%、654/ β基因突变11例占 16.67%），αβ混合型地贫12例。单方血常规正常300对（300人），基因携带率4.0%（12例）。

表1 双方夫妻MCV、MCH下降300对（600人）

从上面的统计来看：阳江地区孕前检查地贫基因携带情况a基因异常以--SEA基因缺失-α3.7基因缺失和为主，非缺失型突变占少数。β基因突变以-28/β基因突变和41-42/β基因突变为主，其它突变也常见。见表2。

表2 夫妻单方MCV、MCH下降300对（600人），基因确诊244人

3 讨论

相关数据统计广东平均每9个人就有地贫基因携带者，基因携带者可出现不同程度贫血，每800个新生儿就有1个可能成为重症患儿[4-5]。由于重症地贫患儿没有特别有效的治疗方法，有的只能靠输血维持生命，有的未出生时或出生后不久便死亡，由此可见地贫给家庭、社会的危害性[6-7]。孕前对夫妻双方进行地贫筛查是降低新生儿出生缺陷避免重症地贫儿的出生的关键。PCR基因检测是判断地贫的金标准，其原理是采用生物素标记的引物分别对α-珠蛋白基因缺失及基因突变区域和β-珠蛋白基因突变区域进行特异性扩增，将扩增产物与标记不同缺失或突变类型地中海贫血探针的尼龙膜在导流杂交仪上进行导流杂交，然后通过化学显色对结果进行判读[8]。但该技术要求条件相对较高，费用大，欠发达地区推广困难[9]，寻找简便、经济、准确性好的初筛方法显得尤为重要。本研究将600对孕前检测夫妻中MCV、MCH同时或单方下降的视为可疑，然后将该结果同基因检测结果进行了对比，结果提示总符合率78.02%，夫妻单方或双方MCV、MCH下降的符合率与其相一致，和谢建渝等[10-11]报道结果相符，研究中夫妻单方MCV、MCH正常的基因携带率4.1%。由此可见MCV、MCH对地贫的筛查具有重要的指导意义，夫妻双方若存在MCV、MCH下降就需要进行基因检测，明确诊断，以避免缺陷新生儿的出生[12]。

综上所述，通过血常规初筛和基因检测的配合应用可排除或诊断双方夫妻是否患有地贫基因，对地贫的检测率大大提高，明显降低新生儿出生缺陷，避免重症地贫儿的出生。

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Investigation of thalassemia screening(blood france)incidence of positive family and thalassemia gene test results for Yangjiang

AO Dong LI Meigui TANG Yuanhong LI Ya
Yangjiang Maternal and Child Care Service Centre of Guangdong Province,Yangjiang 529500,China

Objective To investigate the clinical value of blood france and gene test for thalassemia. Methods 600 pairs of pregnancy eugenic test specimens(suspected thalassemia)were selected from Yangjiang area.The MCV and MCH of the specimen were all detected accordance with the rules.The screening results were then compared with gene test results. Results MCV and MCH of couples decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 519 people.The coincidence rate was 86.5%.MCV and MCH of couples unilateral decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 244 people.The coincidence rate was 81.33%.Gene carrying rate of couples unilateral with normal MCV and MCH was 4.0%. Conclusion Blood application with genetic testing has important guiding significance for thalassemia detection of high thalassemia prone areas.

Yangjiang area;Thalassemia;Blood france;Thalassemia gene

R556

A

2095-0616（2015）07-205-04

2014-11-17）