赤雹根化学成分研究*

毛晓霞，王 萍，赵春颖，佟继铭，于海龙，刘永平△

（1.河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.国药一心制药有限公司）

中医中药

赤雹根化学成分研究*

毛晓霞1，王 萍2，赵春颖1，佟继铭1，于海龙1，刘永平1△

（1.河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.国药一心制药有限公司）

赤雹根；三萜皂苷；Dubioside C；ubioside D；thladiosude-H1

赤雹根为葫芦科植物赤雹（Thladiantha dubia，TDB）的干燥块根，因其具有镇痛抗炎的作用，民间主要用于治疗腰腿痛、软组织扭伤、痛经等多种疼痛，也可用于乳汁不下、乳房胀痛等症，亦有文献报道赤雹根总皂苷具有镇痛作用［1］。赤雹的药用部位为果实和块根，对赤雹果化学成分的研究有一些报道，而研究赤雹根化学成分的报道较少，只有Nagao等［2-3］从中分离到dubioside A-F；而王隶书等［4］从赤雹根的乙酸乙酯部位分离得到3个三萜皂苷类成分。本研究针对赤雹根镇痛活性部位（即赤雹根总皂苷）进行了化学成分的分离和鉴定，从中分离得到3个三萜皂苷类化合物，其中化合物3为首次从赤雹中分离得到。

1 仪器与材料

岛津半制备液相色谱仪，Agilent 1200高效液相色谱仪，Bruker AV400 MHz核磁共振仪，Thermo Scientific Q Exactive LCMS；乙腈（mreda，色谱纯），娃哈哈纯净水，正丁醇、甲醇、甲酸（分析纯，科密欧化学试剂有限公司），薄层制备板和柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）。

赤雹根，2012年10月采集于吉林省四平市，经承德医学院赵春颖教授鉴定为葫芦科植物TDB的干燥块根。标本（CB20121001）存放于承德医学院中药所。

2 方法与结果

2.1 提取与分离 赤雹根药材5kg，用70%乙醇提取，回收乙醇，得水溶液，依次用石油醚、氯仿、水饱和正丁醇萃取。其中正丁醇萃取物过AB-8大孔树脂柱，并依次用10%、30%、70%乙醇洗脱，得70%乙醇洗脱物37g。将70%乙醇洗脱物加入甲醇500ml，超声15min，过滤，得不溶物28g，甲醇溶解物9g。甲醇溶解物进行硅胶柱色谱，以CHCl3-MeOH-H2O （14：7：1）洗脱，结合制备液相，以26%乙腈为流动相，制得化合物1（30mg）；甲醇不溶物进行硅胶柱色谱，以nBuOH- MeOH-H2O（6：1.2：5）上层洗脱，结合制备液相，以32%乙腈-甲酸水（含甲酸0.1%）为流动相，制得化合物2（65mg）、化合物3（23mg）。薄层酸水解：取化合物少量，以甲醇溶解，点于高效薄层板上，置浓盐酸蒸汽中12h，挥干浓盐酸，点标准糖，用氯仿：甲醇：水（体积比7：3：0.5）展开，用邻苯二甲酸苯胺显色。

2.2 结构鉴定 见附图。

2.2.1 化合物1：为白色粉末，易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%浓硫酸-乙醇溶液显紫红色。ESIMS m/z 正分子离子峰，1273［M+Na］+，分子式C59H94O28，1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）显示6个角甲基信号：δH1.33（3H，s），1.09（3H，s），0.92（3H，s）， 0.90（3H，s），0.84（3H，s），0.65（3H，s）和δC26.4、10.3、24.2、15.4、32.8、16.6；双键的信号：δH5.26 （1H，br，s）和δC121.2、143.4；以及醛基信号：δH9.48 （1H，s）和δC210.2。采用1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等谱的综合分析将化合物Ⅰ的苷元的质子和碳信号逐一加以归属。化合物Ⅰ的 13C-NMR谱苷元部分的化学位移数据（表1）与文献［5］中苷元皂树酸的基本一致，因此可以确定化合物Ⅰ的苷元为皂树酸。δC83.4 和δC173.5提示苷元的3和28成苷。

NMR显示五个糖的端基信号δH5.57（1H，s），4.74（1 H，s），4.61（1H，d，J=6Hz），4.42（1H，d，J=7.6Hz），4.20（1H，d，J=7.6Hz） 和δC91.7，99.2，102.3，102.9，102.0，δH1.09 （3H，brs）和δC17.7提示有1个6-去氧糖存在。酸水解结果表明化合物1含有葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳四种糖。采用1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等谱的综合分析将化合物1糖的质子和碳信号逐一加以归属（见表1、2）。综合上述确定化合物1的结构为Dubioside D。

2.2.2 化合物2：为无色晶丝（甲醇），易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%浓硫酸-乙醇溶液显紫红色。FT-ESI-MS：m/z 1367.6107（计算值：1367.6120［M+H］+），分子式为C63H98O32，1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）显示6个角甲基信号δH1.32， 1.06，0.91， 0.89，0.84，0.64和26.4、10.2、24.2、15.4、32.8、16.6。双键的信号：δH5.26（1H，br，s）和δC121.4、143.5；以及醛基信号：δH9.46（1H，s）和δC209.3。NMR显示6个糖的端基信号δH5.57（1H，s，），4.74（1H，s），4.49（1H，d，J=8Hz），4.42（1H，d，J=8Hz），4.27 （1H，d，J=6.4Hz），4.27（1H，d，J=6.4Hz）和δC91.7，99.2，104.4，104.2，104.4，101.6。将化合物2的13C-NMR化学位移数据与文献［1］报道的Dubioside C比较，两者的碳信号数据基本一致，证明两者为同一化合物，因此，鉴定化合物2为Dubioside C。

2.2.3 化合物3：为白色粉末易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%浓硫酸-乙醇溶液显紫红色。FTESI-MS：m/z 1351.6196（计算值：1351.6170［M+H］+），分子 式 为C63H98O31。1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）显示6个角甲基信号δ：1.06，0.89，0.66，1.10，0.88，0.86和25.4、10.1、23.3、15.3、32.7、16.6。双键的信号：δH5.20（1H，br，s）和δC121.5、143.3；以及醛基信号：δH9.45（1H，s）和δC209.2。NMR显示6个糖的端基信号δH：5.38（1H，d，J=4Hz），5.08（1 H，s），4.44（1H，d，J=8Hz），4.42（1H，d，J=8Hz），4.28（1H，d，J=8Hz），4.28（1H，d，J=8Hz）和δC：93.6，99.4，104.8，1 04.2，104.4，101.5。酸水解结果表明化合物3含有葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖、木糖四种糖。综合分析1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等谱确定化合物3含有1个葡萄糖醛酸、1个鼠李糖、1个半乳糖、3个木糖。将化合物3的13C-NMR化学位移数据与文献［6-7］报道的thladiosude-H1比较，两者的碳信号数据基本一致，证明两者为同一化合物，因此，鉴定化合物3为thladiosude-H1。

表1 化合物1-3苷元13C-NMR数据（DMSO-d6，400MHZ）

表2 化合物1-3糖的13C-NMR数据（DMSO-d6，400MHZ）

化合物1

化合物2

化合物3

3 结论

本文采用硅胶柱层析、ODS、制备液相色谱，等方法，对赤雹根总皂苷（此部位为赤雹根的镇痛活性部位）的化学成分进行了分离和鉴定。从中分离得到3个三萜皂苷类化合物，其中化合物3为首次从赤雹中分离得到。这三个化合物是否是赤雹根镇痛抗炎活性成分，尚需进一步的研究。

［1］刘永平，陈建双，张玉玲，等.赤雹根总皂苷镇痛作用研究［J］.辽宁中医杂志，2012，23（5）：1085-1087.

［2］Nagao T， Okabe H， Mihashi K， et al. Studies on theconstituents of Thladiantha dubia BungeⅠ （The structures of dubiosides A，B， and C， the quillaic acidglucuronide saponins isolated from the tuber） ［J］. Chem Pharm Bull， 1989， 37（4）： 925-929.

［3］Nagao T， Tanaka R， Okabe H， et al. Studies on theconstituents of Thladiantha dubia BungeⅡ（Structures of dubiosides D， E and F，neutral saponins of quillaic acidisolated from the tuber） ［J］. Chem Pharm Bull， 1990， 38（2）： 378-381.

［4］王隶书，陈显强，刘大有，等.满药赤雹Thladiantha dubia Bunge化学成分的研究［C］.南宁：全国第三届药用植物化学与中药新药研究技术创新研讨会会务组，2010，125-126.

［5］Gaidi G，Miyamoto T，Rustaiyan A，et al.Three new acylated triterpene saponins from Acathophyllum squarrosum［J］. J Nat Prod， 2001，64（7）：920-924.

［6］李忠荣，明华，徐学平，等.大苞赤的三萜皂甙及葫芦素［J］.云南植物研究，1998，20（3）：379-382.

［7］Rui-lin Nie，Takahiro Tanaka，Mayakoshi， et al.A triterpenoid saponin from Thladiantha hookeri var. pentadactyla［J］.Phytochemisty，1989，28（6）：1711-1715.

R931.6

B

1004-6879（2015）02-0130-03

2015-01-08）

* 河北省高等学校自然科学研究青年基金项目（2010101）；河北省科技计划项目（14272502D）