速康解毒口服溶液对兔皮肤刺激性和过敏性的实验研究

黄　鑫，郝宝成，高旭东，刘建枝，王保海，梁剑平

（1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室，兰州 730050；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所）

疾病防控

速康解毒口服溶液对兔皮肤刺激性和过敏性的实验研究

黄鑫1，郝宝成1，高旭东1，刘建枝2，王保海2，梁剑平1

（1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室，兰州 730050；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所）

试验旨在为评价动物疯草中毒解毒治疗药物——速康解毒口服溶液的临床前应用安全性，为临床推广应用提供实验依据。用速康解毒口服溶液、赋形剂（蒸馏水）局部涂抹大白兔破损皮肤及完整皮肤，并逐日观察症状表现，统计观察结果。用速康解毒口服溶液或赋形剂、2，4-二硝基氯苯（DNCB）对大白兔多次致敏，并于2周后观察大白兔的反应。结果表明：速康解毒口服溶液对家兔完整皮肤刺激反应的平均分值为零，属于无刺激药物，对破损皮肤也无明显刺激；在过敏性实验中，给药组5只家兔中1只有轻微的过敏现象，结合致敏反应评价的分值法和致敏反应发生率，速康解毒口服溶液对家兔皮肤过敏反应的分值为0.2（1/5），致敏率为20%（1/5），具有弱致敏性。结论：速康解毒口服溶液对家兔皮肤无明显刺激性，有轻微过敏现象，属于临床安全药物。

速康解毒口服溶液；皮肤刺激性；皮肤过敏性；安全性

草地是畜牧业发展的重要物质基础，也是农牧民赖以生存的基本生产资料，更是重要的绿色生态屏障，对维护国家生态和食品安全，保护人类生存环境具有十分重要的意义。随着畜牧业的发展，人们对草地自然资源的利用增加，利用方式也多样化，对草地资源利用不当致使疯草等有毒植物迅速蔓延，加之疯草等有毒植物的抗逆性相对较强，与优良牧草产生激烈的生存竞争，造成优良牧草的质量、产量下降，从而破坏了生态平衡，加速草场的退化，阻碍了畜牧业的可持续发展。疯草主要分布于俄罗斯、西班牙、冰岛、美国、加拿大、墨西哥及北非的摩洛哥和埃及等地，其中美国西部疯草危害最严重［1］，种类包括绢毛棘豆、蓝伯氏棘豆（O.lambertii）、斑荚黄芪、密柔毛黄芪（A.mollissimus）等［2］。在我国，疯草主要分布在西南、华北、西北地区，如宁夏、青海、内蒙古、陕西、甘肃、西藏、云南、新疆等省区。据不完全统计，目前，我国疯草面积已经超过了1 100万hm2，约占全国草场面积的2.8%，而且每年都有增加的趋势［3］。我国疯草有45种之多，其中棘豆属23种、黄芪属22种［4］。棘豆属的黄花棘豆、甘肃棘豆、小花棘豆、毛瓣棘豆和冰川棘豆，黄芪属的茎直黄芪和变异黄芪（A.variabilis）［5］都属于危害较大的疯草。

对于动物，疯草最主要的危害是引起家畜疯草中毒，出现精神沉郁、反应迟钝、被毛粗乱、神经调节机能紊乱、母畜流产、公畜不育等［4，6-7］，严重者可导致家畜中毒死亡；病理变化主要为心脏右心室肥大，心肌纤维肿胀、断裂、横纹不清或消失，肝脏充血，神经元、肝细胞、肾脏近曲小管上皮细胞以及肾上腺髓质部的上皮细胞与皮质部的球状带出现明显的空泡变性等［4，8］。由于我国草原分布广、面积大，很难使动物在放牧过程中不采食疯草，因此，只能加强草原畜牧管理，通过防除和利用相结合的方法，才能有效控制家畜的疯草中毒，减少损失。近年来，国内外关于疯草中毒的研究较多，但都主要集中在疯草有毒成分、动物疯草中毒的机理、疯草中毒的防治等方面，虽然已研制出相应的治疗或预防药物，但都存在应用效果不尽人意的地方。西藏自治区农牧科学院和中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所从动物疯草中毒机理出发，经过3年多的研究，研制出了具有良好作用效果的解毒治疗药物速康解毒口服溶液。本研究拟通过动物皮肤刺激实验和过敏实验，为科学评价其安全性提供依据。

1　材料与方法

1.1主要试剂

速康解毒口服溶液（由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所提供）；硫化钠（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司），实验时用蒸馏水配制成浓度为8%的硫化钠水溶剂，避光密封保存；2，4-二硝基氯苯（分析纯，成都西亚试剂有限公司），实验时用分析纯的丙酮配制成1%2，4-二硝基氯苯致敏态和0.1%2，4-二硝基氯苯激发态，避光密封保存；丙酮（分析纯）；赋形剂：蒸馏水。

1.2实验动物

成年、健康日本大耳兔16只，被毛白色，普通级，体重2.0～2.5 kg，雌雄各8只，购自中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物中心。

1.3家兔皮肤刺激实验

1.3.1动物分组及实验前处理取健康白色家兔16只，公母各半，实验前饲养5 d并观察饮食和行为，若正常则按性别、体重随机分为4组，每组4只。一组给药前24 h将家兔背部脊柱两侧被毛剪去，随后用8%硫化钡脱毛，脱毛区皮肤以消毒针头划成小“#”形，至渗血为度，作为破损皮肤组，另一组为完整皮肤组，两组都设赋形剂对照组。

1.3.2给药方法两组动物都在右侧脱毛区涂以速康解毒口服溶液约5 mL，左侧涂赋形剂约5 mL作对照。给药后局部覆盖纱布和保鲜薄膜，并以胶布固定，保持药物与皮肤接触4 h后去除纱布和保鲜薄膜，然后以温水洗去残留药物。每天给药1次，连续5 d。完整皮肤组以同样方法给药。每次去除药物后1 h及再次给药前观察皮肤状态。末次给药及去除药物后1、24、48和72 h再次观察并记录涂抹部位有无红斑和水肿及恢复情况，其评价标准见表1、表2［9-12］。

表1　皮肤刺激反应程度评分标准

表2　皮肤刺激强度评价

1.4家兔皮肤过敏实验

1.4.1动物分组及实验前处理取健康白色家兔15只，实验前饲养5 d并观察饮食和行为，若正常则按性别、体重随机分为3组，每组5只，并对每组实验动物进行编号（标记为1号、2号、3号、4号、5号），实验前24 h将家兔背部脊柱右侧被毛剪去，然后用8%的硫化钠水溶液脱毛，脱毛区面积约50 cm2，备用。

1.4.2致敏接触脱毛次日，第1组涂以速康解毒口服溶液，5 mL/只；第2组在脱毛区涂以1%2，4－二硝基氯苯，2 mL/只；第3组在脱毛区涂上赋形剂（生理盐水），5 mL/只；然后均以纱布和保鲜膜包敷，再用胶布固定，持续6 h后去除纱布和保鲜膜，用温水擦试除去药物。第7天和第14天各组分别用同样方法重复给药1次。

1.4.3激发接触第14天（末次致敏后）在各只家兔左侧背部脱毛约50 cm2，24 h后，第1、2、3组动物左侧脱毛区分别涂以速康解毒口服溶液5 mL、0.1%2，4－二硝基氯苯2 mL和赋形剂5 mL，然后用纱布和保鲜膜覆盖，并用医药胶布固定。6 h后去掉保鲜膜和纱布，再用温水洗去药物，即刻观察，并于24、48、72 h再次观察皮肤过敏反应情况，同时观察动物有无瘙痒、站立不稳等全身性过敏反应［13-15］，按照皮肤过敏反应程度评价标准（见表3、表4）评价各组动物皮肤过敏反应分值，并按照以下公式计算致敏反应发生率及反应平均值［10］。

致敏反应发生率（%）＝出现红斑和水肿的动物例数／受试动物总数×100%

反应平均值=（红斑形成总分＋水肿形成总分）／动物总数

表3　皮肤过敏反应程度评分标准

表4　皮肤致敏性评价标准

2　结果与分析

2.1家兔皮肤刺激实验

通过实验给药和观察得知，完整皮肤组在每次去除药物后1 h和再次给药前以及末次给药后1、24、48和72 h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激反应症状；破损皮肤组给药后第1天给药侧和对照侧均可见划伤部位有轻微红肿，至第4天完全恢复正常，其后每次去除药物后1 h及再次给药前以及末次给药后1、24、48和72 h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激性反应症状（见表5）。

表5　家兔皮肤刺激实验结果

2.2家兔皮肤过敏实验

速康解毒口服溶液和赋形剂在第1、7和14天给药（致敏）后，第14天再次接触此药（激发），即刻观察过敏情况后，在24、48、72 h再进行观察，结果阴性对照组家兔均无红斑或水肿等过敏反应，也无哮喘、站立不稳等全身性过敏反应症状，反应平均值为0，致敏率为0；给药组5只家兔只有1只出现轻微过敏反应，致敏率20%，属于无致敏性药物；阳性致敏组24～72 h内有不同程度的红斑与水肿，反应均值2～5，致敏率100%。表明速康解毒口服溶液经皮肤给药无致敏作用，见表6、表7。

表6　各组受试动物致敏实验结果（n=5）

表7　速康解毒口服溶液对家兔皮肤致敏率

3讨论

在观察期内，速康解毒口服溶液对家兔完整及破损皮肤均未引起明显的红斑或水肿；速康解毒口服溶液组经致敏、激发后无明显过敏现象发生，与阳性对照组比较差异显著，对家兔皮肤无致敏作用。表明速康解毒口服溶液临床给药有较好的安全性。

1）家兔皮肤刺激实验采用的给药方法是每日给药，为确保实验药物与皮肤的接触时间足够，一次至少接触4 h以上，不能过长，否则会影响家兔皮肤的透气性，导致局部皮肤水肿。

2）破损皮肤组的受试动物去毛后，皮肤先用碘伏消毒，然后用无菌针头划“#”字，以轻度渗血为度。为了防止家兔撕扯抓挠给药部位，使药物不能与给药部位充分接触，给药后要用无刺激性胶布和绷带等固定，并分笼饲养。

3）家兔购回后置于恒温、恒湿空调实验室分笼喂养，自由进食、饮水、适应环境5 d后方可用于实验。在实验期间应每日观察家兔的活动情况。

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Skin Irritation and Allergy of Su Kang Detoxification Oral Liquid

HuangXin，HaoBaocheng，LiangJianping，et al
（KeyLaboratoryofNewAnimal DrugProject，Gansu Province/KeyLaboratoryof VeterinaryPharmaceutics Discovery，Ministry ofAgricultural/Lanzhou Institute ofHusbandryand Pharmaceutical Sciences of CAAS，Lanzhou 730050，China）

Toevaluate clinical application securityofdetoxification therapyfor the animal locoweed poisoning-SuKangdetoxification oral liquid，and provide the experimental basis for clinical application.The rabbits＇damaged skin and healthyskin were locally treated with SuKang detoxification oral liquid，excipient（distilled water），and their symptoms were observed day by day.SuKang detoxification oral liquid，excipient，or 2，4-dinitrochlorobenzene was repeatedlyused tosensitize rabbits＇skin.The rabbits＇reaction was observed on the 14th day.In the process of test observation，the complete skin irritation reaction of SuKang detoxification oral liquid on rabbits was less than zero on average，belongs to non stimulating drugs，there was no obvious stimulation to the broken skin；The incidence rates of allergic reaction of excipient，SuKang detoxification oral liquid，and 2，4-dinitrochlorobenzene were 0，20.0%，and 100.0%，respectively.Skin allergic reaction value of SuKang detoxification oral liquid on rabbit was 0.2.SuKang detoxification oral liquid on rabbit skin has a slight allergic phenomenon，without irritation，which belongs to the clinical drug safety.

Su Kangdetoxification oral liquid；skin irritation；skin allergy；security

S858.291

A

2095-3887（2015）01-0037-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.01.012

2014-12-20

国家高新技术研究发展计划（863计划）（2011AA10A214）；西藏横向委托项目“动物疯草中毒解毒新制剂的中试生产”（2013-2014）

黄鑫（1989-），男，在读硕士研究生。

梁剑平（1962-），男，博士生导师。