三都麻竹叶总黄酮的提取及其含量测定

刘康莲，冯定坤，贺银菊，罗骏

（黔南民族师范学院化学与化工系，贵州都匀558000）

三都麻竹叶总黄酮的提取及其含量测定

刘康莲，冯定坤，贺银菊，罗骏

（黔南民族师范学院化学与化工系，贵州都匀558000）

研究麻竹叶中竹叶总黄酮的提取工艺及其影响因素，用超声波法和回流提取法分别对黄酮类物质的提取进行研究对比。以芦丁为对照，竹叶总黄酮得率为考察指标，通过正交试验优先选回流提取竹叶总黄酮的最佳工艺。竹叶黄酮的最佳提取条件：提取时间3 h，乙醇体积分数95%，料液比为1∶25（g∶mL），提取率为1.59%。

麻竹；总黄酮；提取方法；含量测定

竹子为多年生常绿植物，是当今世界最具有使用价值的植物之一，主要分布于南方大部分地区，竹叶为多年生常绿植物竹子的叶，其性淡、微涩、寒，味甘、苦。据报道，竹叶中含有大量对人体有益的活性物质，如黄酮类、酚酸类、蒽醌类、香豆素类、特种氨基酸等，其中酚酸类、蒽醌类、香豆素类具有较强的抑菌杀菌作用。竹叶中提取物的功能因子主要是黄酮类，而且竹叶黄酮安全无毒。因此，目前对竹叶黄酮类物质的提取纯化的研究已成为了一大热点。

本文通过正交试验考察了多种因素对于竹叶黄酮提取效果的影响，探索出较好的提取工艺，实验采用超声波辅助溶剂提取和回流提取两种方法对提取竹叶总黄酮进行分离与纯化并作比较，以期获得有依据的实验数据，为工业化生产提供参考。

1 材料与方法

1．1 材料、试剂与仪器

麻竹叶，产地三都，将其晾干用粉碎机粉碎成粉末备用；芦丁标准品：Sigma公司。5%NaNO2、10% Al（NO3）3、NaOH试液、乙醇、正丙醇、石油醚、（NH4）2SO4，除特殊注明外，均为分析纯。

超声波清洗机-AS20500A：杭州汇尔仪器设备有限公司；TU-1901双光束紫外可见光分光光度计：北京普通仪器责任有限公司；80-1离心沉淀机：北京天创尚邦仪器设备有限公司；RE-2000Z型旋转蒸发仪：郑州英予华仪器有限公司。

1.2 方法

1．2.1 标准曲线的绘制

精密称取经105℃干燥至恒重的芦丁对照品20.01 mg置100 mL量瓶中，用60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.200 1 mg/mL）。精密量取上述对照品溶液配置成0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mL，分别置于25 mL量瓶中，加入5%NaNO2溶液1 mL，静置6 min，加入10%Al（NO3）3溶液1 mL，静置6 min，再加入4%NaOH溶液10 mL，用水定容至刻度，摇匀，即得2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μg/mL的标准溶液，静置15 min后，以空白试剂为参比，分别于510 nm处测定吸光度，测定结果见表1。

表1 不同标准溶液的吸光度值Table 1 The absorbance values of different standard solution

以浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，见图1，求得方程为：A=0.018 3C+0.008 7（R=0.999）。结果表明，该方法在2.00μg/mL～10.00μg/mL范围内线性关系良好。

图1 芦丁对照品的标准曲线Fig．1 The standard curve of control substance of rutin

1.2.2 麻竹叶总黄酮的提取

方法一：超声波辅助溶剂提取

准确称取麻竹叶粉末1.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加人20 mL石油醚超声30 min除去脂溶性成分、色素等。用布氏漏斗抽滤。过滤后得到的残渣室温下挥干石油醚后，按正交试验设计的方案，按一定量的料液比加入不同浓度的乙醇，在80℃水溶液中超声提取一定时间后，过滤，然后将滤液置于容量瓶中用95%乙醇定容至100 mL，即得待测液，用于测定总黄酮的含量。

方法二：回流提取

准确称取麻竹叶粉末1.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加人20 mL石油醚浸泡除去脂溶性成分、色素等。用布氏漏斗抽滤。过滤后得到的残渣室温下挥干石油醚后，按正交试验设计的方案，按一定量的料液比加入不同浓度的乙醇，回流提取一定时间后，过滤，然后将滤液置于容量瓶中用95%乙醇定容至100 mL，即得待测液，用于测定总黄酮的含量。

1.2.3 最佳工艺条件的确定

方法一最佳条件的选择：

选择乙醇作为提取溶剂。因此实验主要研究乙醇体积分数、超声时间、乙醇用量对总黄酮得率的影响。根据影响总黄酮得率的因素确定出它们的最佳范围，再通过正交试验确定最佳的提取条件。

方法二最佳条件的选择：

选择乙醇作为提取溶剂。因此实验主要研究乙醇体积分数、回流提取时间、乙醇用量对总黄酮得率的影响。根据影响总黄酮得率的因素确定出它们的最佳范围，再通过正交试验确定最佳的提取条件。

1.2.4 麻竹叶总黄酮得率的测定

以芦丁为对照品，采用硝酸铝比色法测定麻竹叶提取液中总黄酮得率。取1.0 mL待测液于25 mL比色管中，按1.2.1操作测定其在510 nm处的吸光度，根据标准曲线得出总黄酮浓度，然后计算麻竹叶总黄酮得率。

2 结果与分析

2.1 正交试验

方法一：超声波辅助溶剂提取正交试验

准确称取1.0 g麻竹叶粉末，以超声时间A、乙醇体积分数B、料液比C作为考察的3个因素，各取3个水平，选用L9（34）正交表进行试验，以总黄酮得率为指标，研究3个因素对麻竹叶总黄酮得率的影响。正交试验因素水平和实验结果分别见表2、表3。

表2 正交试验因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal test

通过对正交试验结果进行均值比较和极差分析，得最佳提取条件为A3B3C2，即就是最佳提取的超声波时间40 min、乙醇体积分数95%、料液比为1∶25；对黄酮提取影响的最主要因素为超声波时间，其次是料液比。通过与正交设计表中比较，在正交试验中第9次试验的黄酮得率最高5.92 μg/mL，其提取条件为超声波时间40 min、乙醇体积分数95%、料液比为1∶25，与均值比较结果稳合。

表3 L9（34）正交试验结果与分析Table 3 The results and analysis of L9（34）orthogonal test

方法二：回流提取正交试验

准确称取1.0 g麻竹叶粉末，以超声时间A、乙醇体积分数B、料液比C作为考察的3个因素，各取3个水平，选用L9（34）正交表进行试验，以总黄酮得率为指标，研究3个因素对麻竹叶总黄酮得率的影响。正交试验因素水平和实验结果分别见表4、表5。

表4 正交试验因素水平表Table 4 Factors and levels of orthogonai test

表5 L9（34）正交试验结果与分析Table 5 The results and analysis of L9（34）orthogonal test

通过对正交试验结果进行均值比较和极差分析，得最佳提取条件为A3B3C2，即就是最佳提取的回流时间3.0 h、乙醇体积分数95%、料液比为1∶25；对黄酮提取影响的最主要因素为回流时间，其次是料液比。通过与正交设计表中比较，在正交试验中第9次试验的黄酮得率最高6.26 μg/mL，其提取条件为回流时间3.0 h、乙醇体积分数95%、料液比为1∶25，与均值比较结果稳合。

2.2 提取方法比较

通过对超声辅助溶剂法与回流提取法对麻竹叶总黄酮的提取实验，在相同的溶剂和料液比的条件下，超声辅助溶剂法总黄酮的提取率最高的1.48%，而回流提取法为1.59%。因此，回流提取法优于超声辅助溶剂法，所以在提取麻竹叶总黄酮时，选择回流提取法。

3 结论

竹叶黄酮的最佳提取条件：提取时间3h，乙醇体积分数95%，料液比为1∶25（g∶mL）。以芦丁标准品做对照，通过紫外法分别测定不同溶剂提取所得提取物中总黄酮的含量，经过试验对比后得出结论。通过本实验，发现测量黄酮的含量时，叶绿素是影响测量准确性的重要因素，通过用石油醚萃取的方法，可以消除叶绿素的影响。同时，也会影响黄酮得率。

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Determination of the Total Flavonoids and Optimization of Dendrocalamus Latiflorus Munro the Leaves of Preparation Process in Sandu

LIU Kang-lian，FENG Ding-kun，HE Yin-ju，LUO Jun
（Department of chemistry and chemicd Engineering，Qiannan Normal college for Nationalities，Duyun 558000，Guizhou，China）

The bamboo leaf flavone in Dendrocalamus latiflorus Munro the extraction technology and its influencing factors，using ultrasonic method and reflux extraction respectively on the extraction of flavonoids of study contrast.Rutin as control，bamboo leaf flavone yield as the inspection index，through the orthogonal test is preferred to choose reflux extraction bamboo leaf flavone the best process.Bamboo leaf flavone the best extraction conditions：extracting time 3 h，ethanol volume fraction of 95%，feed liquid ratio is o 1∶25（g∶mL），extraction yield was 1.59%.

Dendrocalamus latiflorus Munro；flavone；extraction process；determination of content

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.04.016

2014-03-19

2013年贵州省科技联合基金项目（黔科剑字LKQS［2013］02号）

刘康莲（1967—），女（布依），副教授，学士，研究方向：主要从事天然产物提取研究。