中国南海海绵Haliclona sp.中化学成分的研究

许娇娇，靳德军，王佳，祁菁，赵川，乔卫，段宏泉，，唐生安

（1.天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津 300070；2.海南医学院药学院，海口，571199；3.天津医科大学基础医学研究中心，天津 300070）

中国南海海绵Haliclona sp.中化学成分的研究

许娇娇1，靳德军2，王佳1，祁菁1，赵川3，乔卫1，段宏泉1，3，唐生安1

（1.天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津 300070；2.海南医学院药学院，海口，571199；3.天津医科大学基础医学研究中心，天津 300070）

目的：对采自中国广西涠洲岛海域海绵Haliclona sp.的化学成分进行分离和结构鉴定。方法：采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱、凝胶柱色谱、半制备HPLC、重结晶等方法分离纯化，通过波谱方法分析，并对照文献来鉴定化合物的结构。结果:从海绵Haliclona sp.中分离的5个化合物，依次鉴定为孕甾烯醇酮（1），24-亚甲基胆甾醇（2），胆甾醇（3），苯丙酸（4），邻二苯甲酸丁酯（5）。结论:4，5为首次从该属海绵中分离得到的化合物。

南海海绵；Haliclona sp.；化学成分

在海洋天然药物的研究中，海绵占据着非常重要的地位。Haliclona属海绵含有化学结构新颖的化合物，且很多化合物具有抗菌［1］、抗炎［2］、抗污损［3］等生物活性。Haliclona属海绵含有多种成分，大部分包括甾醇［4］、生物碱类［5］、萜类［6］、大环内酯类［7］等物质。本文采用各种天然药物化学研究手段，对采自中国广西涠洲岛海域海绵Haliclona sp.进行提取、分离和结构鉴定，通过硅胶柱色谱、制备薄层色谱、凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法对各萃取组分进行系统分离纯化得到单体化合物，采用核磁共振波谱等有机波谱方法分析，并与文献资料进行对比确定单体化合物的结构。

1 材料与方法

1.1 仪器、试剂及材料Brucker AV400核磁共振仪（TMS内标）；旋光仪：MC 241 digital polarimeter （PERKIN-ELMER）；液质联用色谱仪：Alliance 2695，Quattro Micro TM ESI（Water）；半制备高效液相色谱仪：日本分光公司（JASCO），PU-2089（泵），RI-2031和UV-2075（检测器）；制备HPLC色谱柱，C-18反相色谱柱：YMC-PackODS-ASH-343-5（20 mm×250 mm）；氚代试剂（ALDRICH公司）；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工生产，所用试剂均系分析纯。

本文所用海绵采自于中国广西涠洲岛海域，经天津医科大学药学院唐生安博士鉴定为南海海绵Haliclona sp.，标本编号为WZA-11，保存于天津医科大学药学院。

1.2 提取分离将海绵Haliclona sp.（干重95.0 g）均匀切碎，加入95％乙醇（500 mL）浸泡3次，合并浸泡液，减压浓缩浸泡液得总提取物3.7 g。

将总提取物通过凝胶（Toyopearl HW-40）柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）为流动相洗脱，得到6个组分（0101-0106）。0105组分采用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（100∶1，9∶1，8：2，1∶1）为流动相梯度洗脱，经分离得到化合物1（2.3 mg）。0104组分（1.5 g）采用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（98∶2）为流动相洗脱，分离得到组分（0401-0408）。0403组分（70.9 mg）采用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（96∶4）为流动相洗脱，得到化合物2（2.1 mg），3（20.4 mg）。0401组分（88.0 mg）进一步采用硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（97∶3）为流动相洗脱，得到化合物5（17.4 mg）。0106组分（250.0 mg）采用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（100∶1，9∶1，8∶2，1∶1）为流动相梯度洗脱，分离得到组分（1001-1009），其中1003组分（12.0 mg）进一步重结晶得到化合物4（2.1 mg）。

2 结果

从南海海绵Haliclona sp.提取物中分离得到5个化合物，见图1。

图1 从中国南海海绵Haliclona sp.中分离得到的化合物Fig 1Compounds 1-5 isolated from Haliclona sp.

2.1 化合物1孕甾烯醇酮，无色针状晶体，EIMS给出准分子离子m/z：316［M］+，结合1H NMR和13C NMR光谱推测其分子式为：C21H32O2。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1个烯质子信号δH5.36（1H，brs，H-6），1个羟基信号δH3.67（1H，m，H-3），1个CH信号δH2.53（1H，m，H-17）及3个CH3信号δH0.63 （3H，s，CH3-18），1.00（3H，s，CH3-19），2.13（3H，s，CH3-21）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）共给出21个碳原子信号，分别为：δC37.3（C-1），31.9（C-2），71.7 （C-3），42.2（C-4），140.8（C-5），121.4（C-6），31.9 （C-7），31.8（C-8），50.0（C-9），36.5（C-10），21.1（C-11），38.9（C-12），44.0（C-13），56.9（C-14），22.9（C-15），24.5（C-16），63.7（C-17），13.2（C-18），19.4（C-19），209.6（C-20），31.9（C-21）。

2.2 化合物224-亚甲基胆甾醇，白色针状晶体，ESI-MS给出准分子离子峰m/z：399［M+H］+，结合1H NMR和13C NMR光谱推测其分子式为：C28H46O。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1个烯质子信号δH5.36（1H，s，H-6），1个羟基信号δH3.53（1H，m，H-3），2个末端双键信号δH4.72（1H，brs，H-28a），4.65 （1H，brs，H-28b），1个CH信号δH2.36（1H，m，H-17）及5个CH3信号δH0.68（3H，s，CH3-18），1.01（3H，s，CH3-19），0.95（3H，d，J=6.4 Hz，CH3-21），1.03（6H，m，CH3-26，CH3-27）。13C NMR（100MHz，CDC13）共给出28个碳原子信号，分别为：δC37.3 （C-1），31.6（C-2），71.8（C-3），42.4（C-4），140.7（C-5），121.7（C-6），31.9（C-7），31.6（C-8），50.1（C-9），36.5（C-10），21.2（C-11），39.8（C-12），42.3（C-13），56.8（C-14），24.6（C-15），28.4（C-16），56.0（C-17），12.0（C-18），19.6（C-19），35.8（C-20），18.9（C-21），34.7（C-22），30.1（C-23），157.2（C-24），33.8（C-25），22.0（C-26），22.2（C-27），106.0（C-28）。

2.3 化合物3胆甾醇，白色针状晶体，EIMS给出准分子离子峰m/z：386［M］+，结合1H NMR和13C NMR光谱推测其分子式为：C27H46O。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1个烯质子信号，δH5.28（1H，brs，H-6），1个羟基信号δH3.49（1H，m，H-3），1个CH信号δH2.30（1H，m，H-17）和5个CH3信号δH0.61（3H，s，CH3-18），1.01（3H，s，CH3-19），0.96（3H，s，CH3-21），1.03（3H，m，CH3-26），1.02（3H，m，CH3-27）。

2.4 化合物4苯丙酸，白色腊状物，ESI-MS给出准分子离子峰m/z：173［M+Na］+，结合1H NMR和13C NMR光谱推测其分子式为：C9H10O2。1H NMR（400 MHz，CDCl3）芳香质子信号δH7.27（2H，m，H-2′，6′），7.22（3H，m，H-3′，4′，5′）和2个CH2信号δH2.82（2H，t，J=7.8 Hz，CH2-2），2.52（2H，t，J=7.8 Hz，CH2-3）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）共给出6个碳原子信号，分别为：δC179.4（C-1），35.6（C-2），30.5（C-3），141.0（C-1′），128.2（C-2′），128.1（C-3′），125.8 （C-4′），128.2（C-5′），128.2（C-6′）。

2.5 化合物5邻二苯甲酸丁酯，无色油状物，EIMS给出准分子离子峰m/z：278［M］+，结合1H NMR和13C NMR光谱推测其分子式为：C16H22O4。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中4个芳香质子信号δH7.66 （2H，dd，J=5.5，3.2 Hz，H-3，H-6），7.48（2H，dd，J= 5.5，3.2 Hz，H-4，H-5），2个CH2信号连氧氢信号，δH4.26（4H，t，J=6.8 Hz，H-1′，1″），4个CH2信号δH1.73（4H，m，H-2′，2″），δH1.42（4H，m，H-3′，3″）和2个末端CH3信号δH0.92（6H，t，J=7.3 Hz，H-4′，4″）。

3 讨论

本文对采自中国广西涠洲岛海域的海绵Haliclona sp.进行化学成分分离、纯化并得到单体化合物。通过核磁共振波谱、质谱等方法，确定化合物的平面结构及其立体构型。结果表明，从海绵Haliclona sp.中分离的5个化合物，1H NMR和13C NMR数据与文献报道一致，依次鉴定为孕甾烯醇酮（1）［8］、24-亚甲基胆甾醇（2）［9-10］、胆甾醇（3）［11］、苯丙酸（4）［12］、邻二苯甲酸丁酯（5）［13］。当前海绵已经成为海洋药物研究的热点之一，本文丰富了Haliclona属海绵化学成分的研究内容。

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（2015-01-22收稿）

Studies on chemical constituents from the South China Sea sponge Haliclona sp.

XU Jiao-jiao1，JIN De-jun2，WANG Jia1，QI Jing1，ZHAO Chuan3，QIAO Wei1，DUAN Hong-quan1，3，TANG Sheng-an1
（1.School of Pharmacy，Tianjin Medical University，Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics（Theranostics），Tianjin 300070，China；2.School of Pharmaceutical Science，Hainan Medical University，Haikou 571199，China；3.Research Center of Basic Medical Sciences，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

Objective：To study the chemical constituents from the South China Sea sponge Haliclona sp..Methods:The isolation and purification of the compounds were performed by column chromatography techniques with silica gel，PTLC，Toyopearl HW-40 and semipreparative HPLC.Their structures were determined mainly by spectral data analysis and comparison with literatures.Results:Five compounds had been isolated and their structures were identified as pregnenolone（1），24-methylenecholesterol（2），cholesterol（3），phenylpropionic acid（4），dibutylphthalat（5）.Conclusion:Compounds 4，5 have been isolated for the first time from the genus Haliclona.

marine sponge；Haliclona sp.；chemical constitunents

R9

A

1006-8147（2015）05-0385-03

国家自然科学基金资助项目（81102371），天津市自然科学基金资助项目（10JCYBJC15000）

许娇娇（1989-），女，硕士在读，研究方向：天然产物有效分离、分析研究；通信作者：唐生安，E-mail:tangshengan@tijmu.edu.cn。