阿莫罗芬二元醇脂质体体外透皮特性的研究

王 慧 张晓红 张 燕 阎德胜 杨苗苗 权 伟 戴尊孝*

（西安市精神卫生中心，陕西 西安 710061）

阿莫罗芬二元醇脂质体体外透皮特性的研究

王 慧 张晓红 张 燕 阎德胜 杨苗苗 权 伟 戴尊孝*

（西安市精神卫生中心，陕西 西安 710061）

目的 制备阿莫罗芬二元醇脂质体并对其进行体外评价。方法 采用注入法制备阿莫罗芬二元醇脂质体，以包封率为指标，考察不同比例的乙醇与丙二醇对其包封率的影响；采用Franz扩散池进行离体皮肤渗透实验，测定接受液中阿莫罗芬的累计渗透百分比。结果 当乙醇∶丙二醇（7∶3）时，其包封率最高为（90.18±3.21）%，且有较好的稳定性。体外经皮渗透实验表明：乙醇∶丙二醇（7∶3）时，药物的透皮量最大。结论 乙醇∶丙二醇（7∶3）时，二元醇脂质体明显挺高药物的透皮量及稳定性。

阿莫罗芬；二元醇脂质体；包封率；体外释放；经皮渗透性

甲癣是真菌侵犯趾甲而引起的皮肤类传染病，多表现为趾甲变厚。治疗灰指甲一定要让药物能渗透到甲床下，杀灭真菌。乙醇脂质体有很好的柔性，可携带药物渗透到甲床下，杀灭真菌，是皮肤局部用药较理想的载体[1]。阿莫罗芬为广谱高效抗真菌药，具有很强的杀菌活性。为此，本实验研制阿莫罗芬二元醇脂质体并通过体外透皮实验研究体外释药及透皮行为。

1　仪器与材料

日本岛津高效液相色谱系统（日本岛津公司），JEM-1200EX型透射电镜（日本电子公司），激光动态光散射仪（英国），德国Leica Tcs Sp2型激光共聚焦显微镜（Leica公司，德国），RYJ-6B型药物透皮扩散试验仪（上海黄海药检仪器厂），RC-3B药物溶出仪（天津大学无限电厂制造），RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣医械厂）。

盐酸阿莫罗芬原料药（重庆博腾制药业，批号：101201），大豆磷脂（PC含量90%，常州四药制药有限公司，批号：1208S02），透析袋（截留分子量8000～14000，上海通善生物科技有限公司），昆明种小鼠（合格证号SCXK（甘）14-006）。

2　方法与结果

2.1阿莫罗芬二元醇脂质体的制备：将阿莫罗芬与磷脂溶解于醇相中（乙醇、丙二醇不同比列混合），采用注入法[2]制备阿莫罗芬二元醇脂质体。

2.2不同比例乙醇与丙二醇对二元醇脂质体大小及包封率的影响，结果见表1。

由表1可见，当乙醇：丙二醇=7∶3，此时包封率最高。

2.3含量测定

2.3.1测定方法的建立：VP-ODS C18柱（150 mm×4.6，5 μm，岛津，日本）；流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵-三乙胺（30∶60∶0.1，v/v/v）；流速：1 mL/min；检测波长：365 nm；进样量：20 μL。

2.3.2标准曲线的制备：精密称取阿莫罗芬对照品20 μg，置于50 mL容量瓶，甲醇溶解，用甲醇稀释适量对照品溶液，制成不同浓度（6.25～400 μg/L）对照品溶液。在上述条件下，依次进色谱柱。以浓度（C）为X轴，峰面积（A）为Y轴，进行线性回归，得标准曲线回归方程：Y=87345X+35671，r2=0.9997，阿莫罗芬的浓度在6.25～400 μg/L范围内线性关系良好。

2.3.3精密度试验：精密量取适量阿莫罗芬对照品溶液，甲醇稀释对照品溶液至低、中、高3种浓度，考察日内及日间精密度，日内平均精密度为2.03%，日间平均精密度2.18%。表明该方法精密度良好。

2.3.4回收率：将空白二元醇脂质体置于5 mL容量瓶，无水乙醇分别稀释、振荡、离心、进样测定。计算得回收率平均值为99.70%，RSD平均值为0.91%。该方法回收率良好。

2.4阿莫罗芬二元醇脂质体包封率测定：精密量取阿莫罗芬二元醇脂质体，溶解于无水乙醇中，摇匀，过微孔滤膜，进样，高效液相测定药物总浓度，计算总药物质量（H1），再精密量取阿莫罗芬二元醇脂质体置于透析袋中，扎紧透析袋两头，放入磷酸盐缓冲液中，搅拌、取样、进样，测定药物浓度，计算药物质量（H2），计算乙醇脂质体的包封率（EE%）。EE%=（H1–H2）/H1×100%。

2.5离体皮肤渗透实验

2.5.1离体小鼠皮肤的制备：取健康小鼠，饲养一周，剪去背部毛，断颈处死，立即剥离背部皮肤，去除皮下组织，生理盐水冲洗、浸泡，贮藏与4 ℃冰箱中备用。

2.5.2体外经皮渗透实验[3]：本实验在Franz扩散池中进行。供给室和接收室之间固定离体皮肤，磷酸盐缓冲液为接受液。分别取不同二元醇脂质体滴于与接受液接触的离体皮肤上，并将接收池置于恒温水浴中（36±2） ℃，电磁搅拌。于不同时间精密量取2 mL接受液，同时补充等量恒温的磷酸盐缓冲液。过滤、进样测定含量，结果可知，不同二元醇脂质体的渗透量有显著差异，而乙醇∶丙二醇=7∶3时，药物的透皮量最大。

2.6稳定性试验：阿莫罗芬二元醇脂质体封装于锥形瓶中，放于冰箱（4 ℃）及室温下，每个月用动态光散射法测量样品的粒径及粒径分布，同时电镜观察乙醇脂质体结构，测定3个月后室温放置包封率（85.89±5.87）%。结果表明本品稳定性良好。

3　结论

注入法制备的二元醇脂质体形状均匀。当乙醇∶丙二醇=7∶3时，药物的透皮量最大，此时包封率最高（90.18±3.21）%，且室温放置3个月稳定性显示良好。因而，阿莫罗芬二元醇脂质体有望开发成为治疗甲癣的有效制剂。

[1] Baker RW,Santus G,Fridman SV.Method and therapeutic system for smoking cessation [J].Drug Dev Ind Pharm,2002,26(5):721-725.

[2] Beletsi Z.Panagi,PLGA-mPEG nanoparticles of cisplatin: in vitro nanoparticle degradation,in vitro drug release and in vivo drug residence in blood properties[J].Control Release,2002,79(1/3):123-135.

[3] 齐宪荣,刘明辉,张克斌,等.硝酸益康唑脂质体凝胶的释放和经皮渗透性研究[J ].中国新药杂志,2001,10 (7):507-510.

Amorolfine Binary Ethosomes in Vitro Transdermal Peneatration

WANG Hui, ZHANG Xiao-hong , ZHANG Yan, YAN De-sheng, YANG Miao-miao, QUAN Wei, DAI Zun-xiao
(Xi'an Mental Health Center, Xi’an 710061, China)

Objective To prepare and evaluation amorolfine binary ethosomes. Methods Ethanol infusing method was used to prepare amorolfine binary ethosomes. Effects of different proportion of ethanol and propylene glycol on the entrapment efficiency. The release rate of drug in rat skin was determined by Franz diffusion cells. Results When ethanol∶propylene glycol (7∶3), the encapsulation rate was the highest (90.18±3.21)%, and has better stability. Transdermal experiments show that: ethanol:propylene glycol (7∶3), the largest amount of transdermal drug. Conclusion Ethanol:propylene glycol (7∶3), binary ethosomes was quite transdermal amount and high stability of drugs.

Amorolfine； Binary ethosomes； Encapsulation efficiency； Release； Pereutaoeous permeation

R914

B

1671-8194（2015）36-0012-02

表1不同比例乙醇与丙二醇对二元醇脂质体大小及包封率的影响

NoAmorolfine(%,w/v)PC(%,w/v)ETOH:PGsize(nm)EE(%) 1 3 3 10∶0108±3.288.17±1.11 2 9∶1106±16.088.42±12.75 3 3 3 7∶3105±22.090.18±3.21 3 3 4 5∶5100±13.085.13±13.87 5 3 3 3∶7176±23.071.40±14.24 3 3 6 1∶9325±12.660.74±11.56 7 3 3 0∶10467±31.952.87±26/79 3 3