延胡索醇提工艺的优选

胡俊明蒋晓煌陈卫红* 余 辉

（1 湖南省平江县大坪卫生院，湖南 平江 414509；2 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；3 湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005）

延胡索醇提工艺的优选

胡俊明1蒋晓煌2陈卫红3* 余 辉3

（1 湖南省平江县大坪卫生院，湖南 平江 414509；2 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；3 湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005）

目的 优选延胡索的醇提最佳工艺。方法 以延胡索乙素含量和醇溶性浸出物为评价指标，采用正交设计法优选延胡索的提取工艺。结果 延胡索的最佳提取工艺为：粗粉，加75%乙醇提取2次，第1次加9倍量醇提取1.5 h，第2次加7倍量醇提取1.0 h。结论 优选出的工艺简单可行，可用于延胡索的提取。

延胡索；正交设计；提取工艺；延胡索乙素；高效液相色谱法

延胡素为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎。具有活血，行气，止痛。用于胸胁、脘腹疼痛，胸痹心痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛[1]。主要产于浙江和江苏，其块茎含延胡索甲素、乙素、丙素、丑素等，以及小蘖碱、去氢延胡索碱等多种生物碱[2-4]。延胡索甲素、乙素、丑素均有镇痛作用，其中以左旋延胡索乙素（即颅痛定）的镇痛作用较明显[5-6]。本实验以延胡索乙素含量和醇溶性浸出物为评价指标，采用正交设计法优选其醇提工艺，为延胡索的提取工艺提供实验数据。

1　材 料

1.1仪器：1260型高效液相色谱仪（包括Diamonsil IC18色谱柱250× 4.6 mm，5 μm，Agilent LC/LCMS色谱工作站，美国安捷伦公司）；UV-2000型紫外分光光度计（日本岛津）；EX224ZH型1/万电子天平（美国奥豪斯公司）；DK-S22电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（天津华鑫仪器厂）；FZ102型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2试剂：延胡索乙素（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号110733-201309）；色谱纯甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司；批号21021106）；其他试剂均为分析纯；水为高纯水。

1.3药材：延胡索购于湖南三湘饮片有限公司，由湖南省药品检验所方石林主任药师鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎。

2　方法与结果

2.1色谱条件[1]：色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-苯基液相色谱柱（250×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55∶45）；检测波长为280 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。

2.2对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成45 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备：将正交实验所定容至500 mL的提取液，过0.45 μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系的考察：精密吸取延胡索乙素对照品溶液2、5、10、15、20 μL依次进样，测定峰面积，以延胡索乙素质量作为自变量X，峰面积作为因变量Y进行线性回归，得回归方程为：y=1312.9 x-76.384，r=0.9996。结果延胡索乙素在0.09～0.9 μg之间线性关系良好。

2.4.2精密度实验：精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定其吸收峰面积，结果其峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.95%，说明该仪器精密度良好。

2.4.3稳定性实验：精密吸取供试品溶液10 μL于0、2、4、6、8、12、24 h进样，测定其吸收峰面积，RSD=1.24%。实验表明，供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.4.4加样回收率实验：精密称取已知含量（0.08%）的同一批延胡索粗粉约0.25 g 6份，精密称定，其中两份加入0.1 mg/mL的延胡索乙素对照品溶液2.0 mL，按《中国药典》方法分别制备供试品溶液，再依法测定延胡索乙素的吸收峰面积，计算回收率，为98.32%，实验结果表明，该含量测定方法回收率高，符合测定要求。

2.4.5样品的含量测定：精密吸取正交设计9个样品供试品溶液与对照品各10 μL，分别注入高效液相色谱仪中，同上述色谱条件测定延胡索乙素的峰面积，外标法计算含量。

2.5正交试验

2.5.1因素水平表经预试实验和文献报道，影响延胡索醇提的因素主要有：药物细度、乙醇浓度、加醇量与提取时间，故选择L9（34）正交

表2　实验方案与结果

表，探讨以上四因素对延胡索提取的影响，其因素水平设定见表1。

表1　因素与水平

2.5.2表头设计称取延胡索粗粒（未切、未粉碎的亘货）20 g 3份、粗粉（全部通过二号筛，但混有能通过四号筛不超过40%）20 g 3份、细粉（全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%）20 g 3份，分别按照表1的因素水平与表2的组合，加5倍量、7倍量或9倍量55%、75%、95%的乙醇提取1 h、1.5 h或2 h，滤过；再按括号内的加醇量与提取时间提取第二次，滤过，合并滤液，定容至500 mL，摇匀，供测定延胡索乙素的含量；精密吸取醇提液50 mL，置已干燥恒重的蒸发皿中，置水浴上蒸干，再置105 ℃烘箱干燥3 h，置玻璃干燥器中冷却30 min，精密称定重量，计算浸出百分含量，结果见表2。

2.5.3数据处理：按照文献[7]方法进行处理，其2个指标相互独立，且都是越大越好，故全概率积分等于2个指标全概率评分之和，其全概率评分公式：与全概率积分公式：

P（Bi）=Xi延胡索乙素/∑Xi延胡索乙素+Xi浸出物/∑Xi浸出物

对表2数据进行方差分析，结果见表3。

表3　方差分析表

由直观分析结果可见，各因素对延胡索乙素提取率的影响效果顺序为A＞B＞C＞D，最佳组合为A2B2C3D1；方差分析结果表明，A、B二因素对延胡索乙素提取率具有显著差异 （P＜0.05），C、D二因素对延胡索乙素提取率无统计学意义。综合以上分析，最佳提取工艺为粗粉，加9倍量75%乙醇提取1.5 h，第二次加7倍量75%乙醇提取1 h。

2.5.4验证试验：取100 g延胡索三份，按照最佳工艺进行放大验证，测定方法同上，结果延胡索乙素平均含量0.08%，浸出物15.9%。验证试验结果2个指标均比正交试验9个试验号中最大的还稍大，因此，优选出的工艺条件可靠、合理、稳定。

3　讨 论

影响延胡索提取的主要条件为粉末粗细、乙醇浓度、提取时间、温度。通过正交实验确定了延胡索的最佳提取工艺为：延胡索粗粉，加75%乙醇提取2次，第一次加9倍量提取1.5 h，第二次加7倍量提取1 h。

从理论上讲，粉末越细，表面积越大，提取效率越高，但是，本实验细粉的提取率反而不如粗粉高，也许是细粉传热不好，易导致爆沸和烧锅所致，再加之细粉在过滤时，药粉吸附药液较多，导致部分成分损失，故延胡索提取时，其粉末不宜太细，但是不切不粉碎的亘货，提取效率更差。

延胡索的提取工艺报道较多，大多是考察醇浓度、加醇量、提取时间[8-9]与提取次数[10-12]，有用渗漉法提取的，以浸渍时间（A）、乙醇用量（B）、渗漉速度（C）为考察因素进行工艺优选[13]，有比较渗漉提取、回流提取与动态逆流提取三种方法，认为后者提取效率高，成本低[14]；有用超临界CO2流体萃取法提取延胡索乙素的报道[15-16]。但是对其粉末细度作为考察因素未见，从扩散公式可以看出，粉末细度对提取效率影响较大，本实验对其粉末细度进行考察，结果，对延胡索乙素含量与醇溶性浸出物具有显著影响。

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Optimization ExtractionTechnology of Rhizoma Corydalis

HU Jun-ming1, JIANG Xiao-huang2, CHEN Wei-hong3, YU Hui3
(1 Dapingxiang Health Hospital of Pingjang, Pingjiang 414509, China; 2 Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208, China; 3 The Second Affiliated Hospital of Hunan University of TCM， Changsha 410005， China）

Objective In order to select the best alcohol extraction of Rhizoma corydalis. Methods Taking the indexes of Tetrahydropalmatine and extract alcohol solublility, the ethanol extraction technology of Rhizoma corydalis were optimizated with orthogonal design test. Results The best extraction process were thick powder，with 75% ethanol extract twice， first 9 times the amount of ethanol extraction for 1.5 h， second 7 times ethanol extraction of 1.0 h. Conclusion The process is simple and feasible, Can be used for the extraction of rhizoma corydalis.

Rhizoma corydalis; Orthogonal design; Extract technics; Tetrahydropalmatine; HPLC

R282.710.3

B

1671-8194（2015）33-0004-02

湖南省科技厅资助项目（2013SK3104）；国家中医药管理局重点学科资助项目