HPLC法测定人参健脾丸中橙皮苷的含量

北京市平谷区食品药品安全监控中心（101200）刘红玉 杨旭 刘志新 范保瑞 马逢伯 张悦

人参健脾丸是由人参、白术及陈皮等11味药组成，用于治疗脾胃虚弱所致的饮食不化、脘闷嘈杂、恶心呕吐、腹痛便溏、不思饮食、体弱倦怠等病症。2010版《中国药典》[1]及文献报道[2]均采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量，以控制药品质量。但其供试品溶液制备方法均为索氏提取器中加石油醚（60～90℃）加热提取3小时，再用甲醇加热提取5小时，方法用时较长，样品易损失，不利于日常检验[3]。本试验采用超声法制备人参健脾丸的供试品溶液，测定其橙皮苷含量，操作简单，用时短并且节省化学试剂，利于环境保护。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津公司LC-2010AHT高效液相色谱仪，LC-2010 Detector检测器。

1.2 药品试剂 人参健脾丸(药店购买2个厂家的人参健脾丸)；水：UP水；其余试剂均为色谱纯。对照品：橙皮苷（中国食品药品检定研究院，批号110721-201316，95.3%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶Waters symmetry C18（5μm 4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-醋酸-水（35:4:61）；检测波长：284 nm；柱温：40℃；流速1.0mL·min-1；理论塔板数按橙皮苷计算应不低于2000。

附图1 橙皮苷对照品的高效液相色谱图（1橙皮苷）

附图2 人参健脾丸样品的高效液相色谱图（1橙皮苷）

附表1 加样回收率试验测定结果（n=5）

附表2 样品测定结果

2.2 对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称取，加甲醇制成每1mL含0.25 mg的溶液，即得。精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。具体见附图1。

2.3 供试品溶液的制备 取大蜜丸，剪碎，混匀，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kH）40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。具体见附图2。

2.4 线形关系考察 精密吸取橙皮苷对照品溶液（0.7504 mg·mL-1）1.0，3.0，5.0，7.0，10.0 mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，橙皮苷进样量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程：Y=2*107X-16695，r=0.9997，结果表明，橙皮苷在0.030～0.300mg·mL-1范围内线形良好。

2.5 精密度试验 精密吸取人参健脾丸供试品溶液10μL，重复进样6次求得样品中橙皮苷含量的相对标准偏差为RSD=0.20%。

2.6 稳定性试验 精密吸取人参健脾丸供试品溶液10μL，每隔一定时间进样一次，观察供试品溶液稳定性，相对标准偏差RSD=1.43%。试验结果表明，供试品溶液制备后24h内基本稳定。

2.7 重复性试验 按上述色谱条件对同一厂家样品6份进行测定，求得相对标准偏差RSD=0.76%。

2.8 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取已知含量的样品(橙皮苷含量2.6983mg·g-1)1.5g，平行5份，分别精密加入橙皮苷对照品（4mg），按上述条件操作，计算加样回收率，测定结果见附表1。

2.9 样品测定结果 取样品，按本法及2010版《中国药典》方法检测，测定结果见附表2。

3 讨论

索氏提取法滤纸容易吸附橙皮苷，且样品转移容易造成损失，因此索氏提取法的含量测定结果略低于本法[4]。本法操作简单，检验时间较短，消耗溶剂较少，有利于环境保护。