蕨菜中槲皮素的提取工艺的初步研究

齐成媚

（湖南科技学院 生命科学与化学工程系，湖南 永州 425199）

蕨菜中槲皮素的提取工艺的初步研究

齐成媚

（湖南科技学院 生命科学与化学工程系，湖南 永州 425199）

拟建立以高效液相色谱测定的蕨菜中槲皮素提取工艺。以乙醇为溶剂，超声波辅助提取对蕨菜中的槲皮素进行提取，以25%盐酸回流水解进入高效液相色谱仪测定。通过查阅大量文献与预备实验，对已有的单因素试验进行总结优选出三因素三水平进行正交试验，进一步优选最佳试验组合。得到最优组合为乙醇浓度80%，超声时间60min，回流温度85℃，在最优条件下槲皮素得率为得到64.25μg/g。

蕨菜；槲皮素；提取工艺

1　材料与方法

1.1实验材料

蕨菜：采自湖南永州零陵湖南科技学院西山野生蕨菜。新鲜蕨菜洗净、自然风干后粉碎过20目筛制成粉状备用。

仪器：岛津LC-10ATVP液相色谱仪、FZ-20粉粹机（上海胜启仪器仪表有限公司）、分析天平（上海精科天美贸易有限公司）、超声提取仪（济南科尔超声波设备有限公司）、离心管、具赛三角瓶、漏斗等。

试剂：乙醇（AR）、浓盐酸（AR）、甲醇（AR）、蒸馏水、槲皮素品（≥95.9%，购于国家标准物质中心）。

1.2实验方法

准确称取蕨菜样品0.500g，加入10mL1）乙醇，通过超声提取一段时间，加入甲醇25%HCl 4mL于一定温度水浴锅上回流2h，期间不断振摇，冷却，静置10min，过滤，风干定容至10mL，过微孔滤膜，最后入高效液相色谱仪进行检测。

1.2.1单因素实验

（1）乙醇浓度对蕨菜中槲皮素提取率的影响：分别设置乙醇浓度为50%、60%、70%、80%，比较不同乙醇浓度下槲皮素提取率。

（2）超声时间：分别设置超声时间为40min、50min、60min，比较不同超声时间下槲皮素提取率。

（3）水解温度：分别设置水解温度为80℃、85℃、90℃，比较不同水解温度下槲皮素提取率。

1.2.2正交实验

在单因素实验基础上，对乙醇浓度、超声时间和水解温度采用L9（34）进行正交试验（表1），以槲皮素提取率为考察指标，优化槲皮素提取的最佳工艺。

表1.蕨菜槲皮素提取正交试验因素水平表

1.2.3样品的测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按色谱条件进行测定，记录色谱图，每个样品重复测定三次。

1.2.4高效液相色谱测定条件

岛津 LC-10AT 型高效液相色谱仪，SPD-10A 紫外检测器，7725i 手动进样阀；色谱柱：ODS C18柱（4.6mm×250mm）；检测波长：360nm；流速：1.0mL/min-1；流动相：甲醇-0.4% 磷酸溶液（50∶50）；进样10μL。

1.2.5样品的计算

2　结果与讨论

2.1槲皮素标准品谱图

槲皮素标准品的色谱图如下图。

图1. 槲皮素标准品谱图

2.2单因素试验结果

2.2.1乙醇浓度对蕨菜中槲皮素提取率的影响

图2.乙醇浓度对蕨菜中槲皮素提取率

由图2可知，随着乙醇浓度增加，蕨菜的槲皮素的提取率逐渐增大，乙醇浓度大于70%，槲皮素的提取率增加缓慢。考虑到乙醇浓度升高其提取杂质增多、分离相对困难，提取成本增加等因素，因此选取80%的乙醇较为合理。

2.2.2提取时间对蕨菜中槲皮素提取率的影响

图3.超声时间对蕨菜中槲皮素提取率

由图3可得，随着提取时间的延长，蕨菜的槲皮素的提取率折线上升。表明槲皮素的提取率和提取时间密切相关，提取时间过短导致提取不充分，提取时间过长不利于导致其他杂质的溶解量增加。故综合考虑选用 60min 较为合适。

2.2.2水解温度对蕨菜中槲皮素提取率的影响

图4.水解温度对蕨菜中槲皮素提取率

由图4可以看出，随着水解温度的升高，蕨菜的槲皮素的提取率先升后降，以85℃为最佳提取温度。其原因可能是由于温度的升高加速了槲皮素分子的扩散和运动而利于利于其水解，当温度超过85℃后，温度再升高对其提取率影响不明显。

2.3正交试验

表2. 蕨菜槲皮素提取正交试验结果表

由表2极差分析可知，影响蕨菜槲皮素提取率的各因素主次关系为：A（乙醇浓度）＞C（水解温度）＞B（超声时间），所得蕨菜槲皮素提取的最佳工艺参数组合为A3B3C2即当乙醇浓度为80%、超声时间为60min、水解温度为85℃时提取率最高，此时提取为64.2540μg/g。

3　结 论

本试验以槲皮素提取率为指标，通过正交试验得出的最优试验条件为乙醇浓度为80%、超声时间为60min、水解温度为85℃，此工艺条件下槲皮素提取率为64.2540μg/g，该工艺条件可为蕨菜的深度加工与保健功能的研究提供一定科学依据。

［1］黄勇红，周日宝.湖南省蕨类植物资源及其药用状况调查分析［J］.湖南中医学院学报.2002，22（2）：71-72.

［2］王玲，和兆荣.药用蕨类植物化学成分研究进展［J］.中国野生植物资源.2006.25（3）：1-4.

［3］鲍廷铮，王庆伦，廖志辉.槲皮素的研究近况［J］.江西中医学院学报，1998，10（2）：90-91.

［4］舒毅，谭陶，张思宇，等.槲皮素的药理学研究进展［J］.华西药学杂志，2008， 23（6）：689-691.

（责任编校：何俊华）

O65

A

1673-2219（2015）05-0061-03

2014－09－20

湖南科技学院校级科研项目（13XKYTB008）。

齐成媚（1985－），女，湖南耒阳人，实习研究员，主要从事药物提取方面研究。