锁阳黄酮咀嚼片中总黄酮含量的测定

陈汉哲，裴栋，魏鉴腾，邸多隆，刘晔玮

（1.兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所，甘肃兰州730000；2.中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室，甘肃兰州730000）

锁阳黄酮咀嚼片中总黄酮含量的测定

陈汉哲1，裴栋2，魏鉴腾2，邸多隆2，刘晔玮1

（1.兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所，甘肃兰州730000；2.中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室，甘肃兰州730000）

建立锁阳黄酮咀嚼片中黄酮含量的测定方法。以芦丁为对照品，用分光光度法测定锁阳黄酮咀嚼片中总黄酮的含量。锁阳黄酮咀嚼片中黄酮含量测定方法的线性方程：y=11.920x+0.007 2，相关系数：r=0.999 4，线性范围：4.02 μg/mL～64.32 μg/mL，精密度的相对偏差：1.04%，加标回收率：93.70%～104.58%。

锁阳黄酮咀嚼片；总黄酮；分光光度法；含量测定

锁阳，又名“不老药”、“金不换”和“沙漠人参”等，为锁阳科（Cynomoraceae）寄生植物锁阳（Cynomorium Songaricum Rupr.）的干燥肉质茎，主要分布于内蒙古、宁夏、新疆、甘肃、青海等地区。研究表明，锁阳在防癌、抗癌、免疫调节、延缓衰老、防治心血管疾病、治疗白细胞减少等方面也具有重要医疗价值［1］。

在西北，锁阳早已成为其文化的一部分，并形成了一些独特的饮食，如，“酥兹根茶”、“烧壳子”、“锁阳饼”等［2］。锁阳肉质茎富含淀粉，可酿酒，作饲料及代食品。锁阳系列产品的研究开发已取得突破性进展，涉及到医药、食品等各个方面，如锁阳保健酒、锁阳啤酒、锁阳饮料、锁阳冲剂、锁阳胶囊、锁阳精、锁阳茶、锁阳饮片等［3］。

锁阳含有黄酮类、有机酸、甾体类、三萜类、鞣质、糖苷、氨基酸、无机离子等多种成分。锁阳中的黄酮类化合物主要为芸香苷、表儿茶素、顺式-5-脱氧戊糖酸-γ-内酯、儿茶素、芦丁、柑桔素、异槲皮苷等［4］。

锁阳黄酮以锁阳的干燥肉质茎为原料，经乙醇提取、分离、干燥而成。锁阳黄酮咀嚼片是以锁阳黄酮为主要原料，经科学配方加工而成的营养食品。本文建立了锁阳黄酮咀嚼片中总黄酮含量测定方法，该方法鲜见文献报道。

1　仪器及材料

1.1仪器

BT224S型精密电子天平：德国赛多利斯集团；UV759紫外可见光分光光度计：上海精科电子有限公司；KQ-250DE超声波清洗器：上海书培实验设备有限公司。

1.2试剂

芦丁对照品：成都曼思特生物科技有限公司；无水乙醇、NaNO2、Al（NO3）3、NaOH均为分析纯。

1.3样品

锁阳黄酮咀嚼片由阿拉善盟万铭生物制品有限公司提供。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的制备

称取芦丁对照品约20 mg，置于50 mL容量瓶中，加60%乙醇适量超声溶解，放至室温后，用60%乙醇定容、摇匀，即得芦丁对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备

取锁阳黄酮咀嚼片20片，研磨后过80目筛备用。称取粉末约200 mg，置于50 mL容量瓶中，加60%乙醇适量超声溶解，放至室温后，用60%乙醇定容、摇匀，即得供试品溶液。

2.3含量测定

精密量取供试品（对照品）溶液2.0 mL于25 mL容量瓶中，用30%乙醇补足至6 mL，加入1.0 mL 5% NaNO2溶液，摇匀，放置6 min；加入1.0 mL 10%Al（NO3）3溶液，摇匀放置6 min；加入4%NaOH溶液10.0 mL，用30%乙醇定容，摇匀放置15 min，过滤。芦丁对照品溶液为对照，相应的试剂作空白对照，于510 nm下测定吸光度。

黄酮含量按下式计算，式中A为样品吸光度，C1为芦丁对照品显色浓度，（mg/mL），A1为芦丁对照品吸光度，m1为样品质量，g。

2.4标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，按2.3项下方法，自“用30%乙醇补足至6 mL”起，进行测定。

以质量浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=11.920x+0.007 2，r=0.999 4，线性范围：4.02μg/mL～64.32μg/mL，如下图。

图1　芦丁对照品标准曲线Fig.1The standard curve of Rutin reference substance

2.5精密度试验

精确量取4.5mL对照品溶液5份，分别置于25mL容量瓶中，按2.3项下方法，自“用30%乙醇补足至6 mL”起，进行测定。

相对标准偏差为1.04%＜5%。

2.6稳定性试验

精密量取8.0 mL供试品溶液于100 mL容量瓶中，用30%乙醇补足至24 mL，加入4.0 mL 5%NaNO2溶液，摇匀放置6 min；加入4.0 mL 10%AlNO3溶液，摇匀放置6 min；最后加入40 mL 4%NaOH溶液，用30%乙醇定容，摇匀放置15 min，过滤。波长设定为510nm并分别于5、10、15、20、25、30、60、90、120、150min时进行测定。

吸光度值相对标准偏差为2.70%＜5%，表明在2.5 h内，体系基本稳定。

2.7重复性试验

精密称取样品5份，分别置于50 mL容量瓶中，按2.2项下方法，自“加60%乙醇适量超声溶解”起，配制供试品溶液。各量取2.0 mL供试品溶液，分别置25 mL容量瓶中，按2.3项下方法，自“用30%乙醇补足至6 mL”起进行测定。

相对标准偏差为3.43%＜5%。

2.8加样回收率试验

分别精密称取已知含量锁阳黄酮咀嚼片粉末15份，按低、中、高3个浓度水平分别加入芦丁对照品，按2.2及2.3项下方法测定，每个浓度水平测定5个平行样，结果下表。

回收率在93.70%～104.58%之间，相对标准偏差＜5%。

3　结论

本法样品前处理方法简单，显色体系稳定性良好，其线性方程为y=11.920x+0.007 2，相关系数为r= 0.999 4，线性范围在4.02 μg/mL～64.32 μg/mL之间，精密度的相对偏差为1.04%，加标回收率为93.70%～104.58%，相关指标均良好，达到理想的要求。故此法可用于锁阳咀嚼片黄酮含量测定。

表1　加样回收率实验Table 1Analytical results of spiked recovery tests

［1］张立明，郑传莉，李思.紫外分光光度法测定锁阳中总黄酮含量［J］.科协论坛·下半月，2009（12）：73-74

［2］钟进文.乡土知识不可忘记-从几件小事说起［J］.西北民族研究，2009（1）：177-182

［3］张丙云，相炎红，周青钰.锁阳的研究现状及开发［J］.酿酒，2002，29（4）：72-73

［4］王晓梅，张倩热娜·卡斯木，王新玲，等.锁阳全草化学成分的研究［J］.中草药，2011，42（3）：458-460

Determination of Flavonoids in Cynomorium Songaricum Flavonoids Tablets

CHEN Han-zhe1，PEI Dong2，WEI Jian-teng2，DI Duo-long2，LIU Ye-wei1
（1.Institute of nutrition and food hygiene in College of Public Hygiene of Lanzhou University，Lanzhou 730000，Gansu，China；2.Key Lab of Chemistry of Northwestern Plant Resources in Lanzhou Institute of Chemical Physics，Lanzhou 730000，Gansu，China）

To establish the method for content determination of flavonoids in Cynomorium Songaricum flavonoids tablets.Lutoside as control article，the content of the flavoneoids in Cynomorium Songaricum flavonoids tablets was determined by spectrophotometry.The linear equation，related coefficient and range of linearity were y=11.920x+0.007 2，r=0.999 4，4.02 μg/mL-64.32 μg/mL，respectively.The precision（RSD%）was 1.04%.The recoveries obtained were from 93.70%to 104.58%.

Cynomorium Songaricum；flavonoids；spectrophotometry；content determination

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.031

2015-03-06

陈汉哲（1992—），男（汉），在读研究生，研究方向：营养与食品卫生学。