高效液相色谱法测定龙凤宝胶囊淫羊藿苷的含量

王 力 林永凤

（吉林市方正药业有限公司，吉林 吉林132012）

高效液相色谱法测定龙凤宝胶囊淫羊藿苷的含量

王 力 林永凤

（吉林市方正药业有限公司，吉林 吉林132012）

目的 建立前龙凤宝胶囊的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱：Waters RP18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（23∶77） ， 流速 ：1.0 mL/min ，检测波长 ：270 nm ，柱温 ：40 ℃。结果 淫羊藿苷在10～500 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9999）；平均加样回收率为99.64%，RSD=0.3%（n=6）。结论 该方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法；龙凤宝胶囊；淫羊藿苷；含量测定

龙凤宝胶囊收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十八册，为国家中药保护品种，由淫羊藿、山楂、党参、玉竹、肉苁蓉、黄芪、牡丹皮、冰片等9味中药组成。具有补肾壮阳，健脾益气，凝神益智的功效。临床用于更年期综合征及神经衰弱者［1］。处方中淫羊藿为主药，淫羊藿苷为其主要检测目标成分，原标准中无淫羊藿的含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定龙凤宝胶囊中淫羊藿苷的含量，样品处理方法简单，结果准确可靠。

图1 前列舒丸HPLC图

1 仪器与试药

LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站；淫羊藿苷对照品（批号：110737-200415），由中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用；龙凤宝胶囊为市售样品（广州白云山奇星药业有限公司，批号：12002、12005、12006）。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验。色谱柱：Waters RP18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-水（23∶77）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃。理论板数按淫羊藿苷峰计应不低于4000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥12 h以上的淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成1.0 mg/mL的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成100 μg/mL的对照品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备：取本品20粒内容物，精密称定，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得［2］。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：取除淫羊藿以外的处方中其余药材，按法制成胶囊，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验：分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（淫羊藿苷35.554 min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

2.4 线性关系考察：精密吸取淫羊藿苷对照品贮备液（浓度1.0 mg/mL）各适量，分别置50 mL量瓶中，加甲醇定容，配成浓度分别为10、50、100、200、500 μg/mL的溶液5份，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10 μL，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，得淫羊藿苷的回归方程为：A=21.89+32.51C，r=0.9999（n=5），结果表明，淫羊藿苷在10～500 μg/mL范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

2.5 精密度和稳定性试验：精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（100 μg/mL）10 μL，在上述色谱条件下重复进样5次，求得淫羊藿苷溶液峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.2%，表明精密度较好。取同一供试品溶液，在0、6、12、18、24 h分别进行测定，结果表明淫羊藿苷对照品溶液在24 h内稳定，RSD为0.9%（n=5）。

2.6 重复性试验：取供试品（批号12002），共5份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行测定，求得淫羊藿苷含量的RSD为1.4%，表明重复性良好。

2.7 加样回收率试验：精密称取已知含量的样品（批号12002，淫羊藿苷含量0.23毫克/粒，平均粒重0.5022g）适量，共6份，分别精密加入低、中、高3种不同浓度的哈巴俄苷对照品适量，照“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，见表1。

2.8 样品含量测定：分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定三批样品中淫羊藿苷峰面积，按外标法计算其含量（n=3），见表2。

表1 淫羊藿苷加样回收率试验（n=6）

表2 3批样品含量测定结果（n=5）

3 讨 论

3.1 根据三批样品所测结果，结果表明最高含量为0.24毫克/粒，最低含量为0.23毫克/粒，综合考虑，建议该制剂中淫羊藿的含量以淫羊藿苷计应不低于0.20毫克/粒。

3.2 对供试品、对照品在200～400 nm进行紫外扫描，二者在270 nm有较强吸收，而阴性无干扰，故选择检测波长为270 nm。

3.3 本方法结果准确，方法简便，重复性及回收率均理想，可以作为该制剂的质量控制方法。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准（中药成方制剂第十八册）［S］.2010:87.

［2］ 国家药典委员会.中国药典（一部）［M］. 2010版.北京:中国医药科技出版社，2010:79-80.

Determination of Icariin in Longfengbao Capsule by HPLC

WANG Li， LIN Yong-feng
（Jilin Fangzheng Pharmaceutical Company Limited， Jilin 132012， China）

Objective To set up a method for quality control of Longfengbao Capsule. Method HPLC method was developed to quantitative determination. Column:Waters RP18 column（250 mm×4.6 mm， 5 μm）.The mobilic phase: acetonitrile-Water（23∶77）. Flow rate: 1.0 mL/min. The wavelength for detection: 270 nm， The column temperature: 40 ℃. Results The calibration curve of Icariin had a good linear relationship in the range of 10～500 μg/mL（r =0.9999）； the average of recovery was 99.64%， the RSD was 0.3%（n=6）. Conclusion The method is simple， accurate and reproductive. It can be used for quality control of this preparation.

HPLC； Longfengbao Capsule； Icariin； Content Determination

R284.1

B

1671-8194（2015）13-0011-02