骆驼蓬炮制前后骆驼蓬碱含量变化研究

付智慧，陆锦锐，李淑军，胡慧华

（1.北京中医药大学中药学院，北京100102；2.黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558000）

骆驼蓬炮制前后骆驼蓬碱含量变化研究

付智慧1，陆锦锐2，李淑军1，胡慧华1

（1.北京中医药大学中药学院，北京100102；2.黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558000）

目的采用高效液相色谱（HPLC）法测定炮制前后骆驼蓬中骆驼蓬碱的含量变化。方法色谱柱为Agilent SB柱（250 mm× 4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.02mol/L硫酸铵（32∶68，V/V），流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长为375 nm。结果炮制前后骆驼蓬中骆驼蓬碱的平均含量分别为2.72，1.90mg/g，炮制后的骆驼蓬碱含量较炮制前下降了30.15%。结论骆驼蓬经红酒煮制后，骆驼蓬碱含量可显著降低。

骆驼蓬碱；骆驼蓬；炮制

骆驼蓬Peganumharmala L.属蒺藜科，维吾尔医分别以其全草和种子入药，全草称为骆驼蓬，种子称为骆驼蓬子。骆驼蓬主要分布于我国西北部的干旱草地以及盐碱化荒地，是维吾尔族、蒙古族沿用已久的草药，也被收载入中医药本草为中医药广泛使用［1-4］。骆驼蓬性平，味苦、辛，有毒，具有坚固筋脉、助阳暖阴、消除黏稠体液、消散寒湿之气等功效，主治筋脉软弱、骨关节痛、咳嗽痰多、偏瘫健忘、神昏头痛、月经不调等［5］。骆驼蓬主要化学成分为生物碱，其中骆驼蓬碱（harmaline）及去氢骆驼蓬碱（harmine）是骆驼蓬的主要活性成分，属β-咔啉类生物碱［5-6］。骆驼蓬全株有毒，可引起家畜严重中毒，中毒后出现厌食、呕吐、腹泻症状，明显处于麻醉状态并伴有间歇性的兴奋，而后呼吸困难、瞳孔放大，在这些病症出现后的30～36 h死亡，这些综合病症表明，骆驼蓬中含有亚致死物［4］。据记载，维医在治疗顽固性头痛和癫痫病时，将骆驼蓬用红酒煮后才能用，提示红酒煮制可降低毒性，提高临床用药安全性和有效性［7］。我国对骆驼蓬的炮制研究尚处于空缺状态，本试验中以骆驼蓬碱的含量为指标，以传统红酒煮法对骆驼蓬进行炮制，研究骆驼蓬炮制前后骆驼蓬碱的含量变化，为骆驼蓬炮制解毒提供参考。

1　仪器与试药

KQ5200型超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；Agilent G1316A 1200型高效液相色谱仪、WFZ2800 D2型紫外-分光光度计（北京第二光学仪器厂）；SL2002N型电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；EL204型分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。甲醇（色谱纯，天津光复科技发展有限公司，批号为20120301）；甲醇（天津市富宇精细化工有限公司，批号为20120512）、硫酸铵（天津光复科技发展有限公司，批号为20120221）、磷酸（天津市富宇精细化工有限公司，批号为20120221）均为分析纯；骆驼蓬碱对照品（简称为HML，Sigma，批号为101087574）。骆驼蓬草购于新疆和田大巴扎阿提木疆维药店，经新疆维吾尔医专吴秋灵教授鉴定为蒺藜科植物骆驼蓬Peganumharmala L.；红酒购于新疆和田买买提维药店。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent SB柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02 mol/L硫酸铵溶液（含0.5%H3PO4，1%三乙胺，32∶68，V/V）；进样量：10μL；流速：1 mL/min；柱温：25℃；检测波长：375 nm。在此条件下，色谱图见图1。

2.2溶液制备

称取骆驼蓬碱对照品6.15 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.615mg的对照品贮备液；精密吸取1 mL，加甲醇稀释并定容至25 mL，即得HML对照品溶液（24.6μg/mL）。根据《新疆维吾尔自治区中药维吾尔药饮片炮制规范》［8］，取骆驼蓬草适量，净制后切为长度约2 cm小段作为生品备用；取骆驼蓬草段500 g，加红酒500mL，文火煮沸至酒干，取出，凉干，即得骆驼蓬炮制品。参考文献［8-10］，精密称取骆驼蓬生品和炮制品粉末各0.3 g，分别置50mL具塞三角瓶中，精密加入25mL甲醇，称重，超声提取60min，放冷后用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，量取适量滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得骆驼蓬生品与炮制品供试品溶液。

2.3方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取HML对照品溶液2，6，10，14，18μL，测定峰面积。以峰面积（Y）对对照品进样量（X）进行线性回归，得回归方程Y=5 683X-27.66，r=0.999 5（n=5）。结果表明，HML进样量在0.049 2～0.442 8μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1　高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取HML对照品溶液24.6μg/mL，连续进样5次，测定峰面积。结果HML对照品平均峰面积为1 386.44，RSD=1.55%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一生品供试品溶液，每隔2 h进样1次，测定峰面积。结果生品供试品溶液中HML的平均峰面积为1 871.96，RSD=1.45%（n=5），表明生品供试品溶液在室温8 h内稳定。

重复性试验：分别精密称取骆驼蓬炮制品5份，每份0.3 g，按拟订方法制备供试品溶液，依法进样测定。结果炮制品供试品溶液中HML的平均含量为2.72mg/g，RSD=2.43%（n=5），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：采用半量加样回收法，精密称取骆驼蓬炮制品粉末0.15 g，精密加入适量的HML对照品溶液，按拟订方法制备供试品溶液，依法进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1　HML加样回收试验结果（n=5）

2.4样品含量测定

分别精密吸取生品与炮制品供试品溶液各10μL，依法进样测定HML的含量。结果见表2。

3　讨论

骆驼蓬生物碱作为骆驼蓬的主要化学成分，具有抗肿瘤、抗阿尔茨海默病、抗糖尿病、抗凝血、镇痛、抗菌、抗原虫等多方面药理作用，其中抗肿瘤活性最显著，作为抗肿瘤药物具有广阔的开发利用前景［5，11］。而骆驼蓬含有的多种生物碱又有一定的毒性，对神经系统有多种强烈作用［4］，但经红酒煮制后毒性降低［7］。在对骆驼蓬毒性成分研究尚未清楚的情况下，骆驼蓬在临床的安全应用成为了首要的问题，故研究骆驼蓬通过炮制减毒很有必要。

表2　样品含量测定结果

本试验结果显示，骆驼蓬经红酒煮制后，其骆驼蓬碱的含量与生骆驼蓬相比明显下降，说明骆驼蓬碱可能是其中的毒性成分之一，可为揭示骆驼蓬炮制解毒提供相关资料。对于其他生物碱炮制前后的含量变化，还有待进一步研究。

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Research on Change of Harmaline Content in Peganumharmala L.before and after Processing

Fu Zhihui1，Lu Jinrui2，Li Shujun1，Hu Huihua1
（1.School of Chinese Material Medica Beijing University of Chinese Medicine，Beijing，China 100102；2.Qiannan Medical College for Nationalities，Duyun，Guizhou，China 558000）

Objective To investigate the change of harmaline content in Peganumharmala L.before and after processing by adopting the HPLC method.M ethods The determination was carried out with the Agilent SB column（250 mm×4.6 mm，5μm）；the mobile phase consisted of methanol-0.02 mol/L ammonium sulfate（32∶68，V/V）for elution；the detection wavelength was set at 375 nm，and the flow rate was 1.0 mL/min at the column temperature of 25℃.Results The average harmaline content of crude Peganumharmala L.was 2.72 mg/g，the average harmaline contents in Peganumharmala L.before and after processing were 2.72，1.9 mg/g，respectively，the harmaline content after processing was decreased by 30.15%than before processing.Conclusion The content of harmaline in Peganumharmala L.after decocting with red wine is significantly reduced.

harmaline；Peganumharmala L.；processing

R284.1；R282.71；R283.1

A

1006-4931（2015）16-0052-03

付智慧（1987-），女，汉族，河南人，硕士研究生，研究方向为中药炮制，（电子信箱）395344143@qq.com；胡慧华（1962-），女，汉族，北京人，博士研究生，副教授，研究方向为中药炮制机理研究，本文通讯作者，（电子信箱）ahuihh@sina.com。

2015-01-27；

2015-03-13）