克罗恩病患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞变化与炎症标记物的关系*

袁柏思 金鑫鑫 路又可 刘 炯 王少东 王震凯 吴 琳 汪芳裕

南京军区南京总医院消化内科(210002)

克罗恩病(Crohn’s disease，CD)是一种病因和发病机制尚不十分清楚的肠道慢性炎症性疾病，目前认为遗传、环境、微生物、免疫因素共同参与了CD的发病，免疫应答的过度激活和失衡可能是其中最直接和最重要的因素［1］。免疫应答异常将导致肠黏膜防御能力下降和肠黏膜炎症损伤加重，T细胞是机体免疫应答的主要参与者。本研究拟探讨CD患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞的表达变化及其与血清炎症标记物的关系。

对象与方法

一、一般资料

收集2014年1月-2014年7月南京军区南京总医院消化内科CD住院患者26例，其中男17例，女9例，平均年龄(33.0±12.7)岁，病程1个月～15年(病程≤1个月计为1个月)，平均40.4个月。CD诊断参照中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组制订的“炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)”［2］的诊断标准。按蒙特利尔表型分类法［3］分型，A1型2例，A2型17例，A3型7例;L1型10例，L2型6例，L3型9例，L4型1例;P型4例;B1型16例，B2型8例，B3型2例。采用简化CD疾病活动指数(Crohn’s disease activity index，CDAI)［4］判断 CD的活动期和缓解期，活动期14例，缓解期12例。纳入同期8名健康志愿者作为对照，其中男5名，女3名，平均年龄(38.8±15.9)岁，既往无肝炎、结核、自身免疫病等疾病史，近3个月内未服用激素、免疫抑制剂、生物制剂等药物。本研究方案由南京军区南京总医院伦理委员会批准，入选者均知情同意。

二、标本采集和检测

受检者于早晨空腹采集静脉血2 mL，用流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例;生化仪检测静脉血白蛋白水平;魏氏法检测红细胞沉降率(ESR);血细胞仪检测白细胞、血小板计数、血红蛋白;免疫比浊法检测C反应蛋白(CRP)水平。

三、统计学分析

采用SPSS 22.0统计软件。两组间比较采用t检验，相关性分析采用Spearman检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、外周血T细胞比例

对照组和CD组的CD3+、CD4+和CD8+T细胞测定结果见图1。CD组仅CD8+T细胞比例明显高于对照组(P=0.018)，CD活动期所有T细胞比例均明显高于缓解期和对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);CD缓解期与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05)(图2)。

图1 对照组和CD组流式细胞图

二、外周血炎症相关指标

与对照组相比，CD组和CD活动期ESR和CRP水平明显升高(P＜0.05)，而白蛋白和血红蛋白水平明显降低(P＜0.001)，CD缓解期白蛋白水平明显低于对照组(P=0.007);与CD缓解期相比，CD活动期ESR和CRP水平明显升高(P＜0.05)，而白蛋白、血红蛋白水平明显降低(P＜0.05);CD组、CD活动期和缓解期患者的白细胞计数、血小板计数与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05)(图2)。

三、T细胞与外周血炎症指标的相关性分析

CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例与CRP呈正相关(P＜0.05)，与血红蛋白呈负相关(P＜0.05)，CD3+、CD4+T细胞比例与 ESR呈正相关(P＜0.05)(图3);而 CD8+T细胞比例与 ESR以及CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例与白细胞计数、血小板计数和白蛋白均无相关性(P＞0.05)。

图2 CD组和对照组T细胞和炎症相关指标比较

图3 T细胞与外周血炎症指标的相关性

讨 论

肠道炎症和黏膜组织损伤是CD的重要特征，免疫因素与之密切相关，T细胞作为免疫调节的中心环节，在疾病的发生、发展中起重要作用，参与黏膜炎症的多种免疫反应，免疫反应不适当的增强或减弱，将造成组织损伤或炎症持久存在［5］。本研究发现，CD组CD8+T细胞比例明显高于对照组，CD活动期CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例均明显高于缓解期和对照组，CD缓解期与对照组无明显差异，提示CD患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例随病情加剧而升高。检测与CD病情严重程度相关的炎症指标(白细胞计数、血小板计数、ESR、CRP、白蛋白和血红蛋白)发现，CD活动期ESR和CRP明显高于对照组，白蛋白和血红蛋白水平明显降低，且ESR和CRP高于缓解期;缓解期白蛋白水平明显低于对照组，而白细胞计数和血小板计数与对照组无明显差异，提示CD病情活动时相关的炎症指标亦出现改变。进一步行相关性分析发现，CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例与CRP呈正相关，与血红蛋白呈负相关，CD3+、CD4+T细胞比例与ESR呈正相关，提示T细胞比例升高与CRP、ESR呈正相关。T细胞能介导炎症性肠病(IBD)患者肠道组织损伤，抗CD3抗体治疗能明显减少IBD患者炎症细胞因子的生成［6］，缓解溃疡性结肠炎(UC)患者的临床症状［7］，改善 CD 患者内镜下评分［8］，提示CD3+T细胞参与IBD的发病、发展。Funderburg等［9］的研究发现CD4+和CD8+T细胞比例与促炎细胞因子(IL-6和IFN-α)和CRP呈正相关，且T细胞的活化与血清炎症标记物的升高和IBD病情密切相关［10］。因此，推测CD患者肠道炎症和黏膜组织损伤导致肠黏膜屏障受损，肠腔内细菌毒素通过受损屏障进入肠黏膜，引起细胞因子和炎症介质释放入血，从而使T细胞活化和比例升高，T细胞的失衡导致免疫反应异常，造成组织损伤或炎症持久存在，加重病情进展［11］。

由于本研究纳入的病例数较少，且部分患者入院前已在外院接受包括激素、免疫抑制剂在内对免疫反应有影响的药物治疗，在一定程度上对本研究结果会产生影响，因此可能具有一定的局限性，仍需行大宗病例和多中心研究进一步证实。

1 Kaser A，Zeissig S，Blumberg RS.Inflammatory bowel disease［J］.Annu Rev Immunol，2010，28:573-621.

2 中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组.炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)［J］.中华内科杂志，2012，51(10):818-831.

3 Silverberg MS，Satsangi J，Ahmad T，et al.Toward an integrated clinical，molecular and serological classification of inflammatory bowel disease:report of a Working Party of the 2005 Montreal World Congress of Gastroenterology［J］.Can J Gastroenterol，2005，19(Suppl A):5A-36A.

4 Harvey RF，Bradshaw JM.A simple index of Crohn’sdisease activity［J］.Lancet，1980，1(8167):514.

5 Geremia A，Biancheri P，Allan P，et al.Innate and adaptive immunity in inflammatory bowel disease［J］.Autoimmun Rev，2014，13(1):3-10.

6 Vossenkämper A，Hundsrucker C，Page K，et al.A CD3-specific antibody reduces cytokine production and alters phosphoprotein profiles in intestinal tissues from patients with inflammatory bowel disease ［J］.Gastroenterology，2014，147(1):172-183.

7 Baumgart DC，Targan SR，Dignass AU，et al.Prospective randomized open-labelmulticenter phaseⅠ/Ⅱ dose escalation trial of visilizumab(HuM291)in severe steroidrefractory ulcerative colitis［J］.Inflamm Bowel Dis，2010，16(4):620-629.

8 van der Woude CJ，Stokkers P，van Bodegraven AA，et al.PhaseⅠ，double-blind，randomized，placebo-controlled，dose-escalation study of NI-0401(a fully human anti-CD3 monoclonal antibody)in patients with moderate to severe active Crohn’s disease［J］.Inflamm Bowel Dis，2010，16(10):1708-1716.

9 Funderburg NT，Stubblefield Park SR，Sung HC，et al.Circulating CD4(+)and CD8(+)T cells are activated in inflammatory bowel disease and are associated with plasma markers of inflammation［J］.Immunology，2013，140(1):87-97.

10 Solem CA，Loftus EV Jr，Tremaine WJ，et al.Correlation of C-reactive protein with clinical，endoscopic，histologic，and radiographic activity in inflammatory bowel disease［J］.Inflamm Bowel Dis，2005，11(8):707-712.

11 Kawashima R，Kawamura YI，Oshio T，et al.Interleukin-13 damages intestinal mucosa via TWEAK and Fn14 in mice-a pathway associated with ulcerative colitis［J］.Gastroenterology，2011，141(6):2119-2129.