浊点萃取-间接光度法测定饮料中VC

朱圣平，丁宗庆

（郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系，湖北十堰442000）

浊点萃取-间接光度法测定饮料中VC

朱圣平，丁宗庆

（郧阳师范高等专科学校生物化学与环境工程系，湖北十堰442000）

建立了浊点萃取-间接分光光度法测定饮料中VC的方法。优化了pH、试剂用量、平衡温度和时间等条件。该方法的线性范围4.0 mg/L～140 mg/L（r=0.999 5），检出限为2.24 mg/L，加标回收率在97.6%～102.2%之间，相对标准偏差在1.7%～2.4%之间。成功的应用于饮料样品中VC的测定。

浊点萃取；分光光度法；VC；分离富集；饮料

VC的测定方法主要有碘量法［2］、分光光度法［3-4］、电分析法［5-6］和高效液相色谱法［7］等，碘量法无需特殊仪器，准确度高，但它只适用于较高含量的测定；电分析法和高效液相色谱法需要大型昂贵仪器，不利于普及；分光光度法所用仪器简单，发展比较迅速。VC难以用直接光度法测定，通常是将其与过量的Fe（Ⅲ）反应，反应后生成的Fe（Ⅱ）再和邻菲啰啉（Phen）反应生成有色络合物，利用分光光度法测定。由于饮料中常添加有食用色素，会对光度测定带来较大的背景干扰，且部分样品中VC含量较低，使用该方法灵敏度较低。

浊点萃取是一种简便、环保的液-液萃取分离技术，通过精确控制并改变表面活性剂溶液的温度，引发溶液的“浊点”现象，通过离心后就可将溶液分离为表面活性剂相（疏水性物质）和水相（亲水性物质）［8］。该方法可有效分离饮料样品中的干扰物质，并对目标分析物有富集作用，能显著提高分光光度法的准确度和灵敏度。实验建立了浊点萃取-间接光度法测定VC的新方法，并用于饮料样品分析。

1材料与方法

1.1 材料与试剂

VC标准溶液：100 mg/L；Fe（Ⅲ）-Phen溶液：准确称取十二水合硫酸铁铵1.446 g，溶于20 mL 1 mol/L H2SO4中，准确称取邻菲啰啉1.982 g，溶于20 mL 95%乙醇中，将上述2种溶液混合，用水稀释至250 mL；TritonX-100溶液：5%（m/m）；HAc-NaAc缓冲溶液pH=5.5，试剂均为分析纯，上海国药；市售饮料。

1.2 仪器

TU-1901紫外可见分光光度计：普析通用；SYC-15恒温水浴：南京桑力电子设备厂；800型离心机：江苏金坛富华电器有限公司。

1.3 实验方法

于10 mL具塞离心管中加入0.5 mL VC标准溶液，2.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，1.8 mL TritonX-100溶液，0.3 mL Fe（Ⅲ）-Phen溶液，加水至10 mL刻度，摇匀后静置3 min使VC和Fe（Ⅲ）-Phen溶液充分反应。

建筑结构优化设计是一项非常复杂的环节，需要建筑设计过程的每个环节都互相协调。对于房屋结构设计，房屋的外观和质量需要得到有效保证。而建筑结构设计主要是指对房屋结构进行优化设计，建筑结构设计和房屋内部结构要互相结合和协调，尽量减少施工损耗和施工成本，从而保证房屋结构的设计质量和外观，实现其实用价值，并使房屋的建筑结构设计得到科学合理的优化。

将离心管置于85℃恒温水浴中，加热6 min趁热取出。立即以3 000 r/min转速离心3 min，溶液分层为红色的表面活性剂富集相（下层）和水相（上层）。小心倾去上层水相，加水至5 mL刻度线，摇匀。以试剂空白为参比，使用1 cm比色皿，在508 nm处测定显色液吸光度。

2结果与分析

2.1 测定波长的选择

按照1.3实验方法，测定浊点萃取显色富集液在440 nm～620 nm范围内的吸收曲线，如图1所示。选择最大吸收波长508 nm为测定波长。

图1 吸收曲线Fig．1Absorption spectra

2.2 缓冲溶液的用量

按照1.3实验方法，考查了pH=5.5的缓冲溶液用量对测定的影响。结果表明，缓冲溶液用量在2.0 mL～2.5 mL之间，吸光度值高且稳定。实验选择加入HAc-NaAc缓冲溶液2.0 mL。

2.3 试剂用量的优化

固定VC的浓度，分别加入不同量的TritonX-100溶液和Fe（Ⅲ）-Phen溶液，按实验方法考察其测定结果。结果表明：TritonX-100溶液用量在1.8 mL时，吸光度最大，继续增加用量则吸光度降低；Fe（Ⅲ）-Phen溶液用量在0.3 mL时吸光度最大，继续增加用量则吸光度值出现平台。实验选择加入TritonX-100溶液1.8 mL；Fe（Ⅲ）-Phen溶液0.3 mL。

2.4 平衡温度和时间的优化

实验了不同温度和时间对浊点萃取的影响。在60℃～95℃的温度范围内，温度低于71℃，无浊点分相现象，当温度达到85℃时，溶液吸光度达到最大；高于85℃后，吸光度开始下降。在85℃水浴中分别平衡3 min～12 min，当平衡时间为6 min时，吸光度值最大，增加时间，吸光度无明显变化。实验选择在85℃平衡6 min。

2.5 干扰物质的影响

考察了饮料中常见干扰物质对100 mg/L VC测定的干扰，相对误差在±5%以内时，以下物质（倍数）不干扰测定：Na+（100）、K+（100）、Ca2+（100）、Mg2+（100）、Ac-（100），Cl-（100），SO42-（100）、PO43-（100）、淀粉（100）、蔗糖（100）、Fe2+（50）、柠檬酸（50）、咖啡因（20）、赖氨酸（20）、（20）、羧甲基纤维素钠（20）、牛磺酸（10）（10）。有色饮料中添加的食用色素不干扰测定。可见本法对VC的测定有较好的选择性。

2.6 标准工作曲线

按照1.3实验方法，在离心管中准确加入不同体积的VC标准溶液进行浊点萃取测定，考察方法的线性。结果表明，在4.0 mg/L～140 mg/L范围内，VC浓度与A值呈良好的线性关系，线性回归方程为A=0.0075+ 0.012 7 C（mg/L），r=0.999 5。连续平行测定空白溶液11次，以测定结果标准偏差的3倍除以斜率计算方法检出限为2.24 mg/L。

2.7 样品分析

取市售不同品牌的饮料样品按实验方法进行测定，同时做加标回收实验，并与碘量滴定法测定结果比较，结果见表1。

表1 样品分析结果（n=5）Table 1Analytical results of sample（n=5）

3结论

浊点萃取是一种简便、环保的分离富集方法，非离子表面活性剂TritonX-100具有良好的浊点萃取性能。利用浊点萃取-间接光度法测定饮料中VC，可排除饮料样品中食用色素对光度法测定的干扰，并能对样品中的VC进行间接的富集，本法用于测定市售饮料样品中的VC获得了满意结果，在食品分析领域有一定应用价值。

［1］Moreno P，Salvado V.Determination of eight water-and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmaceutical formulations by high-performance liquid chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2000，870（1）：207-215

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典［M］.2部，北京：化学工业出版社，2005：669-670

［3］楚红英.紫外分光光度法测定食用菌中维生素C［J］.理化检验：化学分册，2014，50（2）：255-257

［4］李占清，魏海英.分光光度法测定新鲜蔬菜中维生素C的含量［J］.中国无机分析化学，2014，4（3）：79-81

［5］王朝霞，陈美凤，马心英.银-氨基磺酸膜电极对食品中维生素C的测定［J］.食品科技，2012，37（4）：277-280

［6］邓培红，张军，黎拒难.多壁碳纳米管修饰碳黑微电极同时测定多巴胺和抗坏血酸［J］.分析试验室，2009，28（1）：92-95

［7］吴海燕.微波提取高效液相色谱法测定花菜中的VC［J］.食品研究与开发，2014，35（23）：87-89

［8］宋吉英，李军德.浊点萃取技术的应用［J］.化学世界，2008，49（5）：311-314

Determination of Vitamin C in Drink by Indirec Spectrophotometric with Cloud Point Extraction

ZHU Sheng-ping，DING Zong-qing
（Department of Biology，Chemistry and Environmental Engineering，Yunyang Teachers College，Shiyan 442000，Hubei，China）

A new method for the determination of vitamin C by indirec spectrophotometric after cloud point extraction was proposed.The effects of experimental conditions such as pH value，reagent dosage，equilibration temperature and time on cloud point extraction were discussed.a good linear relationship was obtained in the range of 4.0 mg/L-140 mg/L of the vitamin C（r=0.999 5），the detection limits of 2.24 mg/L.The recoveries fell in the range from 97.6%to 102.2%and the relative standard deviations were between 1.7%and 2.4%.This method has been applied for the determination of VCin drink samples.

cloud point extraction；spectrophotometry；VC；separation and enrichment；drink

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.029

2015-03-05

湖北省教育厅科学技术研究项目（Q20126002）；郧阳师范高等专科学校科研项目（2012A01）

朱圣平（1969—），男（汉），副教授，本科，主要从事食品分析研究。