盐酸小檗碱片含量测定样品提取方法的改进

古惠权

盐酸小檗碱片含量测定样品提取方法的改进

古惠权

目的 建立盐酸小檗碱片含量测定的样品溶解处理的方法——离心法。方法 盐酸小檗碱片含量测定的样品溶解处理的方法中，样品用沸水溶解后，过滤改为离心。结果 样品含量测定获得满意结果。结论 该法样品处理简单，结果稳定、准确，可作为盐酸小檗碱片含量测定的样品溶解处理的方法。

高效液相；盐酸小檗碱片；配制方法；离心

盐酸小檗碱片为国家基准药物，临床上用于急性细菌性痢疾、肠炎等，使用范围较广。该制剂质量标准现收载于《中国药典》2010年版二部中，其含量测定方法为高效液相色谱法。笔者在检验中发现，该方法中含量测定项下的样品处理不完善，样品加沸水溶解后，冷却过程中容易析出絮状沉淀，致使测定结果重复性较差，部分厂家的产品甚至不能达到标准低限，不能准确反映出所有检品的真实质量水平。为保证检验结果的准确性，笔者对样品处理方法进行了改进。

1 仪器与试药

安捷伦C1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；CP225D型电子天平（德国Sartorius公司）；盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110713-201212），乙腈为色谱醇（德国Merck Drags Biotechnoligy公司）；水为超纯水（自制）。其余试剂均为分析纯。盐酸小檗碱片均为市售有效期内药品。

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱：安捷伦Eclipse XDB-C18 C18 5μm 4.6×250mm PN：990967-902 LN∶B13226以磷酸盐缓冲液 [0.05mol/l磷酸二氢钾溶液和0.05mol/l庚烷磺酸钠溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60：40）为流动相;检测波长为263nm;流速：1ml/min;进样量 20μl。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品10.16mg，置于250ml量瓶中，加沸水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备（1原方法、2改进方法）

2.3.1 取本品20片，如为糖衣片，除去糖衣。精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸小檗碱40mg），置100ml量瓶中，加沸水适量使盐酸小檗碱溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3.2 取本品20片，如为糖衣片，除去糖衣。精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸小檗碱40mg），置100ml量瓶中，加沸水适量使盐酸小檗碱溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 测定方法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。

2.4 方法学认证 加样回收试验：精密称取盐酸小檗碱对照品0.2032g，置于100ml量瓶中，加沸水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密称取已知含量的样品（批号：20140506，含量为0.7142g/g）28mg，分别精密加入上述对照品贮备液 7.5，10，12.5ml，按2.2.2项下方法配制溶液，按2.2.3测定方法测定。结果见表1。

2.5 含量测定 取10批不同厂家不同批号的盐酸小糪碱片，分别按原方法与改进方法平行测定3次，结果见表2。

表1 盐酸小檗碱片含量测定改进方法加样回收试验结果（n=9）

表2 样品含量测定结果（n=3）

作者单位：517000广东河源市食品药品检验所

3 结果与讨论

3.1 盐酸小檗碱片中盐酸小檗碱的含量测定是衡量该制剂质量的重要指标，2000版《中国药典》采用滴定法，2005版与2010版《中国药典》均采用高效液相色谱法测定样品含量。其中2005版《中国药典》采用沸水溶解后用0.45μm的滤膜过滤的的方法提取样品溶液，2010版《中国药典》将用0.45μm的滤膜过滤修订为直接过滤。实验中发现，样品加沸水溶解后，在冷却至室温的过程中有部分样品会析出絮状沉淀（此时对照品溶液澄清无沉淀析出）。样品析出沉淀后用0.45μm的滤膜过滤或直接过滤均会导致样品测定结果偏低且重复性较差，而用离心后取上清液稀释的方法测得的结果均重复性较好且含量较高，更能代表样品的真实含量。

3.2 因选择的改进方法仍采用药典规定的高效液相色谱方法，故未再对方法中色谱柱、流动相组成以及方法学中的线性关系、精密度试验、重复性试验进行考察。

3.3 笔者还考察了用流动相提取和用甲醇提取的样品提取方法。结果发现，用甲醇提取的方法对色谱柱的要求较高，流动相提取法与离心提取法的结果相近。考虑到用流动相提取消耗的有机试剂较多，方法较繁琐，故最后确定改进方法如正文。

3.4 由十批样品含量测定可知，有部分样品药典法与改进方法测得结果相差加大，改进方法所得结果明显高于药典方法。比较十批样品测定过程，发现样品冷却过程中析出大量沉淀的批次两种方法测定结果相差较大，而样品冷却过程中析出沉淀较少或不析出沉淀时测得结果较接近。由说明书可知十批盐酸小檗碱片所用辅料不同，怀疑过滤时某种辅料吸附盐酸小檗碱并残留在滤纸中，尚待进一步研究。

[1]中国药典委员会．中华人民共和国药典二部[M]．北京:化学工业出版社,2010:640．

[2]杜龙江,李晶波．盐酸小檗碱片含量测定样品溶液配制方法改进[J]．黑龙江医药,2012,25(1)．

[3]魏萍,陈新善,孔爱英．盐酸小檗碱片含量测定中样品溶液制备方法的考察与建议[J]．解放军药学学报,2010,26(5):449-450．

Method to improve in Processing the Test Solution of Deternination of Contents in Berberine Hydrochioride Tablets by HPLC

Gu Huiquan
(Heyuan city,the food and drug inspection,Guangdong province,517000)

Objective To establish a simple method for sample preparation of Berberine Hydrochloride tablets in assay.Methods The sample was prepared by centrifugation.Results Determination of sample with satisfactory results.Conclusion The sample preparation method is simple,staboe,accurate,and can be used for the content determination of Berberine Hydrochloride tablets.

HPLC；Berberine Hydrochloride Tablets；Method in Processing the test solution；centrifugation

R927．2

B