顶空进样法测定白酒中的氰化物

王海涛　颜世昕　刘奉申等

摘 要：随着国家食药总局加大食品安全的监管力度，白酒中氰化物含量的检测就显得格外重要，本文根据GBXXX-210X食品中氰化物测定（征求意见稿）所提供的检测方法，结合本公司实际，充分利用现有资源，建立了一套准确检测白酒中的氰化物的方法。本方法相关系数为0.9998，回收率为93%-110%。

关键词：白酒；氰化物；顶空进样器；气相色谱仪

1 概述

食品安全是国家和公众近年来普遍关注的问题，氰化物是严重危害食品安全的剧毒化合物，因此氰化物是酒类产品的一项重要的食品安全检测指标。由于白酒中的氰化物主要来自原料，以木薯和木薯类的原料酿造的酒，因它们含有氰苷类在生产过程中会水解产生氢氰酸。虽然大部分氢氰酸在原料蒸煮时可挥发，但有少量残留在酒中。

2 实验部分

2.1 原理

食品中的氰化物在酸性条件下用氯胺T将其衍生为氯化氰，顶空进样，气相色谱法检测，外标法定量。

2.2 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

（1）氯胺T（C7H7ClNNaO2S.3（H2O））：保存于干燥器中。

（2）浓磷酸（H3PO4）。

（3）氯胺T溶液1%：称取0.5 g氯胺T（1），用蒸馏水定溶至50 mL（现用现配）。

（4）磷酸溶液（1+5，V/V）：量取10mL浓磷酸（2），加50蒸馏水，混合均匀。

（5）氰化物标准溶液（分子式：KCN，）：1000mg/L（市售为KCN的0.1mol/lNaOH溶液）。

2.3 标准溶液配制

（1）氰化物（以CN计）标准中间溶液：准确移取1.00mL的氰化物标准溶液（5）于100 mL的容量瓶，0.1mol/l的标准NaOH溶液定容，此溶液浓度为10mg/L，在0℃～4℃冰箱中保存， 可使用3个月。

（2）0.01mg/l标准使用液配制：准确吸取10mg/l的标准中间液（1）0.1ml于100ml容量瓶中，用二次蒸馏水定容。现用现配。

2.4 仪器与设备

（1）气相色谱：美国安捷伦6820配有电子捕获检测器（ECD）；

（2）顶空进样器：上海思达精密仪器有限责任公司HS-16A；

（3）顶空瓶：美国安捷伦20 mL；

（4）涡流混合器；

（5）分析天平：感量0.0001 g；

（6）超声波清洗器：天津奥特赛恩斯仪器有限公司AS3120。

2.5 分析步骤

2.5.1 酒样样制备

取0.2ml酒样中加入9.8ml二次蒸馏水水于20ml顶空瓶中，摇匀后加入0.2ml1：5的磷酸溶液，摇匀后再加入0.2ml现配的氯胺T溶液，迅速封好顶空瓶盖，摇匀放入顶空进样器备检。

2.5.2 仪器参考条件

2.5.3 气相色谱参考条件

（1）色谱柱：安捷伦CP-WAX57CB毛细管柱，50m×0.25 mm（内径）×0.2μm（膜厚）；

（2）色谱柱温度：40℃保持5 min，以50℃/min速率升至 200℃保持10min；

（3）载气：氮气，纯度不低于99.999%；

（4）进样口温度：200℃；

（5）检测器温度：260℃；

（6）分流比：5：1；

（7）柱流速：2.0 mL/min；

2.5.4 顶空进样器条件选择

根据GBXXX-210X食品中氰化物测定（征求意见稿）提供的顶空进样器条件对标样进行实验性检测，发现灵敏度达不到检测要求，我们分析认为，安捷伦6820气相色谱仪使用年限较长，灵敏度可能会有一定程度的降低，同时发现顶空进样器的个别条件的变化对灵敏度的影响较为明显，因此我们进行了一系列的实验，对顶空进样器的条件进行了进一步优化（见表1）。

上表列出实验过程中比较有代表性的5组数据，从灵敏度分析，进样时间对出峰高度和面积影响较大，经过数据对比和稳定性、线性关系测试，最终确定4#实验条件为最佳条件，由此可确定顶空进样器的最优条件为：

（1）顶空进样器针头载气流速：16ml/min（3.8圈）；

（2）顶空平衡温度：50℃；

（3）取样针温度：55℃；

（4）传输线温度：100℃；

（5）分析周期：30min；

（6）顶空加热时间（平衡时间）：10min；

（7）加压时间：0.1min；

（8）充样时间：0.2min；

（9）充样平衡时间：0.05min；

（10）进针（进样）时间：0.1min；

（11）清扫时间：2min。

2.6 外标样检测及定性、定量方法的建立

外标样的制作：准确移取0.01mg/l标准使用液10ml于20ml的顶空瓶中，加入0.2ml1：5的H3PO4溶液，混匀后加入1%的氯氨T0.2ml立即封盖，摇匀后备检。以此为外标样。

待气相色谱仪稳定后（测试发现使用ECD的气相色谱仪需要按照2.5.3设置的条件至少运行三个空白才能进入稳定状态），将此样品放入顶空进样器，设置好顶空程序后开始测试，得到图1所示的标准色谱图。

根据图1得出的谱图、出峰时间、峰面积等信息建立定性、定量方法。

综合2.5.3气相色谱条件、2.5.4顶空进样条件和2.6外标定性、定量方法，至此已经建立起一整套完整、稳定、优化的氰化物检测方法。

2.7 酒样检测

按照2.5.1的步骤对酒样进行预处理，放入顶空进样器中进行检测，气相色谱软件将根据2.6建立的定性、定量方法得出被测酒样中氰化物的含量。如图2。

2.8 精密度

在重复试验条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

2.9 注意事项

（1）市售标样都是KCN的0.1mol/lNaOH溶液的溶液，在稀释过程中中间液需用0.1mol/lNaOH作为溶剂稀释，便于长时间保存，作为外标的样品可用二次蒸馏水稀释，现用现配；

（2）ECD检测器灵敏度比较高，开机后稳定需要比较长的时间；

（3）因检测氰化物使用外标法，酒样检测时可在酒样前后各加一个标样，确保数据的稳定性。

2.10 样品空白测定方法

在将样品溶液装于顶空瓶中加入0.2mL磷酸溶液，涡流混合后，通入氮气在50℃水域中吹扫15 min，其余步骤同样品处理，测定结果即为样品空白值。

用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中氰化物（以CN计）含量：

（1）

式中：

X——试样中氰化物（以CN计）的含量，单位为毫克每千克或毫克每升，mg/kg或mg/L；

C——由标准曲线得到的样液中氰化物的浓度，单位为毫克每升，mg/L；

C0——由标准曲线得到的样液中的空白浓度，单位为毫克每升，mg/L；

V——样品定容体积，单位为毫升，mL；

A——样品质量或体积，单位为克或毫升，g或mL。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数次。

参考文献：

[1]GBXXX-210X食品中氰化物测定（征求意见稿）[S].

[2]李源栋，樊林等.酒中氰化物测定方法的研究进展[J].酿酒，2009，11（06）.endprint