大鼠高位结肠透析方法的初步建立及疗效探析

姚辉洁 黄银兰 李洋洋 吕杨 洪权 杜婧

[摘要] 目的 建立大鼠高位结肠透析方法， 探析该方法对急性肾功能衰竭大鼠的治疗效果。 方法 健康雄性SD大鼠15只，随机分为正常组、模型组和治疗组（各5只），正常组不作任何处理，模型组和治疗组甘油诱导建立急性肾功能衰竭模型，治疗组给予高位结肠透析治疗，观察各组血肌酐、尿素氮水平变化。 结果 模型组和治疗组的血肌酐、尿素氮水平较正常组明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；治疗组的血肌酐值（230.98±95.51）μmol/L较模型组（317.90±77.63）μmol/L明显降低（P<0.05）；治疗组血尿素氮水平（35.00±11.93）mmol/L较模型组（52.53±21.5）mmol/L也有明显降低趋势，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 成功建立了大鼠高位结肠透析方法，期望为后期实验利用动物实验进行高位结肠透析的方法改进和机制研究奠定基础。

[关键词] 高位结肠透析；大鼠；方法

[中图分类号] R473.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）08（c）-0059-03

Preliminary Establishment of High Colon Dialysis in Rat and Its Efficacy

YAO Hui-jie1， HUANG Yin-lan1，LI Yang-yang1，LV Yang2， HONG Quan2， DU Jing2，3

1.Traditional Chinese Medicine College， Ningxia Medical University， Yinchuan， Ningxia，750004 China；2. Kidney Center of PLA and National Key Laboratory， General Hospital of PLA， Beijing， 100853 China；3. Department of Geriatric Nephrology， General Hospital of PLA， Beijing， 100853 China

[Abstract] Objective To establish the high colonic dialysis and observe its efficacy in treating acute renal failure in rats. Methods 15 healthy male SD rats were randomized into normal group， model group and treatment group with 5 in each group. The normal group was untreated， while acute renal failure model were established in the model group and treatment group followed by high colonic dialysis performed in the treatment group. The changes of serum creatinine and blood urea nitrogen levels were observed in all the three groups. Results The serum creatinine and blood urea nitrogen levels were higher in the model group and treatment group than in the normal group， and the differences were statistically significant， P<0.05； the serum creatinine level was lower in the treatment group than in the normal group， 230.98±95.51μmol/L vs 317.90±77.63μmol/L， and the difference was statistically significant， P<0.05； the blood urea nitrogen level was lower in the treatment group than in the normal group， 35.00±11.93 mmol/L vs 52.53±21.5 mmol/L， but the difference was not statistically significant， P﹥0.05. Conclusion Preliminary establishment of high colon dialysis in rat is realized， which may lay the foundation for the future improvement of high colon dialysis upon animal experiment， and for the study on its mechanism.

[Key words] High colon dialysis； Rat； Method

高位结肠透析是在传统中药灌肠的基础上逐渐发展起来的一种治疗方法，由于该方法操作简单、费用低、无明显不良反应，已被临床上用于急、慢性肾功能衰竭、重症肝病、高尿酸血症等疾病的治疗[1-4]。经查阅文献，该研究发现关于结肠透析的临床观察很多，但尚未见到通过动物实验进一步探究结肠透析的文章。我们尝试建立大鼠高位结肠透析方法，期望能够为后期实验中高位结肠透析的方法改进和机制研究奠定基础，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年5—10月，健康雄性SD大鼠15只（300±25）g，随机分为正常组、模型组和治疗组（各5只），动物室保持12 h昼夜循环，室温控制在19～29℃，湿度40%～70%，大鼠自由摄取水和食物，适应性喂养一周后，甘油诱导建立大鼠急性肾衰竭模型，以观察大鼠高位结肠透析的治疗效果。方法如下：实验动物限水不限食24 h，模型组和治疗组用50%甘油双下肢肌肉注射（8 mL/kg）诱导急性肾衰竭模型，正常组注射同等剂量的生理盐水。治疗组于造模前2 d开始给予大鼠高位结肠透析治疗， 1次/d， 1次1 h ，共5次。

1.2 方法

1.2.1 配置透析液 实验用透析液为按比例配制而成的碳酸氢盐透析液，排毒固肾汤由中国人民解放军总医院中药房一批购进大黄等中药，按需制成中药汤剂。

1.2.2 简易手动的结肠透析装置 大鼠体型小，没有合适的结肠透析机，我们选择带有刻度的一次性注射器制作简易手动的结肠透析装置，定量灌注透析液。医用管路采用一次性静脉输液针的软管作为单腔管路（约15 cm），先将针头剪掉并把软管一端修整圆钝，防止在操作过程中划伤大鼠，再将针托和注射器连接，制成简易手动的结肠透析装置。

1.2.3 大鼠高位结肠透析治疗及取材 选择长度约20 cm、直径5～6 cm、口径2～3 cm的瓶子，去掉瓶盖作为透气孔，在瓶子底部上2～3 cm处将瓶子分成两截，前半部分作为固定器的主筒，后半部分作为后盖，后盖上挖直径3～4 cm的孔，以充分暴露大鼠臀部，待大鼠钻进主筒后，将后盖盖上并固定，尾巴露出在固定器外，轻拉大鼠尾巴充分暴露臀部，①肠道清洗：将简易结肠透析装置的单腔管路由肛门缓慢插入到结肠中下段（距离肛门约10 cm），边插边注入生理盐水，重复注入直至大鼠无粪便排出。②结肠透析：一次性灌注碳酸氢盐透析液5 mL，每隔一分钟补充灌注一次，一次1 mL，重复操作1 h。③中药保留灌肠：一次性灌注排毒固肾汤5 mL，保留30 min。高位结肠透析治疗于造模前2 d开始，造模后第3天结束，1次/d，共5次。实验结束时戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，放于促凝管中，颠倒混匀。

1.3 观察指标

血液采集后室温静置40～120 min，3000 r/min离心10 min。分离上层血清，送中国人民解放军总医院生化科，全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮值。

1.4 统计方法

采用SPSS17.0进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，不同组之间比较用单因素方差分析，P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

模型组大鼠反应迟钝，精神萎靡，双下肢局部疼痛，行动受限， 1-4 h可见肉眼血尿，进食进水量减少；治疗组大鼠反应和精神状态较模型组有所改善，进食进水量亦有增加；正常对照组反应灵敏，精神良好，进食进水正常，尿液颜色正常。模型组血肌酐、尿素氮较正常组明显增加（P<0.05）； 和模型组相比，治疗组大鼠的血肌酐水平有所降低，差异有统计学意义（P<0.05），尿素氮水平也有所降低，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 急性肾衰竭大鼠的血肌酐、尿素氮改变（x±s）

注：*与模型组比较，P<0.05；#与正常组比较，P<0.05。

3 讨论

该研究尝试建立大鼠高位结肠透析方法，并观察该方法在大鼠急性肾功能衰竭模型中的治疗效果。在实验中，该研究采用从大鼠肛门反复灌注生理盐水，刺激肠蠕动，对肠道进行较彻底的清洗，减少了结肠粘膜对有毒物质的吸收和肾脏的负担，同时可以增大结肠粘膜的可灌洗面积、促进毒素排出体外。另一方面，该研究采用一次性注射器和静脉输液针的软管制作简易手动的结肠透析装置，可以使透析液深入到大鼠的降结肠甚至横结肠，从而增加了结肠黏膜的吸收面积，促进毒物排出体外。此外，在研究中利用大鼠固定器对大鼠进行固定，避免多次药物麻醉对实验动物的生理功能、机体状况造成较大影响，减少实验结果的干扰因素。该研究结果表明，经高位结肠透析治疗后，治疗组的血肌酐值（230.98±95.51）μmol/L较模型组（317.90±77.63） μmol/L明显降低，差异有统计学意义；同时，治疗组血尿素氮水平（35.00±11.93）mmol/L较模型组（52.53±21.5）mmol/L也有明显降低趋势，但差异无统计学意义（P>0.05），考虑可能与治疗时间较短、样本量较小有关。这说明该研究中建立的大鼠高位结肠透析方法对急性肾功能衰竭大鼠的肾功能改善有明显效果。

近年来，结肠透析已经被用于肾功能衰竭患者的治疗中。结肠粘膜具有半透膜特性，具有选择性吸收和分泌功能。利用这种半透膜特性，可以将结肠黏膜当做透析膜，在透析液持续灌入结肠后，由于结肠黏膜毛细血管与透析液之间存在不同的溶质浓度梯度和渗透压梯度，通过弥散和渗透的作用，体内的毒素和水分可以进入到透析液中，同时透析液中对人体有用的物质被吸收入血。相关研究表明，高位结肠透析可以改善急、慢性肾功能衰竭患者的临床症状、延缓肾功能恶化，改善患者的生存质量，且无明显的副反应，有广阔的发展前景[5-6]。张少泉等[7]利用高位结肠透析联合中药灌肠治疗慢性肾脏病（3～4期），治疗后患者的血肌酐、尿素氮、尿酸等都有所下降，患者的肾功能得到明显改善。黄新艳等[8]亦证明通腑降浊方结肠透析联合基础治疗慢性肾功能衰竭有较好的疗效。该研究结果表明大鼠高位结肠透析治疗急性肾功能衰竭可以有效改善大鼠的肾功能，这一研究结果与相关文献报道的数据相吻合。

综上，该研究初步建立了大鼠结肠透析治疗方法，可以排除体内积聚的毒素、延缓肾功能恶化。但是，大鼠结肠透析方法只是初步建立，样本量较少，在后续的研究中还需要进一步扩大样本量进行验证，同时对高位结肠透析的作用机理进一步深入研究探讨，并观察该方法的长期的疗效。

[参考文献]

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[2] 陈顺合，王维英，杨晓媛，等.降氮排毒液结肠透析配合西药治疗慢性肾功能衰竭疗效观察[J].陕西中医，2014（10）：1301-1303.

[3] 赵和平，侯田青，丁保华，等.结肠净化联合血浆置换治疗肝性脑病的疗效[J].世界华人消化杂志，2014（33）：5149-5152.

[4] 周攀，陆海娜，康桂芹，等.大黄附子汤高位结肠透析治疗慢性肾衰竭合并高尿酸血症患者30例的临床观察[J].中国中西医结合肾病杂志，2014（10）：907-908.

[5] 张丽香，孔薇，郑艳辉，等.中药结肠透析在慢性肾病中的应用进展[J].河北中医，2013（2）：304-306.

[6] 梁萌，龚春水，蔡辉. 结肠透析（灌洗结肠疗法）的有效性和安全性[J]. 中国中西医结合肾病杂志，2015（3）：189-191.

[7] 张少泉，刘东汉，倪向荣，等. 序贯式结肠透析联合中药灌肠治疗慢性肾脏病临床观察[J].山西中医，2015（1）：9-10.

[8] 黄新艳，李桂花，李平，等.通腑降浊方结肠透析联合西药治疗慢性肾功能衰竭随机平行对照研究[J].实用中医内科杂志，2015（3）：87-88.

（收稿日期：2015-05-27）