连翘薄层鉴别方法的改进△

周欢，王小平，白吉庆

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

·基础研究·

连翘薄层鉴别方法的改进△

周欢，王小平，白吉庆*

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

目的：对连翘薄层色谱鉴别的展开系统进行改进。方法：改进了原标准的展开系统，增加了芦丁、槲皮素的鉴别。采用硅胶G板，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)为展开剂，置紫外光灯(365 nm)下，检视连翘酯苷A和槲皮素；再喷10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，检视连翘苷和芦丁。结果：供试品色谱中，连翘酯苷A、槲皮素、连翘苷和芦丁的斑点清晰，重复性好。结论：该方法简单，用毒性较小的二氯甲烷替代了原标准中的三氯甲烷，绿色环保，同时还可以鉴别连翘中的芦丁、槲皮素，可替代原标准用于连翘的鉴别。

连翘；薄层鉴别；连翘苷；芦丁；连翘酯苷A；槲皮素

连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质后蒸熟、晒干，习称“青翘”。其具有清热解毒，消肿散结，疏散风热之功能，可用于治疗乳痈、丹毒、风热感冒、瘟病初起，痈疽，瘰疬，高热烦渴，神昏发斑，热淋涩痛[1]。连翘主产于山西、陕西、河南等地。青翘中富含苯乙醇苷类、木质素及其苷类、黄酮类、萜类、生物碱、挥发油等化合物[2-8]，现代临床上多用于治疗呼吸道感染，急性肾炎、肝炎、脑膜炎等疾病。现代药理研究表明，连翘具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝解热等作用[3-4，7-8]。2010版《中华人民共和国药典》中连翘的薄层色谱鉴别只鉴别了连翘苷，改进方法中新增芦丁、连翘酯苷A、槲皮素对照品，使方法更科学、更完整。同时原标准中展开剂使用了毒性较大的三氯甲烷，其有潜在的致癌性[9]，因此，本试验对展开系统进行了改进，以减少对人体的危害及环境的污染。通过研究，建立了一种较为理想的薄层鉴别展开系统。供试品色谱中所鉴别的成分斑点清晰，分离度好，重复性好。该方法可以替代原标准用于连翘的鉴别。

1 仪器和试药

1.1 仪器

JM-B20002电子天平(诸暨市超泽衡器设备有限公司，d=0.01 g)；BT 125D电子分析天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司，d=0.1 mg，0.01 mg]；200 g多功能粉碎机(上海树立仪表有限公司)；101-2型电热鼓风干燥箱(科伟)；KQ300VDE型双频数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外透射仪(上海宝山顾村电光仪器厂)；

1.2 试药

连翘苷对照品、芦丁对照品、连翘酯苷A对照品、槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为110821-200711，080-9705，111810-201103，100081-200907)；二氯甲烷、三氯甲烷、甲酸、甲醇、石油醚、乙酸乙酯等试剂均为分析纯。连翘药材经陕西中医学院白吉庆副教授鉴定为木犀科植物连翘的果实，产地为陕西商洛、河南三门峡、湖北郧县、河北井陉县。

2 方法和结果

2.1 方法

2.1.1 供试品溶液的制备 取本品粉末1 g，加石油醚(30～60 ℃)20 mL，密塞，超声处理15 min，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚；加甲醇20 mL，密塞，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使其溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照溶液的制备 精密称取连翘苷对照品1.61 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，稀释至刻度，摇匀，即得连翘苷对照品溶液；精密称取芦丁对照品1.01 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，稀释至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液；精密称取连翘酯苷A对照品1.58 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，稀释至刻度，摇匀，即得连翘酯苷A对照品溶液；精密称取槲皮素对照品1.02 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，稀释至刻度，摇匀，即得槲皮素对照品溶液。

2.2 结果

2.2.1 改进方法 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验[8]，吸取上述4种对照品溶液各2 μL和供试品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外光灯(365 nm)下检视连翘酯苷A和槲皮素，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结果见图1。再喷10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，检视连翘苷和芦丁，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结果见图2。

注：1.陕西产连翘；2.连翘酯苷A对照品；3.河南产连翘；4.槲皮素对照品；5.湖北产连翘。图1 连翘的薄层色谱法鉴别(改进方法)

注：1.陕西产连翘；2.连翘苷对照品；3.河南产连翘；4.芦丁对照品；5.湖北产连翘；6.河北产连翘。图2 连翘的薄层色谱法鉴别(改进方法)

2.2.2 原方法 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验[8]，吸取上述连翘苷对照品溶液和供试品溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结果见图3。

注：1.陕西产连翘；2.连翘苷对照品；3.河南产连翘；4.河北产连翘；5.湖北产连翘。图3 连翘的薄层色谱法鉴别(药典方法)

3 讨论

温度和湿度是薄层色谱鉴别的影响因素。本试验对展开环境的温度进行考察，结果在15～25 ℃，供试品色谱中主要斑点的分离度较好；同时对展开环境的相对湿度进行考察，分别考察了相对湿度为20%、30%、60%、75%，结果在20%～60%，供试品色谱中主要斑点的分离度较好。对改进后的方法进行了稳定性和重复性试验，稳定性试验表明，样品在8 h内进行薄层鉴别，供试品色谱中主要斑点的分离度较好；重复性试验表明，改进后的方法重复性良好。

2010版《中华人民共和国药典》中连翘的薄层鉴别只鉴别了连翘苷，本试验对连翘的展开系统进行优化，最终以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)为展开剂，对连翘进行鉴别。该鉴别方法在鉴别连翘苷的同时，还增加了连翘酯苷A、芦丁、槲皮素的鉴别，使连翘的鉴别更加完整。本次试验所建立的方法简单、专属性强、重复性好，可为修订该药的质量标准提供参考。

原标准中连翘薄层鉴别的展开系统中使用三氯甲烷为主要展开剂，该试剂毒性较大，而本试验用毒性较小的二氯甲烷代替三氯甲烷。改进后的展开系统不仅不会影响连翘中的连翘苷的鉴别，还能对连翘中的连翘酯苷A、芦丁、槲皮素进行鉴别，而且还减少了对人体的危害及环境的污染。

本试验所建立的方法不仅使连翘的鉴别更加科学、完整，而且还降低了展开系统对环境的污染及人体的伤害，可替代原标准用于连翘的鉴别。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：159-160.

[2] 白吉庆，王小平，曹林林.不同采收期青翘中4种活性成分的含量分析[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2012，40(7)：193-198.

[3] 付云飞，李清，毕开顺.RP-HPLC 法同时测定不同产地连翘中的7种成分[J].中草药，2013，44(8)：1043-1046.

[4] 胡静，马琳，张坚.连翘的研究进展[J].中南药学，2012，10(10)：760-764.

[5] 雷秋香，单彪，胡小倩.连翘药理学作用研究进展[J].河北医药，2012，34(24)：3802-3804.

[6] 雷建林，李艳桃，聂会生.HPLC法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量[J].中华中医药学刊，2012，30(1)：202-204.

[7] 叶良红.连翘有效成分的提取工艺和药代动力学研究[D].成都：成都中医药大学，2013.

[8] 许佳.青翅的质量标合理采收期初步研究[D].太原：山西大学，2013.

[9] 王海兰.三氯甲烷的职业危害与防护[J].现代职业安全，2014，153(5)：110-112.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFructusForsythiae

ZHOUHuan，WANGXiaoping，BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM，Xianyang712046，Shaanxi，China)

Objective：To improve the TLC identification method for Fructus Forsythiae.Methods：TLC developing system of the original quality standard was improved，and rutin and quercetin were added for identification.Using silica gel G thin layer plate，the sample，forsythoside A，rutin and quercetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(8∶1∶0.5).Forsythoside A and quercetin were detected under the uv lamp(365 nm)，thereafter the TLC plate was sprayed with 10% ethanol solution of sulfuric acid，and heated at 105 ℃ to examine forsythoside A and rutin.Result：In the chromatogram，the spots of forsythoside A，rutin and quercetin.The method was repeatable.Conclusion：The method is simple and environment friendly，could replace the original standard to identify Fructus Forsythiae.

Fructus Forsythiae；thin layer identification；forsythia glycosides；rutin；forsythia ester glycosides A；quercetin

2015-01-28)

国家工业和信息化部中药材扶持项目(工信部消费[2012]369号)；陕西省科技攻关中药现代化项目(2014K14-01-01)

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白吉庆，副教授，硕士生导师，研究方向：中药资源开发与利用研究；Tel：(029)38184880，E-mali:baijiqing323@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.010