不同采收期对何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的影响△

李帅锋，郑传柱，张丽，姚卫峰，兰才武，贺定翔，丁安伟*

(1.南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心，江苏 南京 210023；2.贵州昌昊中药发展有限公司，贵州 凯里 556000)

·中药农业·

不同采收期对何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的影响△

李帅锋1，郑传柱1，张丽1，姚卫峰1，兰才武2，贺定翔2，丁安伟1*

(1.南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心，江苏 南京 210023；2.贵州昌昊中药发展有限公司，贵州 凯里 556000)

目的：研究不同采收期对何首乌药材中二苯乙烯苷以及蒽醌类成分含量的影响，为何首乌适宜采收期的确定提供科学依据。方法：通过HPLC测定来自贵州施秉县不同采收期样品中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量，同时采用主成分分析法对不同采收期何首乌样品质量进行综合评价。结果：不同采收期何首乌样品中二苯乙烯苷含量由高到低依次为：9月份>10月份>8月份>11月份>12月份>1月份。结合型蒽醌含量在9月份达到峰值，随后随时间推移而降低。主成分分析结果显示：不同采收期何首乌样品综合评价指数9、10月份较高。结论：9、10月份为何首乌较为适宜的采收期。

何首乌；不同采收期；二苯乙烯苷；蒽醌

何首乌为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb.的干燥块根，其性微温，味苦，甘，涩。有生首乌与制首乌之分，生首乌具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的功效，用于疮痈，瘰疬，风疹瘙痒，久疟体虚，肠燥便秘；制首乌具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨，化浊降脂的作用，用于血虚萎黄，眩晕耳呜，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，高脂血症[1]。何首乌在全国范围分布广泛，主产于贵州、四川、湖北、广西、广东、河南等地[2-4]

《中华人民共和国药典》2010版中规定何首乌“秋、冬二季叶枯萎时采挖，削去两端，洗净，个大的切成块，干燥”，但并未对采收期做出具体规定，从而造成药材质量不一，不利于何首乌药材质量控制。目前关于何首乌适宜采收期的报道尚不多见，故本实验在收集贵州省施秉县GAP生产基地两年生不同采收期何首乌药材的基础上，利用HPLC法，以二苯乙烯苷与蒽醌类成分含量为指标，采用主成分分析综合评价法分析采收期对何首乌药材质量的影响，以期为确立何首乌的最佳采收期提供科学依据。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2998检测器；Empower色谱工作站。分析天平(SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01 mg)；高速离心机(Anke TGL-16B)；精密鼓风恒温干燥箱(DGT-G250)，超声清洗器(250W；50Hz)。乙腈为色谱纯(购自德国merck公司)，超纯水自制。二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚对照品购自成都瑞芬思生物科技有限公司(批号：F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，纯度均大于98%)，无水乙醇购自南京化学试剂有限公司(批号：1502253310)。

何首乌由贵州昌昊中药发展有限公司提供，药材来源见表1。经南京中医药大学段金廒教授鉴定为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunb.的干燥块根。润湿切厚片，置于恒温干燥箱中50 ℃，16 h烘干，粉碎，过四号筛，备用。

表1 何首乌药材来源

2 方法与结果

2.1 二苯乙烯苷含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 取二苯乙烯苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1 mL含0.186 mg的二苯乙烯苷溶液，即得[1]。

2.1.2 样品测定 取不同采收期何首乌样品粉末，按《中华人民共和国药典》2010版何首乌含量测定二苯乙烯苷项下的方法制备供试品溶液，每个样品平行2份，并按《中华人民共和国药典》2010版何首乌含量测定二苯乙烯苷项下的色谱条件进行测定，每份测定2次。计算各样品中二苯乙烯苷的含量，结果见表2。

图1 二苯乙烯苷对照品(A)和何首乌样品(B)HPLC图

2.2 结合蒽醌含量测定[1]

2.2.1 对照品溶液的制备 取大黄素、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含大黄素54.2 μg，大黄素甲醚18.8 μg的溶液，即得。

2.2.2 样品测定 取不同采收期何首乌样品粉末，按《中华人民共和国药典》2010版何首乌含量测定结合蒽醌项下的方法制备供试品溶液，每个样品平行2份，并按《中华人民共和国药典》2010版何首乌含量测定结合蒽醌项下的色谱条件进行测定，每份测定2次。计算各样品中结合蒽醌的含量(结合蒽醌含量=总蒽醌-游离蒽醌)，结果见表2。

由表2 可知，样品中二苯乙烯苷含量由高到低依次为：S2>S3>S1>S5>S4>S6，即9月份采收何首乌含量较高。结合蒽醌的含量呈先升高后降低趋势。

表2 不同采收期何首乌样品测定结果 (%)

1-大黄素；2-大黄素甲醚。图2 对照品(A)和何首乌样品(B)HPLC图

2.3 不同采收期的综合评价

采用SPSS 20.0统计软件，以二苯乙烯苷和蒽醌类含量和对应的样品组成矩阵，对不同采收期样品中各成分含量进行主成分分析，以其因子得分与方差贡献率成绩之和相加，得出各类成分总因子得分值，以得分值F大小评价采收期对何首乌药材质量的影响。由各因子载荷矩阵(表3)可知，二苯乙烯苷成分在主成分1上有较高载荷，蒽醌类在主成分2上有较高载荷，且两个主成分的累计贡献率达到96.44%，能够客观地反应何首乌药材的质量。故选用前两个主成分对不同采收期的何首乌药材进行综合评价，其综合评价函数为F=0.739 46f1+0.224 95f2，其中F为综合得分，f1为主成分1，f2为主成分2。综合得分结果见表4。

表3 何首乌中各活性成分因子载荷矩阵

表4 不同采收期药材主成分因子及品质综合评价

由表3可知样品综合评分有较大差异，其中9、10月份明显高于其他采收期。故以二苯乙烯苷和蒽醌类成分来看，9、10月份采收何首乌较为适宜。

3 讨论

3.1 不同采收期对二苯乙烯苷含量的影响

二苯乙烯苷类成分是何首乌药材中含有的一大类具有多种生物活性成分，其中以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)的量较高，《中华人民共和国药典》2010版规定其含量不低于1%[1]。二苯乙烯苷具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、降低胆固醇、抑制动脉粥样状硬化和保护肝脏等作用[5]，故选择该化合物作为考察不同采收期对何首乌药材中二苯乙烯苷类化合物的影响的指标性成分。实验结果表明贵州省施秉县样品二苯乙烯苷含量在9月份达到一个峰值，随后含量略有降低。

3.2 不同采收期对蒽醌类含量的影响

何首乌药材中蒽醌类成分包括游离型蒽醌和结合型蒽醌，蒽醌类成分多具有抗菌、消炎、泻下等生物活性。目前认为是何首乌药材发挥解毒、消痈、润肠通便功效的主要活性成分，且认为结合型蒽醌泻下通便作用强于游离型蒽醌[6]。本实验结果显示贵州施秉县何首乌样品中结合蒽醌含量同样在9月份达到峰值，随后呈现下降趋势。同时游离蒽醌含量总体呈现上升趋势，其结果符合结合蒽醌转化为游离蒽醌的论述[7]。

3.3 不同采收期对何首乌质量影响的综合评价

由于不同采收期何首乌样品中各化学成分的含量变化不尽相同，所以可以用主成分分析综合评价法对其进行综合评价，以确定何首乌的适宜采收期[8]。以二苯乙烯苷和蒽醌类成分为指标综合评价结果显示，9、10月份采收何首乌较为适宜，与二苯乙烯苷和结合蒽醌含量显示适宜采收期结果具有一致性。分析其原因可能是在营养生长期，养分不断积累，11月份进入果熟期消耗大量养料所致[9]。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部 [S].北京：中国医药科技出版社.2010，164-165.

[2] 中国药材集团公司.中国中药资源[M].北京：北京：科学出版社，1995：2231.

[3] 徐国钧，徐珞珊，王峥涛.常用中药材品种整理隔和质量研究：第3册[M].福州：福建科学技术出版社，1999：431.

[4] 易思荣，黄娅，肖中，等.何首乌的高产栽培技术[J].中国现代中药，2008，10(3)：41-43.

[5] 谢岚.何首乌及二苯乙烯苷的研究进展[J].天津药学，2010，22(03)：70-73.

[6] 罗瑞芝，贾伟，赵利斌，等.何首乌研究进展[J].中草药，2005，36(7)：1097-1100.

[7] 郭盛，段金廒，吴达维，等.干燥方法对何首乌块根中多元功效物质转化的影响[J].中草药，2014，45(04)：498-503.

[8] 段金廒，严辉，宿树兰，等.药材适宜采收期综合评价模式的建立与实践[J].中草药，2010，41(11)：1755-1760.

[9] 蔡丽芬.何首乌质量标准的研究[D].北京中医药大学，2009.

EffectofHarvestSeasonsonMainBioactiveConstituentsinPolygoniMultifloriRadix

LiShuaifeng1，2，ZhengChuanzhu1，2，ZhangLi1，2，YaoWeifeng1，2，LanCaiwu3，HeDingxiang3，DingAnwei1，2*

(1.JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization，andNationalandLocalCollaborativeEngineeringCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrializationandFormulaeInnovativeMedicine，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China； 2.GuizhouChanghaoChineseMedicineDevelopmentCo.，Ltd.，Kaili556000，China)

Objective：To explore the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents inPolygoniMultifloriRadix(PMR)，and provide scientific evidence for the suitable harvest season for PMR.Methods：HPLC was used to determine the contents of stilbene glycosides，free and conjugated anthraquinones of samples of different harvest seasons from Shibing county of Guizhou province.Component analysis(PCA)was used through the software of SPSS 20.0 to assess the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents.Results：The contents of stilbene glycosides in the samples of different harvest seasons were as follows in descending order：September>October > August>November>December>January.The contents of conjugated anthraquinonesreached the peak onSeptemberand then descended over time.The results of PCA also showed that the comprehensive scores of samples of September and October were higher.Conclusion：Appropriate collecting-times of PMR were in September and October.

Polygoni Multiflori Radix；different harvest seasons；stilbene glycoside；anthraquinone

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.015

2015-01-13)

国家“十二五”科技支撑计划项目(2011BAI13B04)；贵州省中药现代化专项(黔科合中药字[2013]5059号)；江苏省中药资源产业化过程协同创新中心重点项目(ZDXM-1-3)；江办高校优势学科建设工程资助项目(ysxk-2014)；江苏高校品牌专业建设工程资助项目(PPZY2015A070)

*

丁安伟，教授，研究方向：中药炮制与质量控制研究；Tel：(025)85811523，E-mail：awding105@163.com