HPLC测定复方苦参止痒软膏中苦参碱的含量△

于思杰，赵久丽，曹俊岭，吕嘉卫，屈双擎，瞿幸，聂波*

(1.涿州市医院，河北 涿州 072750；2.北京中医药大学东直门医院 中医内科学教育部和北京市重点实验室，北京 100700；3.北京中医药大学东直门医院，北京 100700)

·中药工业·

HPLC测定复方苦参止痒软膏中苦参碱的含量△

于思杰1，赵久丽2，曹俊岭3，吕嘉卫3，屈双擎3，瞿幸3，聂波2*

(1.涿州市医院，河北 涿州 072750；2.北京中医药大学东直门医院 中医内科学教育部和北京市重点实验室，北京 100700；3.北京中医药大学东直门医院，北京 100700)

目的：建立复方苦参止痒软膏中苦参碱的HPLC含量测定方法。方法：ZORBAX NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-无水乙醇-3%磷酸水溶液(80∶10∶10)；流速为0.8 mL·min-1；检测波长为220 nm；柱温为35 ℃。结果：苦参碱质量浓度在0.012 5～0.600 mg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 7，平均回收率为99.8%(n=7)，RSD=2.10%。结论：该方法准确、快速、灵敏度高，可用于复方苦参止痒软膏的质量控制。

复方苦参止痒软膏；苦参碱；高效液相色谱法

复方苦参止痒软膏是北京中医药大学东直门医院皮肤科主任瞿幸教授的临床经验方(目前组方和工艺已取得专利授权，专利授权号：201310179396.6)，是由苦参、黄柏、蛇床子等中药组成的复方制剂，具有清热燥湿，解毒祛风，润肤止痒的功能，对于皮肤有淡红斑、丘疹、鳞屑、干燥瘙痒的亚急性、慢性湿疹皮炎均有较好的疗效[1]。该制剂临床应用20余年，使用方便，价格低廉，疗效确切，得到广大患者的认可，目前需求量逐年增加。但现有质量标准对于质量控制仅仅是薄层色谱鉴别，本研究采用HPLC构建该制剂君药苦参中苦参碱的含量测定方法，以提高该制剂质量标准，更好地对生产过程进行质控，保证用药安全有效。

1 仪器和材料

1.1 仪器

LC-10Atvp高效液相色谱仪(日本岛津公司，配10AV P二元泵、SPD10A二极管阵列检测器、柱温箱、在线脱气机、手动进样器及系统控制器)；超声波清洗机(型号：SB5200，上海新芝生物技术研究所)；循环水式多用真空泵(型号：SHB-Ⅲ，郑州长城科贸有限公司)；万分之一电子分析天平(型号：SHANGPINGJA1003，上海天平仪器厂)。

1.2 材料

苦参碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110805-200508)；复方苦参止痒软膏(北京中医药大学东直门医院，批号分别为400001，400002，400003)；阴性样品(北京中医药大学东直门医院)；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取苦参碱对照品8 mg，加乙腈-无水乙醇(8∶1)定容至10 mL，制备成质量浓度为0.8 mg·mL-1的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取本品10 g，加水50 mL，搅拌，用抽滤法滤过，滤液加浓氨试液1 mL，用三氯甲烷提取4次，每次15 mL，合并提取液，蒸干，残渣加乙腈-无水乙醇(8∶1)1 mL，使其溶解，作为供试品溶液。

2.3 色谱条件

色谱柱为ZORBAX NH2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-无水乙醇-3%磷酸水溶液(80∶10∶10)；检测波长为220 nm；流速为0.8 mL·min-1；柱温为35 ℃。在此色谱条件下，样品与对照品在相同保留时间出现相同色谱峰，阴性对照品在此保留时间无干扰，样品中苦参碱达到基线分离，分离度良好，无其他色谱峰干扰。对照品、阴性对照品、样品的HPLC图，见图1。

注：A.对照品；B.阴性对照品；C.样品；1.苦参碱。图1 复方苦参止痒软膏中苦参碱的HPLC图

2.4 标准曲线的绘制

精密量取2.1项下对照品储备液，按倍数稀释法制备8个浓度的标准品试液，质量浓度分别为0.6、0.3、0.2、0.15、0.1、0.05、0.025、0.012 5 mg·mL-1。分别吸取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定。以对照品浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，计算回归方程，苦参碱在0.012 5 ～0.6 mg·mL-1线性关系良好，回归方程为：Y=13 956X+65 013，r=0.999 7(n=8)。

2.5 精密度试验

精密吸取2.4项下质量浓度为0.1 mg·mL-1的对照品溶液20 μL，连续进样测定7次。苦参碱色谱峰峰面积的RSD为2.6%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取质量浓度为0.1 mg·mL-1的同一对照品溶液20 μL，分别于0、40 min，1.5、3、6、9、21 h进样测定，苦参碱色谱峰峰面积的RSD为1.20%，说明对照品溶液在21 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批次的样品6份，按2.2项下方法平行制备供试品溶液，进样测定，苦参碱质量分数的RSD为1.20%，表明该方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批供试品7份，各10 g，分别加50 mL水，后加入精密称取的苦参碱对照品，然后按2.2项下的供试品溶液制备方法进行制备，按2.3项下的条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 复方苦参止痒软膏中苦参碱加样回收率结果(n=7)

2.9 样品测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按所建立的色谱条件进行检测，结果见表2。

表2 复方苦参止痒软膏中苦参碱的含量(n=3)

3 讨论

3.1检测波长的选择

取苦参碱对照品溶液经二极管阵列检测器进行紫外线光谱扫描，结果在202 nm处有最大吸收，但在此波长下干扰多，基线不稳定。经过比较，选择220 nm作为检测波长，此波长下干扰少，基线稳定，重复性好，且吸收度合适[2]。

3.2 色谱柱、流动相、流速的选择

根据文献报道的苦参碱HPLC含量测定方法，分别考察了C18色谱柱下乙腈或甲醇-不同浓度的磷酸水为流动相[3-4]和NH2色谱柱下乙腈-不同比例的无水乙醇-3%磷酸水为流动相[5]，发现苦参止痒软膏中的苦参碱在C18色谱柱下色谱峰峰形对称性差，无法达到基线分离；而在NH2色谱柱下苦参碱分离度和峰形都得到很好改善。进一步比较1.0、0.8、0.6 mL·min-1流速下的分离情况，发现流速为0.8 mL·min-1时，苦参碱的分离度较好，且保留时间适中。因此，选择ZORBAX NH2色谱柱，以乙腈-无水乙醇-3%磷酸水溶液(80∶10∶10)为流动相，0.8 mL·min-1的流速进行测定，得到的供试品色谱中苦参碱色谱峰较对称，与其他色谱峰分离良好，且基线较为平稳。

3.3 样品及对照品溶剂的选择

分别采用甲醇、乙腈作为溶剂溶解对照品及样品，发现存在干扰峰，影响苦参碱色谱峰的分离度。采用乙腈-无水乙醇-3%磷酸水溶液(80∶10∶10)为流动相，溶解后，干扰峰消失，目标色谱峰分离效果理想。

3.4复方苦参止痒软膏为北京中医药大学东直门医院院内制剂，在皮科临床已应用20余年，需求量逐年增加。临床研究表明，复方苦参止痒软膏外用治疗亚急性、慢性湿疹的临床疗效好、安全性高，生活质量指数评分优于对照组(霜膏基质安慰剂组)。该研究建立制剂君药苦参中苦参碱的HPLC含量测定方法，提高了该制剂的质量标准，该方法快速、准确、灵敏度高，可作为复方苦参止痒软膏生产过程中的质量控制方法。

[1] 戴明，瞿幸，张霞.复方苦参止痒霜治疗湿疹的实验研究[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2005，4(4)：234-236.

[2] 彭红华，蒋嫦月，林吴，等.不同生长年限山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量比较[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(8)：72-75.

[3] 傅小英，曹红.高效液相色谱法测定苦参碱乳膏中苦参碱的含量[J].解放军药学学报，2006，22(5)：385-386.

[4] 王晓萍，石会丽，李富贤，等.HPLC法同时测定苦刺花中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量[J].陕西中医，2014，35(9)：1247-1249.

[5] 田娟，王维皓，高慧敏，等.HPLC测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量[J].中国中药杂志，2007，32(3)：222-224.

DeterminationofMatrineinCompoundKushenAntipruriticOintmentbyHPLC

YUSijie1，ZHAOJiuli2，CAOJunling3，LYUJiawei3，QUShuangqing3，QUXing3，NIEBo2*

(1.DepartmentofDermatology，ZhuozhouMunicipalHospitalHebeiZhuozhou072750，China；2.KeyLaboratoryofChineseInternalMedicineofMinistryofEducationandBeijing，DongzhimenHospital，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing 100700，China；3.DongzhimenHospital，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100700，China)

Objective：To establish an HPLC method for determination of matrine in Compound Kushen antipruritic ointment.Methods：ZORBAX NH2column(250 mm×4.6 mm，5μm)was used with acetonitrile-ethyl alcohol-3%phosphoric acid(80∶10∶10)as the mobile phase，the flow rate was 0.8 mL·min-1，and the detection wavelength was set at 220 nm with temperature at 35℃.Results：Good linearity was shown between the concentration and peak area in the concentration range of 0.125-0.600 mg·mL-1for the matrine，The average recovery rate was 99.80% and RSD was 2.10%.Conclusion：The method is accurate，rapid，highly sensitive，and can be used for the quality control of Compound Kusheng antipruritic ointment.

Compound Kushen antipruritic ointment；matrine；HPLC

2015-04-24)

北京市中医药科技项目(YNZJ2011-03)

*

聂波，博士，副研究员，研究方向：中药药理与中药体内代谢；E-mail：nieboww_1977@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.5.018