HPLC同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量

汪杨丽，邓开英，郑小平，杨帆

(重庆市食品药品检验检测研究院 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

·中药工业·

HPLC同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量

汪杨丽*，邓开英，郑小平，杨帆

(重庆市食品药品检验检测研究院 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

目的：建立同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C和淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。方法：采用Agilent C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(26∶74)；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为270 nm。结果：朝藿定C进样量在0.288～9.198 μg、淫羊藿苷进样量在0.111～3.558 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)；朝藿定C的平均回收率为103.0%，RSD=0.8%(n=6)；淫羊藿苷的平均回收率为98.9%，RSD=1.8%(n=6)。结论：本方法简便、准确，重复性好，可作为羊藿三七胶囊中淫羊藿的含量测定方法。

高效液相色谱法；羊藿三七胶囊；朝藿定C；淫羊藿苷

羊藿三七胶囊由淫羊藿、三七两味中药加工制成，具有温阳通脉，化淤止痛的功能[1]。用于阳虚血瘀所致的胸痹，症见胸痛、胸闷、心悸、乏力、气短等。《中华人民共和国药典》2010版中淫羊藿的药用部位由2005版中的地上部分修订为叶[2-3]。有研究表明[4-5]淫羊藿的叶中总黄酮含量高于淫羊藿的茎。淫羊藿总黄酮的主要成分为朝定藿的淫羊藿苷。淫羊藿总黄酮的主要有效成分是朝藿定C和淫羊藿苷[6]，多数淫羊藿药材中朝藿定C含量较高，而淫羊藿苷的含量较低[5，7]。仅以淫羊藿苷作为其质量控制指标不尽合理，本文建立一种以朝藿定C和淫羊藿苷为双检测指标的高效液相色谱测定法，以期为羊藿三七胶囊质量标准的完善提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695高效色谱系统；Waters 2489检测器；Empower色谱工作站。

1.2 试药

淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110737-200415)；朝藿定C对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-13122312，纯度98.17%)；羊藿三七胶囊(重庆三峡云海药业公司，批号分别为A0601，A1201，A1202，B0101)；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取朝藿定C对照品和淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为1.839 7、0.711 6 mg·mL-1的单一成分对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备

取羊藿三七胶囊装量差异项下羊藿三七胶囊的内容物，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声(功率：500 W，频率：40 kHz)处理1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(26∶74)；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为270 nm；进样量为10 μL。

2.4 阴性对照溶液的制备

取按处方及工艺制备的缺淫羊藿阴性对照品0.5 g，照2.2项下的供试品制备方法处理，制成缺淫羊藿阴性对照溶液。

2.5 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入色谱仪，按2.3项下色谱条件进行测定，记录色谱图，在与朝藿定C和淫羊藿苷对照品相应的保留时间处没有色谱峰，说明阴性对照溶液无干扰，见图1。

注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.朝藿定C；2.淫羊藿苷。图1 朝藿定C和淫羊藿苷HPLC图

2.6 线性关系考察

精密吸取朝藿定C、淫羊藿苷对照品储备液各2.5 mL(质量浓度分别为1.839 7、0.711 6 mg·mL-1)，置5 mL量瓶中，摇匀，即得混合对照品溶液。逐级稀释，得质量浓度分别为0.919 8、0.459 9、0.230 0、0.115 0、0.057 5、0.028 8 mg·mL-1朝藿定C与质量浓度分别为0.335 8、0.177 9、0.089 0、0.044 5、0.022 2、0.011 1 mg·mL-1淫羊藿苷的混合对照品溶液。精密吸取上述混合对照品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，按2.3项下的色谱条件测定，记录峰面积。用最小二乘法进行线性回归，得回归方程，朝藿定C：Y=2×106X-225 137，r=0.999 9；淫羊藿苷：Y=2×106X-126 878，r=0.999 9。结果表明，朝藿定C和淫羊藿苷在0.228～9.198 μg、0.111～3.558 μg与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取质量浓度为0.459 9 mg·mL-1朝藿定C和质量浓度为0.177 9 mg·mL-1淫羊藿苷的混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积。计算朝藿定C和淫羊藿苷峰面积的RSD均为0.3%。

2.8 重复性试验

取同批样品(批号：B0101)，按2.2项下的方法制备6份供试品溶液，计算含量。结果朝藿定C平均含量为12.0 mg/粒，RSD为0.4%；淫羊藿苷平均含量为4.4 mg/粒，RSD为1.3%。

2.9 稳定性试验

取同一供试品溶液(批号：B0101)，分别于0、2、4、6、8、10 h进样10 μL，测定峰面积，结果朝藿定C和淫羊藿苷峰面积的RSD分别为0.2%、0.9%，表明样品溶液在10 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

精密吸取2.1项下的朝藿定C对照品溶液5.3 mL、淫羊藿苷对照品溶液5.4 mL，同时置6个具塞锥形瓶中，溶剂蒸干，精密称取已测定含量的样品(批号：B0101)0.25 g，共6份，分别加入上述具塞锥形瓶中。按2.2项下的方法制备供试品溶液，测定朝藿定C和淫羊藿苷的含量，计算平均回收率，见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.11 耐用性试验

采用Agilent 1100色谱仪、Waters C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)和Waters 2695色谱仪、Agilent C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，按2.3项下谱条件分别测定同批样品(批号：B0101)，结果显示：供试品溶液均得到很好地分离，朝藿定C的含量分别为12.03、11.99 mg/粒，淫羊藿苷的含量分别为4.49、4.44 mg/粒。

2.12 样品测定

取4批羊藿三七胶囊(批号分别为A0601，A1201，A1202，B0101)，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.3项下色谱条件测定，结果见表2。

表2 样品测定结果 (mg/粒)

3 讨论

3.1参考文献[3，11]试验中比较了甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇4种提取溶剂，提取时间分别考察了20、40、60、80 min。结果表明，稀乙醇超声处理1 h的提取效果好。试验又考察了稀乙醇超声提取1 h和原标准的甲醇索氏提取4 h两种方法，结果表明2种方法提取效率均可，但超声提取操作相对简单、快捷。

3.2试验曾选用了乙腈-水、乙腈-1%冰醋酸[12]、乙腈-0.05%磷酸等流动相，结果乙腈-水系统使样品中淫羊藿苷的保留时间不稳定；与乙腈-1%冰醋酸相比，乙腈-0.05%磷酸系统中朝藿定C和淫羊藿苷2个色谱峰的分离效果更好，且保留时间适宜。

3.34批羊藿三七胶囊中朝藿定C含量基本比淫羊藿苷含量高一倍，印证了朝藿定C是淫羊藿总黄酮类的主要有效成分之一，初步认定以朝藿定C和淫羊藿苷的总量评价该制剂中淫羊藿的质量更合理。

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SimultaneousDeterminationofEpimedinCandIcariininYanghuoSanqiCapsulesbyHPLC

WANGYangli*，DENGKaiying，ZHENGXiaoping，YANGFan

(ChongqingInstituteForFoodandDrugControl，ChongqingEngineeringTechnologyResearchCenterforPharmaceuticalProcessandQualityControl，Chongqing401121，China)

Objective：To establish a HPLC method for simultaneous determination of epimedin C and icariin in Yanghuo Sanqi Capsules.Methods：The samples were separated on Agilent C18 column(150 mm×4.6 mm，5 μm)by acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution(26∶74)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1and the detection wavelength was 270 nm.Results：The calibration curves showed good linearity in the range of 0.288-9.198 μg(epimedin C)，0.111-3.558 μg(icariin).The average recoverise(n=6)were 103.0%(RSD=0.8%)，98.9%(RSD=1.8%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be used for the determination ofEpimediiFolium in Yanghuo Sanqi Capsules.

HPLC；Yanghuo Sanqi Capsules；epimedin C；icariin

2014-08-25)

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汪杨丽，硕士，主管中药师，研究方向：中药分析；Tel：(023)86072753，E-mail：wangyangli27@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.5.017