高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔乳膏的含量

谢新民，刘志刚，黄雪峰，袁 进

(中国人民解放军广州军区广州总医院药剂科，广东 广州 510010)

盐酸普萘洛尔是β－受体阻断剂，临床主要用于心血管系统疾病及甲状腺功能亢进症等[1]，外用盐酸普萘洛尔对浅表血管瘤有效[2]。在外用制剂中，乳膏剂使用方便，可避免溶液剂在使用时药物流失导致的剂量不准，对浅表血管瘤更为合适。盐酸普萘洛尔乳膏为我院自制制剂，主要用于浅表血管瘤的治疗，临床效果好。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定盐酸普萘洛尔乳膏的含量，方法简单、快速，结果可靠。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;Sartorius BP211D型电子分析天平。盐酸普萘洛尔对照品(中国药品生物制品检定所，批号100783－200401);盐酸普萘洛尔乳膏(本院普制室，批号为120607，120816，120923);甲醇(色谱纯，Dikma 公司);纯化水(自制);其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:磷酸二氢钾(含 0.1%庚烷磺酸钠的 0.05 mol/L)－甲醇(50 ∶50);流速:1.0 mL/min;检测波长:290 nm，柱温:30℃。

2.2 溶液制备

精密称取盐酸普萘洛尔对照品适量，置容量瓶中，用水溶解稀释并制成每1 mL中含200 μg盐酸普萘洛尔的溶液，摇匀，作为盐酸普萘洛尔对照品溶液。取供试品适量(约相当于盐酸普萘洛尔20 mg)，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入75%甲醇适量，于70℃水浴中加热至溶解，冰箱中放置10 min，放至室温，加75%甲醇至刻度摇匀，作为供试品溶液。按处方称取除去盐酸普萘洛尔的辅料，按工艺制成阴性样品，作为阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察[3]

专属性考察:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液分别进样10 μL，记录色谱图(见图1)。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应保留时间处有相应色谱峰，阴性对照品溶液在此保留时间处无相应色谱峰，表明其对检测无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取盐酸普萘洛尔对照品制成质量浓度为100，200，300，400，500 μg/mL 的系列溶液，精密量取 10 μL 分别注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图，以盐酸普萘洛尔质量浓度(X，μg)对峰面积(Y)进行回归，得回归方程 Y=1 130.5 X－48.29，r=0.999 7(n=5)。结果表明，盐酸普萘洛尔质量浓度在97.08 ～485.4 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取2.2项下供试品溶液10 μL，在拟订色谱条件下重复进样6次，以盐酸普萘洛尔峰面积计算。结果的RSD为0.33%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性考察:精密吸取2.2项下同一供试品溶液10 μL，分别于 0，1，2，3，4，5，12 h 时进样，按拟订色谱条件测定峰面积。结果盐酸普萘洛尔平均含量为105.21%，RSD为0.54%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定，可满足测定需要。

重复性试验:取同一批号样品(批号为120607)，按2.2项下制备方法制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件测定峰面积。结果盐酸普萘洛尔平均含量为103.01%，RSD为1.36%(n=6)，表明方法具有较好的重现性。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为120607)约1 g，加入对照品适量，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入75%甲醇适量，于70℃水浴中加热至溶解，冰箱中放置10 min，放至室温，0.2 μm微孔滤膜滤过，按拟订色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸普萘洛尔加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

精密量取供试品溶液与对照品溶液各10 μL分别注入高效液相色谱仪，照2010年版《中国药典(二部)》附录ⅤD[4]中HPLC法测定。依照上述含量测定方法，测定3批样品。结果3批样品(批号为120607，120816，120923)中盐酸普萘洛尔含量分别为标示量的 102.89%，100.52%，99.88%。

3 讨论

盐酸普萘洛尔在水或乙醇中溶解，但当溶剂为纯水、纯乙醇、纯甲醇或醇水混合比例不当时，HPLC色谱峰会出现双峰，而盐酸普萘洛尔乳膏在纯水中或含水比例较高的醇水混合物中溶解效果不佳。通过试验确证，供试品的制备用75%甲醇在70℃水浴中加热溶解，在冰箱中放置10 min，HPLC色谱图峰形好，含量测定结果准确。参考文献[5－6]，对盐酸普萘洛尔乳膏含量测定的流动相的选择进行试验，结果以磷酸二氢钾(含0.1%庚烷磺酸钠的0.05 mol/L)－甲醇(50∶50)为流动相时，供试品分离效果最好。HPLC法是目前盐酸普萘洛尔定量分析应用较多的方法，而对盐酸普萘洛尔乳膏中盐酸普萘洛尔的含量测定未见报道。本研究中采用HPLC法测定盐酸普萘洛尔乳膏的含量，结果表明该方法简便、准确、重现性好。

[1]王 超，陈 飞，洪丽娟，等.盐酸普萘洛尔渗透泵片的制备及Beagle犬体内药动学研究[J].中国新药杂志，2008，17(2):146－149.

[2]Wang Lie，Xia Yin，Zhai Yanan，et al.Topical propranolol hydrochloride gel for superficial infantile hemangiomas[J].J Huazhong Univ Sci Technol，2012，32(6):923 － 926.

[3]冷柏榕，严相平.高效液相色谱法测定非布司他片的含量[J].中国药业，2013，22(6):69 －70.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅤD.

[5]赵纯玉，王 玲，易燕群.HPLC法测定盐酸普萘洛尔片的含量[J].首都医药，2011，18:59 －60.

[6]马春燕.高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片含量[J].中国药师，2005，8(8):637 －638.