电针治疗功能性消化不良大鼠海马体NMDA受体的调节机制＊

李跃兵 张 泓 李铁浪 曾序求

湖南中医药大学针灸推拿学院，湖南省长沙市 410208

功 能 性 消 化 不 良［1～3］（Functional dyspepsia，FD）是以消化道动力与内脏感觉异常为主要病理生理特征，并有多种症状重叠、多变或相互转换以及反复发作、较难治愈等特点的一组消化系统疾病。海马体［4～6］是大脑边缘系统的主要组成部分，一方面接受内外环境的刺激，及时做出反应；另一方面接受体内神经递质的反馈信息，调整其状态，产生适应性反应。NMDA 受体［7～9］，即为 N－甲基－D－天冬氨酸受体（N－methyl－D－aspartic acid receptor，NMDA），是离子型天冬氨酸受体的一个亚型，分子结构复杂，药理学性质独特，不仅在神经系统发育过程中发挥重要的生理作用，而且对神经元回路的形成亦起着关键的作用。NMDA受体广泛分布于突触后膜，在对输入海马体的信号调节中，NMDA受体是唯一的突触后处理场所。笔者将海马体NMDA受体调节通路引入对功能性消化不良的研究观察中，为探索胃肠病发病机制提供了新的研究层面。

1 实验材料

动物健康SD大鼠60只，湖南中医药大学动物实验中心提供（SPF级）。饲养温度20～25℃，湿度50%～70%，体重200～250g，雄性。

2 方法

2.1 分组 60只大鼠随机分为4组，每组15只，分别为空白对照组（A组）、FD模型组（B组）、电针穴位＋模型组（C组）、电针＋MK－801干扰组（D组）（MK－801为NMDA受体拮抗剂）

2.2 造模 采用复合病因造模法［10］，将SD大鼠于每天上午9：00置于束缚盒中限制3h；下午2：00置于温水（22±1）℃中游泳10min；隔日喂食（隔日禁食，隔日足量给食），连续3周。

2.3 取穴定位 参照“十一五”国家规划教材《实验针灸学》（中国针灸出版社，李忠仁主编，2007.1），大鼠标准穴位图谱定位及拟人对照法定位。足三里：位于小腿外侧，膝关节后外侧，腓骨小头下约5mm；中脘：从胸剑联合至脐中以松紧带平均分为8等份（每一等份模拟大鼠同身寸1寸），中脘穴为脐上4寸。

2.4 电针方法 所有穴位均用直刺，选择电针方法。大鼠清醒固定，各穴均用30号1寸针，针刺深度0.2～0.3寸，进针后，接华佗牌SDZ－Ⅱ电针治疗仪（苏州医疗用品有限公司），疏密波（20Hz，波频率100Hz），强度以针柄轻微抖动为度，每次留针20min，于造模第3天开始针刺，隔日1次，8次为1个疗程，共2个疗程（16次）。

2.5 MK－801注射方法 微量注射 MK－801溶液0.5μl（大鼠海马体的注射位点：300～350g SDmale rats：AP＝－2.5L＝±4.4dv＝－7.9）。

3 实验步骤

造模完成后第2天，C、D两组电针足三里、中脘穴和阿是穴，每日1次，每次留针20min，共14次，D组于大鼠海马体微量注射 MK－801溶液0.5μl。造模完成后第36天，每组取8只直接断头取脑，无菌剥离海马CA1区，BLA区，DG区存放于－70℃冰箱做RT－PCR。

4 检测指标

4.1 胃排空率的测定 治疗结束后，各组大鼠禁食24h后，给予每只大鼠按1ml／100g灌胃容积灌服营养性半固体糊 （羧甲基纤维素钠5g、奶粉8g、糖4g、淀粉4g、活性炭3g、蒸馏水约150ml），30min后处死动物，打开腹腔，分离出胃。沿胃幽门处剪取胃，拭干，称全重（M1），再沿胃大弯处剪开胃，用生理盐水洗净内容物，用滤纸拭干，称胃净重（M2），计算胃残留率。胃残留率（%）＝（M1－M2）／灌胃量×100%。

4.2 小肠推进率的测定 治疗结束后，各组大鼠禁食、灌胃方法同前，30min后处死动物，打开腹腔，分离出肠。量小肠全长（L1）以及幽门至炭末所达最前端的长度（L2），计算肠推进率，小肠推进率（%）＝L2／L1×100%。

4.3 中枢神经系统NMDA 受体通路：用免疫组化、RT－PCR检测各组大鼠海马体BLA区的NMDA受体亚基NR1、NR2变化。

5 统计方法

所有数据均输入计算机，用SPSS19.0windows软件进行处理。各检测指标统计数据均用均数和标准差（±s）表示，均数比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

6 结果

C组、D组大鼠胃排空与B组相比，明显升高且差异有统计学意义（P＜0.05），说明C组对FD的治疗有效，详见表1。

表1 电针对FD大鼠胃排空、小肠推进率和NMDA受体NR1、NR2的影响（±s）

表1 电针对FD大鼠胃排空、小肠推进率和NMDA受体NR1、NR2的影响（±s）

注：C组与A组、B组、D组比较，P＜0.05。

组别 胃排空率（%）小肠推进率（%）NR1含量（μmol／L）NR2含量（μmol／L）A组 89.00±7.59 49.00±2.59 0.14±0.0170.03±0.001 B组 48.20±10.17 48.20±1.17 0.22±0.028 0.02±0.015 C组 58.35±8.71 38.35±1.71 0.19±0.039 0.19±0.03 D组 56.39±17.47 46.39±1.47 0.13±0.0300.04±0.028

7 讨论

根据实验结果进一步明确电针具有改善FD胃肠动力障碍、降低内脏敏感性、良性调节胃肠功能紊乱等作用。也初步阐明电针治疗功能性消化不良，可能是通过海马体的NMDA受体这一通路对认知情感中枢与神经内分泌系统、肠神经系统和免疫系统进行良性平衡调节而实现的。

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