HPLC法测定血脂康胶囊中Monacolin类成分的含量

王丽娟 陈四喜 杨雁冰 孙福金 王俊峰 李谜 燕学波

HPLC法测定血脂康胶囊中Monacolin类成分的含量

王丽娟 陈四喜 杨雁冰 孙福金 王俊峰 李谜 燕学波

目的 建立HPLC测定血脂康胶囊中洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀3种成分的含量。方法 采用Ag ilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-0.05%磷酸(78∶22)为流动相，流速：1.0 mL/min，柱温：35℃，检测波长：238 nm。结果 洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀的线性范围分别为4.18～20.88 μg/mL(r＝0.999 8)、0.50～3.96 μg/mL(r＝0.999 9)和1.30～6.50 μg/mL(r＝0.999 9)；加样回收率(n＝9)分别为99.8%、99.5%、100.4%。结论 本方法简便、准确，重复性好，可用于血脂康胶囊中洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀3种成分的含量测定。

血脂康胶囊；HPLC；洛伐他汀；莫纳可林L；脱水洛伐他汀；含量测定

血脂康胶囊是以中药红曲为原料，具有活血化瘀、健脾消食等功效的产品。临床用于治疗高脂血症，动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病[1-2]，主要成分红曲在相同的剂量情况下与洛伐他汀相比具有更强的降脂综合疗效，并降低了长期服用他汀类降脂药物可能产生的毒副作用[3-4]。随着知名度的提高，市场上已出现一些假冒产品，这些产品严重危害人民的生命安全，而现有的质量标准仅以测定单一成分Monacolin K含量为指标，较难区别假冒产品。单一的含量测定指标无法全面反映并控制制剂质量，本实验利用HPLC法同时测定3种Monacolin类成分的质量检测方法，对控制质量、确保临床疗效具有重要意义。

1 仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪；AG285分析天平(Metter Toledo公司)；超声波清洗器(功率250 W，频率45 Hz)；离心机(上海常思工贸有限公司)。

血脂康胶囊(北大维信生物科技有限公司，批号：20081117、20090703、20090713)。洛伐他丁、莫纳可林L和脱水洛伐他汀对照品 (内酯型)均为自制；甲醇为色谱纯，磷酸、氢氧化钠为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压真空干燥24 h的对照品Monacolin K、Monacolin L和Dehydromonacolin K适量，加甲醇分别制成浓度为1.04 mg/mL、0.20 mg/mL、0.32 mg/mL的单一对照品储备液。精密移取上述单一对照品储备液各1.0 mL置同一25 mL量瓶中，精密加入0.1 moL/L氢氧化钠溶液1 mL，摇匀，静置10 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成Monacolin K、Monacolin L和Dehydromonacolin K浓度分别为41.76 μg/mL、7.93 μg/mL、12.96 μg/mL的混合溶液，作为混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 取血脂康胶囊3粒，置具塞锥形瓶中，精密加入75%乙醇25 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)20 min，放至室温，再称定重量，用75%乙醇补足减失的重量，摇匀，离心10 min(3 000转/min)，精密量取上清液5.0 mL，置50 mL量瓶中，精密加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液5.0 mL，摇匀，静置10 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 阴性对照溶液的制备 不加血脂康胶囊，按供试品溶液制备方法，制得缺血脂康的阴性对照溶液，色谱条件相同，结果阴性对照溶液在与对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰(图1)。

2.4 色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.05%磷酸(78∶22)；检测波长：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。

2.5 线性关系考察 分别精密量取“2.2.1”项下开环混合对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL量瓶中，精密加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液2.0 mL，摇匀，静置10 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列浓度(5个浓度)对照品溶液。精密吸取对照品溶液20 μL分别注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积Y为纵坐标，进样浓度(μg/mL)为横坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得到Monacolin K、Monacolin L、Dehydromonacolin K的线性回归方程分别为：Y＝55.37X＋3.12，r＝0.999 8；Y＝39.52X－1.31，r＝0.999 9；Y＝30.27X－0.54，r＝0.999 9。结果表明三者浓度分别在4.18～20.88、0.50～3.96、1.30～6.50 μg/mL范围内呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 在上述色谱条件下，取同一混合对照品溶液连续进样6次，测得洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀峰面积的RSD分别为0.96%、1.24%、1.07%，表明进样精密度良好。

2.7 重复性试验 精密称取同一批号血脂康胶囊(批号：20081117)6份，按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液，测得洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀3种成分的平均含量分别为0.28%、0.02%、0.05%；RSD分别为0.49%、0.91%、1.07%，表明本法重复性良好。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号：20081117)，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积。洛伐他汀、莫纳可林L和脱水洛伐他汀峰面积的RSD分别为0.93%、1.15%、1.28%，表明12 h内测定结果稳定。

2.9 回收率试验 精密称取已知含量的血脂康胶囊(批号：20081117)(约相当Monacolin K 2.93 mg)，共5份，分别精密加入对照品依法制成供试品溶液，按上述色谱法测定，计算回收率，结果(表1)。

2.10 样品测定 取3批血脂康胶囊(批号：20081117、20090703、20090713)各5份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪进行测定，记录峰面积，计算含量，结果(表2)，色谱图(图1)。

表1 回收率测定结果(n＝3)

表2 血脂康胶囊中monacolin类化合物含量测定

图1 对照品(A)、血脂康胶囊(B)、阴性对照溶液(C)色谱图

3 讨论

从测定结果可以看出，所检测3个批次的血脂康胶囊中3种Monacolin类成分的含量基本一致。血脂康胶囊原质量控制方法以单一成分洛伐他汀(Monacolin K)为指标，专属性不够强，无法全面反映并控制制剂质量[5]。本实验旨在研究建立同时测定3种Monacolin类成分的方法，从而为制定该产品的质量标准提供更可靠的依据，进一步提高制剂的质量标准。

若在制备工艺过程中温度过高或时间过长，会造成Monacolin K等成分分解。高效液相色谱法可以检测分解峰的存在，说明该法不仅可以测定产品含量，也可用于监测生产工艺。

[1]谢静，李东，王敏，等.HPLC法测定血脂康胶囊中洛伐他汀的含量[J].中国药房，2010(45)：4287-4289.

[2]陈路，方红城，张志杰，等.血脂康对高血压合并高血脂患者血管内皮功能的影响[J].中国医药导报，2011(24)：72.

[3]潘磊，张婷，李得加.血脂康与辛伐他汀治疗2型糖尿病血脂异常有效性和安全性的Meta分析[J].疑难病杂志，2013(8)：581-583.

[4]范宝川.阿托伐他汀与血脂康胶囊治疗原发性高脂血症的疗效比较[J].中国民族民间医药，2013(24)：69.

[5]刘小宝.高效液相色谱法测定血脂康软胶囊中洛伐他汀的含量[J].江西中医药，2007(7)：76.

Objective To develop an HPLC method for simultaneous determination of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin in Xuezhikang capsules.Methods An Agilent Zorbax SB-C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used with a mobile phase of methanol-0.05%phosphoric acid solution(78∶22)，with the flow rate of 1.0 mL/min，the column temperature of 35 ℃，and the detection wavelength of 238 nm.Results The linearity ranges of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin were over 4.18～20.88 μg/mL(r＝0.999 8)，0.50～3.96 μg/mL(r＝0.999 9)，and 1.30～6.50 μg/mL(r＝0.999 9).The average recoveries(n＝9)of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin were respectively 99.8%，99.5%and 100.4%.Conclusion The method is simple and accurate with high repeatability，which can be adopted for the simultaneous determination of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin in Xuezhikang capsules.

Xuezhikang capsules；HPLC；Lovastatin；Monacolin L；Dehydrated lovastatin；Content determination

2014-04-23)

1005-619X(2015)05-0479-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.05.015

475003 71320部队门诊部(王丽娟)；464000 解放军第154医院(陈四喜，燕学波)；116018 解放军海军训练舰支队(杨雁冰，孙福金)；464000 河南省信阳市第三人民医院(王俊)；450013 河南省军区直属医院(李谜)

陈四喜