α-硫辛酸对2型糖尿病患者尿TGF-β1排泄的影响

陈若平 徐 将 林海燕 鲍溪荷 荆春艳 叶山东

243000安徽省马鞍山市妇幼保健院内科(林海燕)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)最主要的慢性微血管并发症之一，其发病机制复杂，尚缺乏十分有效的防治措施。随着近些年氧化应激被证实参与了DN的发生发展，抗氧化剂防治DN作用日益受到重视［1］。α-硫辛酸(alpha-lipoic acid，ALA)属于维生素B类化合物，一些研究提示其对DM肾损害具有一定保护作用［2］。但其确切的机制尚不十分明确。本研究通过比较ALA口服治疗6个月前后2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，T2DM)患者尿液中尿清蛋白(albumin，Alb)及尿转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1，TGF-β1)排泄变化，初步探讨ALA对T2DM患者肾脏保护作用及部分机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 34例T2DM患者诊断符合1999年WHO公布的T2DM诊断标准，其中男性21例，女性13例，平均年龄(51.50±10.40)岁。所有患者均排除继发性DM、其他肾脏疾病、肝胆疾病、尿路感染、恶性肿瘤及酮症酸中毒等。入组患者近2周均未服用过血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、醛固酮拮抗剂及胰岛素增敏剂等。以我院体检中心健康体检者为健康对照组，共30例，男性16例，女性14例，平均年龄(51.36±9.69)岁，体检无 DM，无高血压病、感染、肿瘤及免疫性疾病，肝肾功能正常。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集和检测指标 询问和体检记录研究对象的性别、年龄、病程、身高、体质量、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)，计算体质量指数(BMI)。所有受试者均隔夜空腹8h以上，次晨静脉抽血测定空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、血肌酐(Cr)，留取新鲜中段晨尿4mL储存于－40℃ 冰箱中待测其测尿清蛋白(Alb)、尿TGF-β1和尿Cr;当日另经静脉抽血测定餐后2h血糖(PPG)。T2DM患者在糖尿病饮食的基础上，予以口服降糖药物或胰岛素控制血糖，每日监测空腹、餐后以及睡前血糖，根据血糖变化调整降糖药物剂量，将空腹及睡前FPG控制在4.4～9.0mmol/L，PPG＜10mmol/L，并每日口服硫辛酸600mg(烟台只楚药业有限公司)治疗6个月后再次采血、留尿标本复查 FPG、PPG、HbA1c、血肌酐、尿 Alb、尿 TGF-β1及尿Cr水平。

1.2.2 检测方法 尿TGF-β1检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂盒购自美国R＆D公司，按试剂盒说明操作;尿Alb测定采用放射免疫法;血糖检测用葡萄糖氧化酶法;HbA1c测定采用离子交换层析法;全自动生化分析仪测定血Cr和尿Cr。尿Alb排泄以其与尿Cr比值用Alb/Cr表示，尿 TGF-β1排泄以其与尿Cr比值用TGF-β1/Cr表示，以消除尿液稀释或浓缩等对结果的影响。

1.3 统计学方法 使用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，试验数据以±s表示，T2DM患者组和健康对照组人群之间数据分析应用独立样本t检验，ALA治疗前后组内差异分析采用配对t检验，数据的相关分析应用直线相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 在T2DM组(治疗前)和健康对照组中，性别、年龄、BMI、血压、血Cr差异均无统计学意义(P ＞0.05)，T2DM 组 FPG、PPG、HbA1c、尿 Alb/Cr和尿TGF-β1/Cr均明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。详见表1。

2.2 ALA 治疗前后血糖、尿 Alb/Cr和尿 TGF-β1/Cr比较 T2DM组加用ALA治疗6个月后，FPG、PPG和HbA1c较治疗前无显著变化(P＞0.05)，但尿Alb/Cr和尿TGF-β1/Cr均有降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。详见表2。

2.3 尿 TGF-β1/Cr变化与有关指标的相关性 尿TGF-β1/Cr变化与尿 Alb/Cr 变化(r=0.387，P ＜0.05)呈正相关，与 FPG 变化(r=0.210，P ＞ 0.05)、PPG 变化(r=0.333，P ＞0.05)、HbA1c变化(r=0.058，P ＞0.05)无相关性。

表1 健康对照组与2型DM组一般临床资料的比较(±s)

表1 健康对照组与2型DM组一般临床资料的比较(±s)

注:与健康对照组比较，*P＜0.05

项目 健康对照组(n=30)T2DM组(n=34)年龄(岁)51.36±9.6951.50±10.40BMI(kg/m2) 24.00±2.5624.21±2.83SBP(mmHg) 133.88±18.75134.70±23.40DBP(mmHg) 81.98±12.3081.53±13.43FPG(mmol/L) 5.02±0.576.92±1.14*PPG(mmol/L) 6.67±0.678.67±0.81*HbA1c(%) 5.65±0.416.92±0.82*血 Cr(μmol/L)71.93±16.4669.85±13.14

表2 健康对照组与DM组ALA治疗前后相关指标比较(±s)

表2 健康对照组与DM组ALA治疗前后相关指标比较(±s)

注:与健康对照组比较，*P＜0.05;与ALA治疗前比较，#P＜0.05

项目 健康对照(n=30) ALA治疗前(n=34) ALA治疗后(n=34)FPG(mmol/L) 5.02±0.576.92±1.14*6.97±1.50PPG(mmol/L) 6.67±0.678.67±0.81* 8.89±0.62HbA1c(%) 5.65±0.416.92±0.82* 6.90±0.78尿 Alb/Cr(mg·g－1·Cr－1) 8.97±3.9852.65±29.56* 26.77±21.46#TGF-β1/Cr(ng·g－1·Cr－1) 213.55±133.01949.41±517.185386.51±313.40#

3 讨论

尿Alb排泄增加是DN的临床表现和诊断指标，其本身也是肾脏病变进展和恶化的重要因素，降低尿Alb排泄对延缓DN进展有益［3］。本研究临床观察显示T2DM患者组与正常对照组人群相比，在消除性别、年龄、血压、BMI等差异前提下，证实尿Alb排泄水平明显高于健康对照组;T2DM患者口服ALA治疗6个月后尿Alb排泄水平较前明显降低，但血糖水平无明显变化，提示ALA在不影响血糖水平情况下可部分降低T2DM患者尿Alb排泄，对糖尿病肾脏损害有一定的保护作用。

活检和免疫荧光证实早期DN动物和患者肾小管、肾小球可检测到TGF-β1异常高表达，并进行性增高伴有 ECM 成分和肾重量增加［4］。TGF-β1可直接刺激肾小球系膜细胞增生并合成分泌纤连蛋白、层黏蛋白及Ⅳ型胶原成分等多种ECM成分;TGF-β1还可抑制肾脏细胞合成基质金属酶类、纤溶酶原激活因子等，导致肾脏基质金属蛋白酶类与其组织抑制剂系统(MMPs/TIMPs)失衡从而使ECM 降解减少［5，6］。

本研究显示，T2DM患者尿TGF-β1排泄增加与尿Alb排泄变化正相关，糖尿病患者在ALA治疗6个月后尿 TGF-β1排泄水平显著降低，FPG、P2hPG及HbA1c水平无显著变化，提示ALA降低尿TGF-β1排泄作用不依赖于血糖变化，该作用可能与其肾脏保护有关［7］。ALA对DM肾损害的保护作用确切机制不十分明确，可能是多方面的。高糖状态下的氧化应激被认为是DM并发症的共同损伤基础，DN患者肾脏局部氧化和抗氧化平衡失衡，表现为肾脏局部活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)异常升高。ALA可通过直接清除自由基和活性氧，螯合铜铁等金属离子抑制金属离子介导催化的自由基产生，减轻脂质过氧化等途径发挥抗氧化作用［8］。体外实验也证实ROS可上调细胞TGF-β1mRNA及蛋白高表达，而TGF-β1又可诱导细胞内ROS产生并通过继发介导的信号传导通路促进ECM积聚;且ROS及TGF-β1还启动并参与介导肾脏足细胞的凋亡，肾小球滤过膜完整性破坏，导致蛋白尿产生［9－11］。

总之，本研究初步结果显示ALA对2型糖尿病患者肾脏有一定的保护作用，该作用部分可能与其抑制体内或肾脏局部TGF-β1过表达有关，进一步尚需大样本的临床研究证实并探讨其确切的肾脏保护机制。

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