HPLC法同时测定复方三黄酊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量

★　董宁霞 边瑞民 成植温 宋德海 卢立明 （滨州医学院附属医院　山东滨州256603）

HPLC法同时测定复方三黄酊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量

★董宁霞 边瑞民 成植温 宋德海 卢立明 （滨州医学院附属医院山东滨州256603）

目的：建立复方三黄酊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量测定方法。方法 ：采用反相高效液相色谱法，选择Agilent ZORBAX SB-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，检测波长265nm。结果：盐酸小檗碱、黄芩素均得到较好分离，分别在0.092～2.3mg/mL，0.064～1.6 mg/mL范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.96%、98.18%。结论：该方法简便、准确，可用于复方三黄酊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量测定。

复方三黄酊；盐酸小檗碱；黄芩素；高效液相色谱

复方三黄酊由黄连、黄芩、黄柏、冰片等药材组成，具有抗菌消炎、止痛消肿、祛腐生肌的功效，用于治疗各期褥疮和慢性皮肤溃疡、软组织损伤、Ⅱ度以下烧烫伤等［1］，在我院应用20多年，临床疗效显著。本实验采用高效液相色谱法同时测定复方三黄酊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量，为工艺改进和质量控制提供科学的方法依据。

1　仪器与试药

Agilent 1260（DAD检测器）；KQ-300V台式超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

乙腈为色谱纯，磷酸、乙醇、十二烷基硫酸钠等均为分析纯；复方三黄酊由滨州医学院附属医院药学部制剂室提供 （批号20130422、20131007、20140307）；盐酸小檗碱对照品（批号110713-20121 2）、黄芩素对照品（批号111595-201306）均购于中国食品药品检定研究院。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A乙腈-B 0.1%磷酸水溶液（每100mL加十二烷基硫酸钠0.1g），梯度洗脱：0～10min 10%～45%A，10～15min 45%A，15～30min 45%～90%A；流速：1.0mL/min；检测波长：265nm；柱温：室温。

2.2对照品溶液制备精密称取盐酸小檗碱对照品9.20mg、黄芩素对照品6.41mg置于2mL量瓶中，用50%乙腈-水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备将样品摇匀后，精密量取10 mL，超声处理5min，放冷后转移至10 mL容量瓶内，加乙醇至刻度，摇匀。临用前用0.45μm微孔滤膜滤过。

2.4线性关系考察精密量取对照品溶液20，50，100，200，500μL分别置于5个1mL量瓶中，用50%的乙腈-水溶液稀释至刻度，摇匀，分别进样2μL，按上述色谱条件进行测定。以峰面积y对进样浓度x进行回归处理，结果见表1。

表1　盐酸小檗碱和黄芩素的线性回归方程

2.5精密度试验精密吸取对照品溶液，连续进样6次，每次进样2μ L。计算盐酸小檗碱含量的RSD为0.65%，黄芩素的RSD为1.24%，精密度良好。

2.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0，4，8，16，24h进样测定。结果：盐酸小檗碱含量的RSD 为1.09%，黄芩素的RSD为1.53%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.7重复性试验取同一批样品（批号20130422）共6份，分别精密称定，按照2.3项下的方法制备供试品溶液，分别进样2μL，测定峰面积，盐酸小檗碱、黄芩素的RSD为1.69%，1.72%，表明该测定方法的重复性良好。

2.8加样回收试验精密量取已知含量的样品6份，每份10mL，分别加入盐酸小檗碱和黄芩素对照品适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液并测定含量，计算回收率，结果见表2。

表2　加样回收试验结果（n=6）

2.9样品测定取样品3批，按”2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样2μL，记录色谱图（图1），计算盐酸小檗碱、黄芩素含量，结果见表3。

表3　样品含量测定结果（n=3）　mg·mL-1

3　讨论

图1　对照品（A）及样品（B）的HPLC图谱

复方三黄酊是以黄连、黄芩、黄柏为君药的中药复方制剂。小檗碱是黄连、黄柏的主要有效成分，具有抗菌、抗炎等作用［2］；黄芩素是黄芩抗菌的有效成分，并可通过多种环节影响花生四烯酸代谢，抑制组胺释放，减轻炎性反应［3］。二者的药理作用与复方三黄酊的功效一致，可作为该制剂工艺改进和质量控制中的指标成分。

采用HPLC法同时测定盐酸小檗碱和黄芩素含量时，小檗碱的有明显的拖尾现象，峰形对称性差，且较难与邻近化学成分分离，故在流动相0.1%磷酸水溶液中加入十二烷基硫酸钠作扫尾剂，显著改善了小檗碱的峰形。

供试品溶液未经过精制，成分复杂，等度洗脱的效果不理想，故改为梯度洗脱，可较好地分离各化学成分。该高效液相色谱法可同时测定复方三黄酊中盐酸小檗碱、黄芩素的含量，准确快速，具有实际应用意义。

［1］成新莲，王玉，王洪岩，等.复方三黄酊和地榆酊的制备与临床应用［J］.中华护理杂志，2001，36（9）：706-707.

［2］侯家玉.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，2007，3.

［3］高燕，顾振纶，蒋小岗，等.黄芩素药理学研究新进展［J］.时珍国医国药，2010，21（7）：1765-1767

R284.1

A

*第一作者：董宁霞（1983-），女，硕士，主管药师。研究方向：医院药学。E-mail：dongnx@163.com。

（2014－11－07）编辑：曾文雪