凉血活血软胶囊水提醇沉工艺研究*

★　吴雪　张伟　　张云丽*（.山东中医药大学药学院　济南50355；.青岛市海慈医疗集团　山东青岛66034）

凉血活血软胶囊水提醇沉工艺研究*

★吴雪1张伟2张云丽2*（1.山东中医药大学药学院济南250355；2.青岛市海慈医疗集团山东青岛266034）

目的：优选凉血活血软胶囊中白茅根、赤芍、当归、独活、羌活五味药材的水提醇沉最佳提取工艺。方法：采用正交试验设计，以芍药苷提取率与干膏率为评价指标，考察煎煮时间（A）、煎煮次数（B）、加水量（C）三个因素对水提工艺的影响，以芍药苷保留率为评价指标，考察药液含醇量（A）、静置时间（B）、药液相对密度（C）三个因素对醇沉工艺的影响。结果：水提工艺各因素影响大小依次为煎煮次数＞煎煮时间＞加水量，其中煎煮次数、煎煮时间对提取有显著影响（P＜0.05），其他因素影响不显著（P＞0.05）；醇沉工艺各因素影响大小依次为药液相对密度＞静置时间＞药液含醇量，其中药液相对密度对提取有显著影响（P＜0.05），其他因素影响不显著（P＞0.05）；结论：最佳水提工艺条件为8倍量的水加热回流提取3次，每次1h；最佳醇沉工艺条件为加入乙醇使药液含醇量达55%，药液相对密度1.15，静置时间16h。

凉血活血软胶囊；芍药苷；干膏率；正交试验法

1　材料

1.1仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪（自动进样器，四元低压梯度泵，柱温箱，紫外检测器；美国Agilent公司）；BS224S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

1.2原料白茅根、赤芍、当归、羌活和独活取自本院中药饮片库，经我院中药制剂三级实验室张伟主任鉴定，白茅根为禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.major（Nees）C.E.Hubb.的干燥根茎；赤芍为毛莨科植物芍药Paeonia lacti flora Pall.的干燥根。当归为伞形科植物当归Angelica sinensis（O－ liv1.）Diels的干燥根；羌活为伞形科植物羌活Notopterygium incisumTing ex H.T.Chang的干燥根茎及根、独活为伞形科植物重齿毛当归Angelica pubescens Maxim.f.biserrta Shan at Yuan；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110736-200320）。

1.3试剂乙醇（分析纯，烟台三和化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）；甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

2　方法与结果

2.1水提工艺优选

2.1.1因素水平的确定根据预实验结果，确定煎煮时间（A）、煎煮次数（B）、加水量（C）为考察因素，每个因素选择3个水平确定正交设计方案，见表1。

表1　因素水平表

表2　水提L9（34）正交实验方案及结果

2.1.2水提液的制备按处方中各药材的比例，称取赤芍、白茅根各3g，当归1.5g，独活、羌活各0.9g，混合均匀，共取9份，按表2分别进行加热回流提取，提取液滤过，合并，用水分别定容至250μL，并编号得水提液1～9，重复3次。

2.1.3芍药苷含量的测定

2.1.3.1对照品溶液的配制精密称取芍药苷对照品0.465mg置于10μL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，振摇使溶解，得浓度为46.5μg/μL的对照品溶液，将该溶 液 稀 释 得 浓 度 分 别 为 34.875，23.25，13.95，9.30，4.65μg/μL的对照品溶液，滤过。

2.1.3.2供试品溶液的制备从2.1.2中的水提液中精密移取1μL蒸干，用甲醇溶解定容至5μL，滤过。

2.1.3.3色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-水（16：84）；流速：1μL/min；柱温：25℃；检测波长：230nm

2.1.3.4线性关系的考察将对照品溶液按上述色谱条件进样，进样量10μL，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得Y=22.31X+23.003，r= 0.9991。结果表明芍药苷在4.65～46.5μg/μL范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.1.3.5供试品液含量测定按供试品制备方法对2. 1.2中各个水提液进行处理得供试品溶液，按上述色谱条件进样，进样量10μL，测得芍药苷峰面积，计算芍药苷提取率。

2.1.4干膏率的测定精密吸取2.1.2中制得的水提液50μL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，以浸出物与原生药量之比作为干膏收率。

2.1.5正交试验结果见表2。综合权重按芍药苷提取率60%、干膏率40%折算，进行分析，结果见表3。

各因素影响大小依次为B＞A＞C，其中因素B、A对提取有显著影响（P＜0.05），因素C影响不显著（P＞0.05）。故从芍药苷提取率高、节约溶剂、节约时间等方面考虑，确定赤芍、白茅根、当归、羌活、独活的最佳提取工艺条件为A1B3C1，即8倍量水提取3次，每次1h。

表3　方差分析表

2.2醇沉工艺条件的优选

2.2.1因素水平的确定根据预实验结果，确定药液含醇量（A）、静置时间（B）、药液相对密度（C）为实验因素，每个因素选择3个水平确定正交设计方案，见表4。

表4　因素水平表

2.2.2醇沉液的制备按处方中各药材的比例，分别称取赤芍、白茅根各60g，当归30g，独活、羌活各18g，混合均匀，按水提最佳工艺提取，水提液浓缩至2500μL，取1μL按2.1.3.2项下方法处理，得水提液供试品，其余浓缩至相对密度为1.20，等分为3份，分别加水调节相对密度为1.10、1.15和1.20，再各自等分为3等份，编号为1～9，分别置于250μL锥形瓶中。按表5在1～9号药液中加入相应量的95%乙醇，静置相应时间，分别抽滤，浓缩或稀释至200μL，取1μL 按2.1.3.2项下方法处理，得醇沉液供试品1～9。实验重复3次。

2.2.3芍药苷保留率的测定将2.2.2中的水提液供试品、醇沉液供试品按色谱条件进样，进样量10μL，测得芍药苷峰面积，计算芍药苷含量。以水提液中芍药苷含量与醇沉液中芍药苷含量之比作为芍药苷的保留率。

表5　醇沉L9（34）正交实验方案及结果

表6　方差分析表

2.2.4正交试验结果结果及分析见表2-3。结果显示：各因素影响大小依次为C＞B＞A，其中因素C对提取有显著影响（P＜0.05），因素A、B影响不显著（P＞0.05）。故从芍药苷保留率高、节约溶剂、节约时间等方面考虑，确定赤芍、白茅根、当归、独活、羌活的醇沉最佳提取工艺条件为A1B2C2，即药液相对密度1.15，使药液含醇量达55%，静置16h。

2.3水提醇沉最佳工艺验证按优选工艺进行了3次验证实验，即取2倍处方量的药材共3批进行试验，水提工艺中芍药苷提取率分别为1.512%，1.591%，1.564%；干膏率分别为47.09%，45.96%，46.53%；醇沉工艺芍药苷保留率分别为97.26%，98.73%，99.01%。均高于正交试验的数据，表明该工艺是可行的。

3　讨论

本实验以赤芍、白茅根、当归、独活、羌活五味药材为研究对象，在水提工艺中以芍药苷提取率和干膏率为指标进行综合评分，以考察提取是否完全，鉴于芍药苷提取率比干膏率能更好地反映药物提取情况，故在设计权重系数时，芍药苷提取率权重系数较大，二者的权重系数设计为6：4，这样相对合理些；经查阅文献及预实验，确定出水提工艺的主要影响因素煎煮时间、煎煮次数、加水量，并采用L9（34）正交试验表，进行了多次试验，最后综合结果分析，得到最佳水提工艺，即8倍量水加热回流提取3次，每次1h。

在醇沉工艺中以芍药苷保留率为指标进行评分，以考察除杂工艺对有效成分的影响，本方各味中药含多糖、淀粉量较高，干膏率也高，装胶囊量偏大，故必须进行除杂工艺研究；在醇沉工艺研究中，药液的相对密度实际操作不易控制，先通过预实验得出药液相对密度为1.20时，药材量与药液的体积比为1.2，相对密度为1.15时，体积比为1.05，相对密度为1.1时，体积比为0.9，利用药材量与药液的体积比控制药液的相对密度，方便实用；经查阅文献及预实验，确定出醇沉工艺的主要影响因素药液含醇量、静置时间、药液相对密度，并采用L9（34）正交试验表，进行了多次试验，最后综合结果分析，得到最佳醇沉工艺，即药液相对密度1.15，使药液含醇量达55%，静置16h。

正交试验优选的水提醇沉工艺条件经验证，表明是可行的，有效的保证了凉血活血软胶囊内在质量和临床疗效的稳定性。

［1］谢晓梅，余长柱，徐衡，等.赤芍饮片质量标准研究：芍药苷的含量测定［J］.中国中药杂志，2004，29（8）：759-762.

R283.6

A凉血活血软胶囊是由我院临床使用的凉血活血汤改变剂型而研制的新药，有凉血、活血、清热解毒之功效，用于血热型银屑病。白茅根、赤芍、当归、羌活和独活五味药是凉血活血软胶囊主要组成药物，为保证凉血活血软胶囊质量和临床疗效，更好地应用于临床且便于储运及服用，根据药材成分、药理作用、中药用药习惯和临床疗效，本文将采用L9（34）正交试验设计，以芍药苷提取率、干膏率、芍药苷保留率为评价指标，对凉血活血软胶囊的水提醇沉工艺进行考察，优选出最佳工艺条件。

青岛市2011年度中医科研计划（2011-zyz002）。

（2014－08－28）编辑：曾文雪