HPLC法检测市售红花饮片染色研究

赵 宇，孙睿婷，金大伟，焦玉龙

(哈尔滨市食品药品检验检测中心，哈尔滨150525)

红花原名红蓝花，又名草红花，为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，气味辛、温，无毒，多产于新疆、河南、四川和云南等地，多为栽培品.具有活血祛痛，通经活络等功效.由于其特有的功效，近年来需求量大，价格上涨，导致不法分子将其掺杂后染色进行增重进而获取利润[1－4].本文采用HPLC法对红花中的酸性红73进行定性鉴定.

1 实验材料

1.1 样品

取市售红花饮片20批.

1.2 主要设备

电子天平(设备厂商:梅特勒－托利多仪器上海有限公司)，超声清洗仪(设备厂商:上海科导超声仪器有限公司)、液相色谱仪(设备厂商:沃特世上海科技有限公司，型号:Waters e2695－2998).

1.3 试剂试药

酸性红73对照品(中国药品生物制品检定所，批号111733－200701);乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号:20120530);水(纯化水);乙腈(色谱纯);乙酸铵(北京益利精细化学品有限公司，批号:20070119).

2 方法和结果

2.1 色谱条件设定

色谱柱为Agilent ZORBAX Extend C18(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈(0.05 mol/L)醋酸铵溶液(30∶70)，二极管阵列检测器，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量为 10 μL.

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照溶液制备

精密称定酸性红73对照品，加70%乙醇制成每1 mL含酸性红 73为 100 μg的对照品溶液[5－6].

2.2.2 样品溶液制备

精密称取红花样品2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，称定质量，超声处理20 min，放冷，用70%乙醇补足减失的质量，混匀，滤过.

2.3 专属性的实验

分别取对照品溶液及样品溶液各10 μL分别进样，经二极管阵列检测器检测，对照溶液与样品溶液相应保留时间色谱峰紫外吸收光谱图一致.见图1、2.

图1 紫外扫描图(左侧为酸性红73，右侧为样品)

图2 色谱图(左侧为酸性红73，右侧为样品)

2.4 线性关系的考察

精密称取酸性红73对照品25.21 mg，装入100 mL量瓶中，量取对照品(70%乙醇)溶解、稀释、摇动均匀;分 5 次精密量取 1、3、5、10、20 mL，分别置于25 mL的量瓶中，然后加水稀释至刻度后，摇动均匀，再精密量取上述稀释后的量瓶中溶液各10 μL，依次注入液相色谱仪，分色谱条件标记后测定，将峰面积(A)和质量浓度(C)作线性回归方程，线性方程式和参数如下:

方程式为:A=29.674 2C －2.502 8;设定:r=0.999 9;线性范围设定为:10.1 ～201.7 μg/mL.

2.5 回收试验

分别称取已知含量的样品6份，每份2 g，分别精密加入酸性红73 对照溶液(100.9 μg/mL)1 mL，按照2.2项下的制备方法配制溶液，色谱条件和上述参数一致，测算回收率，测算结果(n=9)为98.7%，RSD为0.7%.测算结果表明，回收率较好.

2.6 溶液稳定性实验

取批号为20130407的样品溶液，置于室温下，每 0、4、12、16、24 h，取样依照上述方法测定，结果表明酸性红73峰面积值变化微弱，RSD值为0.6%.

2.7 重复性试验

精确称取(批号为20130407)细粉6份，依次如上法测定含量，RSD为0.8%.

2.8 定量限检测

将酸性红73对照品溶液加溶剂多次稀释使得峰高大约是基线噪音的10倍(S/N≈10)，实验结果表明定量限为 0.110 μg/mL.

3 讨论

酸性红73是一种工业染料，常用于毛丝织物、纸张和皮革的染色，以及塑料、木材、香料等的着色，是食品禁用色素，有致癌致畸作用.长时间食用染有酸性红73的食物会对病人生命产生威胁.在所检测的20批市售红花药材中有7批检出酸性红73，对安全食用红花饮片产生一定影响.

酸性红73易溶于乙醇和水，对红花样品分别用水、乙醇、70%乙醇、45%乙醇进行提取，通过实验比较表明，采用70%的乙醇提取液杂质少，高效液相分离效果好，峰纯度高，故选用70%乙醇作为提取溶剂.

分别采用Waters symmetry C18(4.6×250 mm，5 μm)、welch ultimate C18(250 × 4.6 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX Extend C18(4.6 ×250 mm，5 μm)三根不同品牌的C18柱进行分离，结果都取得了很好的分离效果;对乙酸铵的比例进行调整后，结果同样较好.因此，该HPLC法检测市售红花饮片染色方法具有较好的耐用性.

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