虎眼万年青提取物降血糖作用的实验研究

曹海玲，徐 暘，闫 静

(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨150040)

虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)，又名珍珠草、伯利恒之星，是虎眼万年青属单子叶植物，原产于非洲南部，其花为头状花序，是很有名的观赏植物，种植地广泛.成分研究表明，虎眼万年青含有多糖、皂苷及生物碱等成分，可全草入药[1－2].虎眼万年青多糖具有对机体的免疫增强作用和对免疫应答的调节作用[3－4].虎眼万年青皂苷具有抗肿瘤活性[5]和抗氧化作用[6].民间多有使用虎眼万年青用于抗炎消毒，治疗肝病、肝癌、胆囊炎症等.近年来有虎眼万年青抗炎活性的药理研究报道[7].

目前，世界范围内，糖尿病的发病率快速上升，已成为人类健康的重大威胁，糖尿病防治已成为医学研究的热点.从天然药物尤其是植物中寻找降血糖的有效成分是一条重要的途径.多糖有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用.据 Frang[8－9]等报道，已有近百种植物多糖被分离提取鉴定出来，其来源广泛且没有细胞毒性，应用于生物体毒副作用小.研究表明虎眼万年青有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等作用，但其是否具有降血糖作用还尚未见文献报道.本文对虎眼万年青多糖的降血糖作用进行了研究，实验结果可为虎眼万年青药材的进一步开发和应用提供依据.

1 实验材料

1.1 试验动物

选用健康的昆明种小鼠72只(由青岛派特福白鼠养殖专业合作社提供)，雌雄各半，体重(25±2)g清洁级，随机将雌雄小鼠各分为6组，每组12只.

1.2 药材

虎眼万年青药材购于吉林长白研究所，经黑龙江中医药大学李延冰教授鉴定.

1.3 试剂

盐酸二甲双胍(哈尔滨同一堂药业有限公司);四氧嘧啶(原装Sigma).甘油三酯试剂盒(长春汇力生物技术有限公司);总胆固醇试剂盒(长春汇力生物技术有限公司);注射用生理盐水(哈尔滨三联药业有限公司);乙醇.

1.4 实验仪器

旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司);烘箱(DGX－9143B－1);电热套;圆底烧瓶;冷凝管;离心机(北京医用离心机厂);721型可见分光光度计;水浴锅;三诺稳豪型血糖仪及配套试纸.

2 实验方法

2.1 药物提取

取已粉碎的虎眼万年青全草200 g放入圆底烧瓶，加配好的70%乙醇2 000 mL，浸泡1 h，60℃下加热回流提取2 h.过滤.虎眼万年青残渣继续加入70%乙醇1 600 mL，60℃下回流提取2次，每次2 h.过滤，合并三次所得滤液.经旋转蒸发仪，温度50℃，回收乙醇.回提后剩余液体约800 mL，水浴蒸发，并先后加入2次100 mL双蒸水，使酒精充分蒸发，得浸膏.再将浸膏放于40℃烘箱中低温干燥得粉末状虎眼万年青70%乙醇提取物.

2.2 糖尿病模型复制

小鼠常规适应性饲养1周，(正常进食、饮水，特定时间内除外)称重，小鼠禁食(不禁水)约12 h，腹腔注射新鲜配置的四氧嘧啶溶液200 mg/kg.72 h后再次禁食(不禁水)12 h后，尾静脉取血，血糖仪测空腹血糖值，大于11.1 mmol/L为糖尿病模型小鼠.

2.3 分组及给药

72只昆明种小鼠，每组12只，雌雄各6只，共分6组，即空白对照组，模型对照组，阳性药物组，70%乙醇提取物高、中、低剂量组.按动物体表面积比率换算等效剂量灌胃给药;每日1次，连续给药2周.空白对照组为健康小鼠按0.1 mL/g给与生理盐水灌胃;模型对照组为高血糖小鼠按0.1 mL/g给与生理盐水灌胃;阳性药物组(盐酸二甲双胍)，阳性药物碾碎成粉末状溶于生理盐水中，制成12.8 mg/mL质量浓度的溶液，按0.1 mL/g给与灌胃;70%乙醇提取物干粉分别以2、1、0.5 g/kg质量浓度制成生理盐水溶液，按0.1 mL/g给与灌胃.

2.4 检测指标

2.4.1 血糖质量浓度

分别在灌胃给药第7天及第14天尾静脉取血，用血糖试纸及血糖仪测定其血糖质量浓度的变化.

2.4.2 总胆固醇质量浓度

于灌胃给药第14天眼球取血，严格按照试剂盒操作说明测定血浆总胆固醇质量浓度.

2.4.3 甘油三酯质量浓度

于灌胃给药第14天眼球取血，严格按照试剂盒操作说明测定血浆甘油三酯质量浓度.

3 实验结果

虎眼万年青全草70%乙醇提取物，不同剂量对糖尿病昆明种小鼠血糖质量浓度、血浆总胆固醇质量浓度以及血浆甘油三酯质量浓度的影响.见表1.

表1 虎眼万年青全草提取物对糖尿病模型小鼠血糖值及其他指标的影响

对小鼠空腹血糖的影响:经口灌胃14 d后，虎眼万年青70%乙醇提取物高中剂量组与对照组相比较有显著性差异(P＜0.05)，阳性药组与对照组相比较有显著性差异(P＜0.05)，虎眼万年青70%乙醇提取物低剂量组与对照组相比较无显著性差异(P＞0.05).虎眼万年青70%乙醇提取物高中剂量组相比较无显著性差异(P＞0.05)，虎眼万年青70%乙醇提取物高中剂量组与阳性药组相比较无显著性差异(P＞0.05).表明虎眼万年青70%乙醇提取物对四氧嘧啶诱导的高血糖昆明种小鼠有一定的辅助降血糖作用且有剂量依赖性.

对小鼠总胆固醇、甘油三酯的影响:虎眼万年青70%乙醇提取物高中剂量组、阳性药物组与对照组相比较无显著性差异(P＞0.05)，虎眼万年青70%乙醇提取物低剂量组与对照组比较差异性不大(0.10＞P＞0.05).表明虎眼万年青70%乙醇提取物对四氧嘧啶诱导的高血糖昆明种小鼠的胆固醇、甘油三酯水平有一定的控制作用，且呈剂量依赖性.

4 讨论

随着社会的发展，生活水平的提高，心脑血管病的发病率也呈逐年上升的趋势，且死亡率位于各种疾病之首，所以研究开发治疗和预防心脑血管疾病的保健品就显得非常重要[10];糖尿病是一种由于遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，血糖一旦控制不好会引发多种并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈[11].很多种皂苷类以及多糖类含量高的中草药或植物也相继被研究发现具有治疗或辅助治疗糖尿病的功效.

本文对多糖及皂苷含量较高的虎眼万年青全草进行分析研究，以期其对糖尿病有治疗或辅助的治疗作用.目前制作糖尿病动物模型的方法主要有三类[12]，一类是自发性糖尿病动物模型;第二类是转基因动物模型;因经费和试验条件等客观条件限制，这两类均应用不广泛.第三类是通过手术、化学药物损伤、病毒感染等方法造模.目前常用化学药物有STZ、四氧嘧啶.本实验以腹腔注射四氧嘧啶方法造模.

对昆明种小鼠造模及给药治疗的实验结果表明，中、高剂量的虎眼万年青全草70%乙醇提取物能够使糖尿病小鼠的血糖水平降低并趋于稳定，且对糖尿病小鼠的三高症状有所缓解.而低剂量组与糖尿病模型组相比较则无明显差异，可能剂量太低效果不明显.此亦能说明虎眼万年青提取物对于糖尿病的治疗作用存在剂量差异，为以后的深入研究提供参考与佐证.

[1]孙志伟，邹 翔，曲中原，等.虎眼万年青(Ornithogalum Caudatum)化学成分和药理作用研究进展[J].黑龙江医药，2013，26(3):378－380.

[2]徐暾海，徐雅娟，刘大有，等.虎眼万年青的化学成分[J].药学学报，2000，35(1):32－36.

[3]SHI L，LIU Z Q，LIU S Y.Chemical characteristic of polysaccharides isolated from Ornithogalum caudatum Ait[J].Chem Res Chin Uni，2003，19(3):286.

[4]石 磊，王 勇，石 勇，等.虎眼万年青多糖的原子力显微镜观察[J].吉林大学学报:医学版，2003，29(1):32.

[5]曹秀萍.虎眼万年青中抗肿瘤活性成分的研究[D].北京:北京协和医学院中国药学科学院，2010.

[6]何滟澦.虎眼万年青提取物抗氧化功能的研究[D].哈尔滨:黑龙江中医药大学，2012.

[7]何滟澦，陈 健，葛京城，等.虎眼万年青提取物体外清除自由基活性的研究[J].安徽农业科学，2011，39(31):19103－19104，19109.

[8]FRAN Z G.Polysaccharides in phainmacology[J].Planta Med，1998，55(6):493－497.

[9]刘洪玲，姜惠卿，侯玉梅，等.黄芪多糖治疗糖尿病的药理作用探要[J].中国药师，2004，7(8):585－587.

[10]黄建东.芦丁铬的合成及其辅助降血糖功能研究[D].北京:北京林业大学，2011.

[11]李芳芳.芦根乙醇提取物对糖尿病小鼠降血糖作用的实验研究[D].吉林:延边大学，2012.

[12]孙子林，葛祖恺.糖尿病动物模型及其进展[J].中国糖尿病杂志，1997，7(4):227.