贵州省汉族原发性高血压患者醛固酮合成酶基因(-344T/C)多态性的研究

2015-08-21 06:04刁晓艳
中日友好医院学报 2015年6期
关键词:获得性醛固酮等位基因

刁晓艳 ,何 燕 ,周 黔

(1.贵阳医学院附属医院 心内科;2.贵阳医学院分子生物学教研室;3.贵阳医学院附属医院临床检验室,贵阳 550004)

遗传和环境因素的交互作用是原发性高血压(essential hypertension,EH) 的主要发病机制,高血压的基因研究虽报道很多,但仍无定论明确的高血压相关的基因。高血压的发病与肾素-血管紧张素-醛固酮系统有关,作为候选基因之一的醛固酮合成酶(CYP11B2)基因是醛固酮合成的标志基因。国内外对CYP11B2基因-344T/C多态性与原发性高血压的关系结论不一[1~5]。本研究探讨了贵州汉族正常人群与高血压人群CYP11B2基因(-344T/C)的特点。

1 对象与方法

1.1 研究对象

EH组:2011年5月~2012年12月在我科门诊就诊的高血压的患者,血压诊断标准按2010年中国高血压指南的标准;排除继发性高血压、瓣膜疾病、心肌病及肝、肾衰竭等,共182例,其中男92 例、女 90例;平均年龄 57.58±10.94 岁。(2)对照组:选择我科门诊的健康体检者182例,无高血压家族史,其中男87例、女95例;平均年龄56.48±11.57岁。2组在性别与年龄上差异无统计学意义。2组均为贵州籍汉族人,且互相均无血缘关系。

1.2 方法

(1)血压测定:用标准水银柱血压计测量安静休息坐位血压;(2)生化指标测定:清晨空腹抽取静脉血检测血脂(包括甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、载脂蛋白A1、载脂蛋白B100、脂蛋白 a)、血糖和尿酸;(3)采用国际标准化方法测量身高、体重。体重指数(BMI)=体重/身高2(kg/m2);(4)基因的检测。

①按经典常规法 (酚-氯仿法)抽提白细胞DNA,溶于TE;紫外吸收法定量后标化为80~100ng/μl,-20℃备用。 ②PCR 扩增上游引物序列为 5′-CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC-3′,下游引物序列为5′-CCT CCA CCC TGT TCA GCC C-3′。 25μl PCR 反应体系组成为:10×PCR 缓冲液 2.5μl,25mmol/L MgCl21.8μl,4×dNTP (每种2.5mmol/L)2.0μl,10mol/L 引 物 各 0.6μl,DNA 聚合酶1.5U,模板DNA 80~100ng。PCR循环条件:94℃变性 40s,60℃退火 40s,72℃延伸 40s, 循环30次。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离检测,有目的条带者进行限制性酶切分析。10μl酶切反应体系组成为:PCR 产物 5.0μl,10×缓冲液1.0μl,HaeⅢ 5U, 加水补足体积后 37℃温浴 4h。酶切产物用3%琼脂糖凝胶电泳进行分离检测,判断相应基因型。

1.3 统计学方法

统计分析应用SPSS17.0软件,采用t检验和单因素方差分析。各组的基因型和等位基因频率用直接计数法,Hardy-Weinberg平衡吻合度检验基因型分布用χ2检验的方法,组间基因型和等位基因频率的比较采用χ2检验或确切概率法检验。用逐步Logistic回归分析不同基因型获得性因素的差别。

2 结果

2.1 EH组及对照组CYP11B2(-344T/C)多态性分析

图 1 CYP11B2(-344T/C)多态性的PCR产物和基因型电泳图

研究对象DNA经PCR扩增为538bp片段。如果CYP11B2基因无-344T→C点突变,该处将不存在 HaeⅢ酶切位点,故-344T基因型酶切产物为274bp+138bp+126bp 3个片段 (后两者在琼脂糖凝胶电泳图上合为一条条带,下同);若有CYP11B2-344T→C点突变,则该处有HaeⅢ酶切位点,故-344C基因型酶切产物为203bp+138bp+126bp+71bp 4个片段(后者太小不易观察)。因此电泳后TT基因型电泳条带为274bp,CC基因型电泳条带为203bp,TC基因型电泳条带为274+203bp,各型均同时有138/126bp的小带出现(图1)。随机抽取约10%的样本进行重复测量,一致率为100%。

2.2 EH组及对照组CYP11B2基因(-344T/C)位点基因型分布的H-W平衡检测

实验结果显示,EH组和对照组人群CYP11B2基因(-344)位点均检测出有 TT、TC 和CC等3种基因型,2组的基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 EH组与对照组等位基因频率和基因型的分布特点

表1示,2组间基因型分布有统计学差异(P<0.05),2组间等位基因频率分布有统计学差异(P<0.05)。而各组中不同性别无统计学意义 (P>0.05)。

2.4 高血压患者不同基因型获得性因素的比较

把体重、尿酸、血糖、胆固醇、甘油三酯及BMI等指标放在一起,用Logistic回归分析结果显示CT杂合子和CC纯合突变基因型与野生TT基因型比较,差异均无意义(P>0.05)。

表1 醛固酮合成酶基因CYP11B2(-344T/C)基因型频率与等位基因频率分布 n(%)

表2 高血压组与对照组的获得性因素比较

2.5 原发性高血压组与对照组获得性因素的比较

表2示,高血压组的尿酸、血糖、甘油三酯、体重指数明显高于对照组,且两者之间的差异主要由女性引起(P<0.05)。

3 讨论

醛固酮合成酶(CYP11B2)基因为高血压的候选基因之一,该基因的-344C/T基因多态性与高血压的关系尚无定论,与获得性因素之间的关系目前报道较少。

本研究对贵州汉族原发性高血压人群进行了研究,结果显示,高血压组和对照组之间CYP11B2基因-344 T/C基因型构成比和等位基因频率的差异均有统计学意义 (P<0.05),这提示,CYP11B2基因(-344 T/C)基因多态性可能和贵州原发性高血压的发病有密切相关性,这与日本和国外部分研究一致[5],与国内部分相关研究一致[6~8]。

众所周知,获得性因素在高血压的发病中起着重要的作用,由于生理的特殊性,女性高血压与男性有不同的特点。生理剂量的雌激素具有扩血管作用、维持正常血脂及胰岛素敏感作用,还具有抗氧化的作用,而氧化应激和血脂紊乱及肥胖有明显的关系。女性高血压发病在绝经后明显高于男性,与女性内分泌变化相关,部分妇女雌、孕激素调节不稳定可导致肾素分泌调控机制不正常而导致高血压[9]。更年期女性患者体内较低的雌激素水平、较高的孕激素水平以及性激素比例失衡,在高血压的发生发展过程中起着促进作用[10]。本研究提示,贵州汉族高血压患者CYP11B2基因(-344 T/C)多态性没有显著影响获得性因素的变化,而女性高血压患者明显受获得性因素影响。这可能提示我们在日常生活中,特别是绝经后女性,在失去雌激素的保护后,控制体重,低嘌呤、低脂、低糖饮食对预防高血压的发生具有重要的意义。

通过本研究提供了贵州汉族CYP11B2基因-344 T/C多态性与原发性高血压发病的相关依据,同时也表明了获得性因素对高血压的影响,更进一步显示了高血压发病的多重机制[11]

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