高效液相色谱法测定水产品中的甲醛

刘成文

摘要 通过在提取甲醛的同时进行衍生反应，采用液相色谱法测定水产品中的甲醛含量，确定了有关测定的参数。结果表明：该方法具有前处理操作简便、结果准确、精密度高等优点，能有效提高检测效率，适合于批量测定水产品中的甲醛。

关键词 甲醛；水产品；液相色谱；测定

中图分类号 TS254.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）12-0274-02

Determination of Formaldehyde in Aquatic Products by HPLC

LIU Cheng-wen

（Longgang District Quality Supervision and Inspection Center of Aquatic Products of Shenzhen City，Shenzhen Guangdong 518172）

Abstract A high performance liquid chromatographic（HPLC）method for determination of formaldehyde in aquatic products by extract and derivatization at the same time was developed.Results showed that this method was simple and had good linear relationship and good repetition.This method was available to determine the formaldehyde in aquatic products with satisfactory results.

Key words formaldehyde；aquatic products；HPLC；determination

甲醛，又名蚁醛、福尔马林，是一种具有强还原性的原生质毒素，有较高的毒性，可破坏生物细胞的原生质，进入人体器官后，对人的神经系统、肺、肝脏均有损害[1]，可致癌、致畸[2]，是食品中的禁用物质[3-4]。因甲醛具有定型、防腐作用，一些不法商贩为了使水产品和水发食品保持较好的感官和延长保质期，获得较高的利润，在水产品中人为添加甲醛，而水产品中的甲醛很难通过清洗、烹调消除，严重危害消费者的身心健康。

目前，常用的水产品中甲醛检测方法主要有分光光度法[5-7]、气相色谱法[8]、高效液相色谱法等[9-11]。分光光度法由于前处理采用蒸馏法，操作不易控制，回收率较低，且不适合批量检测；与之相比，色谱法具有准确度高、抗干扰能力强等特点。已有文献中，液相色谱法前处理较复杂，需先提取再衍生化、净化，本文通过对提取条件和衍生条件等进行研究，在提取甲醛的同时进行衍生反应，有效地提高了检测效率，建立了适合用于水产品中甲醛测定的高效液相色谱法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试剂。甲醛标准物质100 mg/L；乙腈；乙酸铵；冰乙酸；2，4-二硝基苯肼（纯度≥99%）。

1.1.2 仪器与设备。高效液相色谱仪（配有紫外检测器）；水浴摇床；高速冷冻离心机；电子天平。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件。色谱柱：waters Sunfire C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（70∶30，V/V）；流速、检测波长、柱温、进样量分别为1.0 mL/min、365 nm、40 ℃、20 μL。

1.2.2 样品处理。①溶液配制。2，4-二硝基苯肼乙腈溶液（0.6 g/L）：称取2，4-二硝基苯肼300 mg，用乙腈溶解定容至500 mL。缓冲溶液：称取4.82 g乙酸铵，以适量水溶解，冰乙酸调pH值至5左右，定容至500 mL。衍生液：将2，4-二硝基苯肼乙腈溶液与缓冲液按1∶1（V/V）混合均匀。②样品提取。准确称取经匀浆的样品2.0 g，置于50 mL具塞塑料离心管中，准确加入20.0 mL衍生液，漩涡混合均匀后置于50 ℃恒温水浴摇床中，200 r/min振摇，每隔10 min取出混匀1次，振摇1 h后取出冷却至室温。③样品净化。将提取液以10 000 r/min离心5 min，取适量上清液过0.45 μm微孔滤膜。④标准曲线溶液的配制。取不同体积的100 mg/L甲醛标准溶液，置于10 mL容量瓶中，加衍生液定容，混匀，置于50 ℃恒温水浴摇床中，200 r/min振摇1 h，取出冷却至室温，得浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L标准曲线溶液。过0.45 μm微孔滤膜，经高效液相色谱测定，绘制标准工作曲线。用保留时间定性，外标法定量。

2 结果与分析

2.1 反应条件的选择

为了解衍生温度对结果的影响，本试验对同一样品在不同的衍生温度（分别为30、40、50、60 ℃）下甲醛的含量进行了测定，结果表明：在50 ℃衍生能获得最大的峰面积，即衍生效果最好。

为了解水浴时间对结果的影响，本试验分别试验了40、50、60、70、80、90 min的衍生化时间对结果的影响。结果表明，在衍生化60 min时，衍生基本完成，因此本试验将衍生化时间定为60 min。

2.2 标准曲线及线性方程

将配制好的标准曲线工作液，按照1.2.1中的色谱条件进行上机测定，以峰面积为纵坐标，以甲醛浓度为横坐标，得到线性方程Y=1.02×104+6.12×105X，线性相关系数为0.999 9。

2.3 准确度和精密度

分别取秋刀鱼和大黄鱼样品2.0 g，加入相当于样品含量5、10、20 mg/kg的甲醛，每个水平设7个平行，按1.2.2方法对样品进行处理后，上机测定，计算回收率及方法的精密度，结果见表1。可以看出，当添加水平>5 mg/kg时，甲醛回收率为84.6%～87.2%，相对标准偏差均小于5%，符合分析要求。endprint

2.4 检出限

按照方法所规定的称样量和定容体积，根据3倍信噪比（S/N），计算出本方法的检出限为0.2 mg/kg。

2.5 样品测定

利用本方法分别对5个未知样进行检测，其中未知样1和未知样2为经快速检测方法确定为阳性的样品，检测结果见表2。可以看出，未知样1、2测得的甲醛含量较高，其余未知样测得甲醛含量较低或未检出，可推断未知样1、2可能人为添加了防腐剂甲醛。

3 结论

采用2，4-二硝基苯肼乙腈溶液及缓冲液在提取水产品中甲醛的同时进行衍生反应，经液相色谱上机测定甲醛含量的方法，具有前处理操作简便、结果准确、精密度高等优点，有效地提高了检测效率，适合于批量测定水产品中的甲醛。

4 参考文献

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[3] 食品添加剂使用标准：GB 2760-2011[S/OL].[2015-04-25].http：//www.cqbsfda.gov.cn/CL0011/354.html.

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