干拌料方式添加液态酵益的菌群活性变化

姜晓君

摘要 研究全价料中添加液态酵益在存放期内菌群活性的动态变化，将活菌制剂液态酵益7.5 mL加入3 kg饲料中，再加入6 g红糖进行无氧发酵，分别取发酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的样品进行检测微生物数量变化情况。结果表明：酵益此类微生态制剂加入饲料中发酵，代表性微生物啤酒酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳酸杆菌的数量均在前6 d之内达到最大值，也就是在饲料发酵后的4～8 d饲喂动物，这样有益性最大，而在保存30 d后，有益菌的数量下降到较低水平，不适宜继续保存。

关键词 微生态制剂；液态酵益；啤酒酵母；植物乳酸杆菌；枯草芽孢杆菌

中图分类号 S816.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）12-0255-01

微生态制剂是利用动物体内正常微生物成员及其代谢产物或生长促进物质经特殊加工工艺制成的制剂，能够补充动物肠道内减少或缺乏的正常微生物，具有无毒副作用、无耐药性、无残留、成本低、效果显著等特点。微生态制剂可以增强机体免疫力，提高饲料转化率和畜禽生产性能，降低畜禽产品中胆固醇含量，减少养殖环境及粪便中有害物质的含量，经济效益和社会效益显著[1-3]。

试验液态微生态制剂选用芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌和酪酸菌）、乳酸球菌（屎肠球菌）和酵母菌（酿酒酵母和异常毕赤酵母）。其中，枯草芽孢杆菌具有多种酶活性，能降解许多复杂的碳水化合物，利于促进动物消化吸收、改善饲料转化率，并且芽孢杆菌与双歧杆菌有共生作用，能促进双歧杆菌的生长；酿酒酵母和异常毕赤酵母不仅蛋白含量较高，而且能抑制大肠杆菌，破坏其致病机制，能吸附有害物质和病原菌（如金黄色葡萄球菌），促进有益菌生长；屎肠球菌粘附能力很强，能定植于肠道中并发挥一定的益生作用。每种菌混合后协同配合，在动物体内起到营养和调节微生态作用[1-4]。

1 材料与方法

1.1 饲料发酵

用液体微生态制剂对饲料进行接种发酵，尤其是厌氧发酵是充分发挥微生态制剂促生长、抗病增产、增收和消除恶臭等作用的主要技术之一。原料配比：3 kg全价饲料+6 g红糖+7.5 mL微生态制剂（酵益）。厌氧发酵：将接种后的饲料加入罐、缸和密闭性较好的塑料袋中，充分压实后密封发酵（注意密封能否严格是厌氧发酵成功的关键），发酵温度为15～35 ℃。

1.2 培养基配方

啤酒酵母培养基：酵母膏10 g、葡萄糖20 g、蛋白胨20 g、琼脂20 g、蒸馏水1L；枯草芽孢杆菌培养基：肉膏3 g、氯化钠5 g、蛋白胨10 g、琼脂20 g、蒸馏水1 L；植物乳酸杆菌培养基：蛋白胨10 g、酵母膏5 g、葡萄糖5 g、乙酸钠5 g、吐温-80 1 g、KH2PO4 2 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、MnSO4·7H2O 0.05 g、CaCO3 20 g、琼脂20 g、蒸馏水1 L。

将3种菌所需的培养基原料配好，加入水后加热溶解，然后放在高压灭菌锅里121 ℃高压灭菌15 min备用。

1.3 试验方法

将活菌制剂酵美乐7.5 mL加入3 kg饲料中进行无氧发酵，分别取发酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的样品，从中称取10 g（精确到0.01 g），加入带玻璃珠的盛有100 mL无菌水的三角瓶中，在旋转式摇床上200 r/min充分震荡30 min，静止片刻待用。

用无菌吸管吸取1 mL上述菌悬液加入盛有9 mL无菌水的试管中，混成1∶10的菌悬液。这样依次稀释，分别得到1∶100、1∶1 000稀释度（每个稀释度必须更换无菌吸管），每个样品均稀释约102倍。

用无菌吸管分别吸取1 mL稀释102倍菌悬液加入培养皿内，分别与啤酒酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳酸杆菌的培养基混匀，每一稀释度重复2次，同时用无菌水作为空白对照，枯草芽孢杆菌（蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌）培养基倒置于37～40 ℃培养箱中培养24 h，植物乳酸杆菌培养基倒置于37～40 ℃培养箱中培养2～5 d，啤酒酵母培养基倒置于28～30 ℃培养箱中培养1～2 d。培养完毕后记录所得数据。

1.4 统计分析

将每次得到的数据进行统计，计算公式如下：

发酵后饲料含菌量=菌落平均数×菌悬液体积×稀释倍数

2 结果与分析

由图1可知，每种代表菌在加入饲料后数量迅速增加，而枯草芽孢杆菌则比另2种菌相对增加得迟缓些，在第6天时才达到最大值。在拌入饲料的第4～6天内，3种菌数量比较可观，但在第8天后数量就开始递减。其中，啤酒酵母菌在第8～10 天时下降的幅度比其他2种菌要剧烈，另2种菌则下降的比较平缓。在干拌料上来看，当酵益加入饲料后，最好能在第4～6天时饲喂动物，在保存30 d以后菌种数量已经下降的相对较低。由此可以看出，酵益加入饲料后的保存期限最好在30 d内，否则饲料内加入的酵益则起不到预期的效果。

3 结论与讨论

（1）本试验利用菌种之间的协作共生，初步确定了多菌种混合液态微生态制剂的发酵温度为室内常温（约25 ℃）。这种工艺所选用生产原料价格低廉，生产工艺简化，能回收利用包括菌体及其代谢产物和底物在内的所有发酵物，既保留活性成分又没有废液污染[1-3]。

（2）多菌种混合液态微生态制剂蛋白含量和营养成分较高，可减少畜禽疾病的发生，降低养殖成本，应用前景广（下转第257页）

阔。本试验证明了多菌种混合液态发酵的可行性，但只是初步确定了生产发酵工艺，在菌体共生协作机理方面还研究得较少，对于实践缺乏有效的理论指导，并且发酵周期较长，所以需要进一步优化发酵参数[1-3]。

（3）3种菌的的生长趋势有所不同，啤酒酵母和植物乳酸杆菌均是在第4天时达到最大值，而枯草芽孢杆菌则是在第6天时达到最大值。在最高值上，是啤酒酵母菌的数量最高，植物乳酸杆菌其次，枯草芽孢杆菌则最低。

4 参考文献

[1] 孙媛.液态复合微生态制剂的研制及在仔猪生产上的应用[D].长春：吉林农业大学，2006.

[2] 初冠群.浅谈微生态制剂的研究应用与发展现状[J].中国畜禽种业，2012（2）：21-22.

[3] 李桂杰，张钧利.动物微生态制剂的研究进展[J].饲料工业，2000（11）：6-8.

[4] 周淑芹，孙文志.酵母培养物[J].中国饲料，2003（5）：31-32.endprint