高效液相色谱仪常见故障原因分析和解决方法

卓宇桢（正大青春宝药业有限公司，浙江 杭州 310023）

作为当前分离分析技术中的典型代表，高效液相色谱以其自身应用范围广、分析速度快、灵活度与分析效率高等优势被广泛用于生化医学领域中。然而实际操作过程中也可能存在故障现象，使分析结果受到不同程度影响，要求操作人员做好及时排查与维护，提高高效液相色谱仪的使用效果。

1 故障产生的原因与解决方法分析

1.1 液相色谱仪的泵压问题

泵压问题在高效液相色谱仪运行中主要体现在：第一，无压力问题。该问题产生的原因可能因泵内存有气体，或流动相单向阀因缓冲盐过多而发生堵塞，也因设备高压密封垫的使用造成变形问题。对此问题的解决要求对流动相进行合理选择，拧松排气阀并控制流速，同时需对高压密封垫及时更换。第二，压力过高问题。产生这种问题的原因为溶剂过滤头、管路与手动进样器发生堵塞以及保护柱、混合气与色谱柱出现被污染情况等。解决方式需利用冲洗液对堵塞情况冲洗，而污染问题要求对保护柱进行更换，利用冲洗液清除色谱柱的污染并引入HPLC级水使混合器置于其中完成清洗。第三，压力过低问题。该问题存在的原因如系统漏液或气泡存于泵内等，需要对漏液部位检测且及时更换装置，气泡现象则需使排气阀拧松，实现排气的目标。第四，压力不稳问题。除高压密封垫受损或污染与堵塞等因素外，如比例阀失效或空气存于溶剂内都可能造成压力不稳，需要对比例阀进行更换，并通过排气阀的设置与流速的控制实现超声脱气[1]。

1.2 高效液相色谱仪基线问题分析

基线问题方面的故障主要包括基线漂移与噪声过大两方面问题。其中基线漂移问题的产生主要受色谱柱、流动相、检测池的污染以及不稳定的电压与柱温波动等影响，解决方式通常应利用清洗剂解决污染问题，并适时检查电压，避免在阳光充足或气流作用明显区域放置柱子。另外也存在流动相不合理的情况出现基线的上下波动，要求在溶液使用方面做到精密量取，保证混合配制合理。而噪声问题存在的原因主要取决于电干扰所引起的偶然噪声、污染引起的随机噪声以及气泡或检测器等方面产生的噪声，对此需对如水溶等产生干扰的来源进行检查，清洗设备污染情况并对流动相进行脱气。

1.3 峰形问题的分析

峰形问题常见的故障类型主要包括：第一，平头峰故障。这种故障产生的原因体现在紫外灯、检测池方面的原因以及进样量过大，应在高效液相色谱仪运行中对紫外灯与检测池进行适时检修与清洗，并控制进样量。第二，分叉峰故障。分叉峰故障多表现在双峰或肩峰方面，产生的原因除检测池、色谱柱、进样阀与保护柱污染方面，也存在溶剂选择不合理以及样品过载等原因，可采取清洗措施，保证溶剂合理选择并减少进样量。第三，拖尾峰故障，其产生的原因体现为：流动相的pH、流速、配比等不合理，且样品纯度较低，要求对流速进行控制，合理选择pH与配比，对样品需进一步纯化。第四，伸舌峰故障。产生的原因与拖尾峰故障较为相似，不同的是柱温较低、样品过载，应做好温度与进样量的控制。

1.4 保留时间问题

高效液相色谱仪中保留时间问题首先表现在保留时间变化方面，其产生的原因为柱温与柱内条件的变化、柱污染以及缓冲液容量不足等。对此需要引入恒温箱，适时清洗柱，并利用缓冲液解决缓冲液容量不足问题。其次，保留时间过长问题，该故障出现的原因主要受流动相组成变化、管路泄漏与硅胶柱活性点发生改变等，需要避免流动相出现沉淀显现，进行泵密封圈的更换，同时需将改性剂引入流动相中[2]。

2 对高效液相色谱仪采取的主要维护方式分析

日常维护设备过程中主要针对进样阀、溶剂过滤头、单向阀、色谱柱以及检测池等方面。从进样阀方面，在实验过程中进样阀的污染容易造成如分叉峰等问题，对设备的准确性产生一定影响。所以在清洗过程中可针对含有缓冲盐与不含缓冲盐的样品采取不同的策略，若缓冲盐存于样品中，则需将HPLC级水注射在进样口处，直到清洗干净为止，而对不含缓冲盐的样品清洗时，在方式上与前者相同，但清洗次数相对较少。从溶剂过滤头清洗角度，如前文所述在使用中往往因污染或堵塞产生泵压故障问题，在日常维护过程中需在利用HPLC级水清洗后对流动相流速进行设置，注意分析过滤器内是否存在气泡问题，保证霉菌菌团被破坏后，说明过滤器内可使流动相自由通过。从单向阀角度，其出现污染或堵塞的情况多由于密封性较差或存有颗粒物质，维护过程中应利用纯净水进行超声清洗。在色谱柱清洗方面，其作为HPLC主要部件，很容易在使用过程中出现柱压不稳或峰形变化问题，维护中在保证盐类被清洗干净的前提下，引入甲醇冲洗，并将正相柱在如乙烷等溶剂中保存。

3 结语

故障的分析与解决是保证高校液相色谱有效运行的重要途径。分析过程中应根据存在的泵压、基线、峰形以及保留时间等问题产生的原因进行研究并采取相应的策略，而在日常实验后也需对进样阀以及色谱柱等方面做好日常维护检查工作，以此发挥设备的应有效果。

[1]贺小蔚,李卫建,娄炯炯,黄金丽,范中南,汪聪慧.高效液相色谱仪的常见故障及简易排除方法[J].现代科学仪器,2012,01:151-154.

[2]徐晓玲,楼雪芳.高效液相色谱仪使用中的常见故障及维护方法[J].山东化工,2014,09:43-48.

[3]陈莲,高洪,肖啸.高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法[J].中国饲料,2010,08:37-38.