丝瓜藤提取物治疗鼻炎的机理研究

陈卫卫，梁　迪，李海涛，梁秀珍，刘华钢，李　媛（.广西中医药大学，广西南宁　5000；.南京中医药大学，江苏 南京　009；.广西壮族自治区食品药品监督管理局，广西 南宁　5009）

丝瓜藤提取物治疗鼻炎的机理研究

陈卫卫1，2，梁迪1，李海涛2，梁秀珍1，刘华钢3，李媛1
（1.广西中医药大学，广西南宁530001；2.南京中医药大学，江苏 南京210029；3.广西壮族自治区食品药品监督管理局，广西 南宁530029）

摘要：［目的］探讨丝瓜藤提取物治疗鼻炎的作用机理。［方法］采用卵清白蛋白和Al（OH）3建立小鼠过敏性鼻炎模型，按剂量灌服相应药物10 d，观察小鼠的症状和鼻黏膜组织形态学的病理变化，并检测血清中的组胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数。［结果］丝瓜藤氯仿部位提取物能有效改变鼻炎小鼠鼻黏膜病理改变，减少血清中组胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数，从而达到治疗鼻炎的作用。［结论］丝瓜藤治疗鼻炎的作用机制可能是通过降低组胺水平和嗜酸性粒细胞数量来实现的。

关键词：丝瓜藤；鼻炎；卵清白蛋白；作用机理

鼻炎（allergic rhinitis，AR）属于中医学“鼻渊”范畴，内因以肺、脾、肾虚损为主，外因多以风寒侵袭或异气、异味刺激所致，常以突然和反复的鼻痒、鼻塞、喷嚏、流清涕、鼻腔黏膜苍白肿胀为特征，为临床常见且多发的疾病［1］。鼻炎若长期治疗无效，会导致过敏性哮喘、鼻窦炎、鼻息肉、中耳炎和变应性结膜炎的发生，严重影响患者学习和工作，导致生活质量下降，儿童可引起发育迟缓。目前治疗鼻炎的药物主要是抗组织胺药、肾上腺皮质激素和阻止肥大细胞脱颗粒的膜稳定剂，临床上常用非那根、扑尔敏等药物治疗，但有嗜睡、口干、头晕等副作用［2］。中药在防治鼻炎方面具有一定的优势，副作用较小［3-5］。笔者在前期研究发现，丝瓜藤具有抗炎、抗过敏作用，有效成分是氯仿提取部位［6］。为了进一步验证其疗效，本试验通过建立小鼠鼻炎模型，观察其提取物治疗鼻炎的作用机理，为合理开发丝瓜藤资源提供参考和依据。

1　实验材料

1.1试药丝瓜藤采于广西中医药大学药用植物园，经广西中医药大学宁小清高级实验师鉴定为葫芦科植物丝瓜Luffa cylindrica（L.）Roem.的根和茎。丝瓜藤提取物由本课题组制备，取丝瓜藤适量，用95%乙醇回流提取2次，每次1 h，滤过，合并提取液，回收乙醇得到丝瓜藤粗提物。粗提物用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿部位提取物，其中生药含量（生药g/萃取物g）为152.87 g/g。鼻炎康片（佛山德众药业有限公司，批号:11101）；其余试剂均为化学纯。

1.2动物清洁级昆明小鼠，雌雄兼用，体重20±2g由广西医科大学实验动物中心提供，合格证号:SCXK（桂）2007-0003，适应性饲养3 d供试。

1.3仪器BS224S电子天平（北京赛多利斯）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Waters-2995高效液相色谱仪（美国Waters公司）；LG16-W离心机（北京医用离心机厂）。

2　方法与结果［7-10］

2.1鼻炎动物模型的建立选取合格健康的小鼠，以卵清白蛋白（OVA）10 μg和Al（OH）32 mg溶于1 ml生理盐水中，进行腹腔注射，隔天1次，连续7次（14 d）；于第15 d开始，以1%OVA生理盐水溶液喷雾吸入激发，每次10 min，连续7 d。对同致敏天数的小鼠进行眼球采血，离心取得血清并按倍数（1/2，1/4，1/8，1/16，1/32）稀释，然后分别取0.1 ml上述稀释好的各种血清注射于正常未致敏小鼠背部皮内。48 h后，尾静脉注射1 ml卵白蛋白伊文思蓝生理盐水溶液（2 mg卵白蛋白和10 mg伊文思蓝溶于生理盐水中），30 min后将小鼠颈椎脱臼处死，剥离皮肤测定蓝斑直径，蓝斑直径大于5 mm判定为阳性反应，提示动物已被致敏，并可继续进行实验。

2.2给药治疗取造模成功的小鼠，随机分为:模型对照组，鼻炎康组，丝瓜藤高、中、低剂量组，每组10只。另设10只为空白对照组。丝瓜藤高、中、低剂量组的剂量分别为3.46，1.73，0.865/kg；鼻炎康组剂量为0.64 g/kg；模型对照组和空白对照组用等体积的生理盐水灌胃，连续用药10 d。在给药期间，除空白对照组外，余组小鼠每隔1天用1%OVA溶液雾化吸入，激发维持，雾化时间为每次灌胃后1 h。

2.3检测指标于末次给药后30 min给予1%OVA激发，激发后观察30 min内小鼠出现鼻痒、喷嚏、流涕等情况及症状轻重，动物鼻炎症状评分标准见表1。然后摘眼球取血，离心取血清测定其组胺含量；取小鼠的鼻中隔进行鼻黏膜组织病理切片，并选取5个高倍视野（×1 000）计数嗜酸性粒细胞（EOS），计算其平均值作为该切片的代表值；取外周血作白细胞分类测定。

表1　动物鼻炎症状评分标准

2.4统计学处理运用SPSS17.0软件统计，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间差异采用t检验，以P＜0.05为有显著性差异。

3　结果

3.1各组症状积分及组胺含量、鼻黏膜EOS计数结果

见表2。

表2　各组症状改善及组胺含量、鼻黏膜EOS计数（±s，n=10）

表2　各组症状改善及组胺含量、鼻黏膜EOS计数（±s，n=10）

注:与空白组比较，①P＜0.05；与模型组比较，②P＜0.05；下同

组别剂量（g/kg）空白对照组—模型对照组—鼻炎康组　0.64丝瓜藤低剂量组　0.865丝瓜藤中剂量组　1.73丝瓜藤高剂量组　3.46症状积分（分）组胺含量（μg/ml）鼻黏膜EOS（个/HP）0.60±0.84　0.6237±0.3347　0.70±0.67 7.20±1.14①　1.6046±0.1349①　4.80±0.79①1.30±0.48②　0.7689±0.3397②　2.80±0.63②2.20±0.63②　1.2619±0.0162②　1.70±0.48②1.90±0.73②　1.0630±0.0235②　1.50±0.53②1.70±0.82②　0.8674±0.0256②　1.10±0.57②

表2症状积分结果表明，与空白对照组比较，模型对照组症状积分明显升高（P＜0.05）；与模型对照组比较，丝瓜藤各剂量组及鼻炎康组症状积分显著下降，差异均有统计学意义（P＜0.05），表明用药后症状得以明显缓解。

组胺含量测定及鼻黏膜EOS计数结果显示，模型对照组组胺含量及鼻黏膜EOS计数明显高于空白对照组（P＜0.05）；与模型对照组比较，丝瓜藤各剂量组及鼻炎康组组胺含量及鼻黏膜EOS计数显著下降，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

3.2各组白细胞分类测定结果见表3。

表3　各组白细胞分类测定结果（±s，n=10）

表3　各组白细胞分类测定结果（±s，n=10）

组　别剂量（g/kg）　嗜中性粒细胞（%）　嗜碱性粒细胞（%）　嗜酸性粒细胞（%）　淋巴细胞（%）　单核细胞（%）空白对照组模型对照组鼻炎康组丝瓜藤低剂量组丝瓜藤中剂量组丝瓜藤高剂量组--0.64 0.865 1.73 3.46 0.90±0.74　0.10±0.32　0.20±0.42　3.90±0.99　0.30±0.15 11.90±1.20①　11.10±1.20①　9.60±0.97①　10.70±1.25①　8.10±0.88①2.80±0.92②　2.60±0.70②　1.80±0.79②　3.80±0.79②　1.20±0.79②5.20±1.32②　6.90±0.88②　5.10±0.74②　7.50±0.85②　4.70±0.95②3.00±0.82②　5.10±0.74②　3.90±0.88②　6.90±0.74②　1.90±0.74②1.20±0.79②　3.00±0.82②　2.90±0.74②　4.90±0.74②　1.20±0.79②

表3结果显示，与空白对照组比较，模型对照组各类白细胞含量均明显升高（P＜0.05）；而各用药组中各类白细胞含量均有不同程度的下降，与模型对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

3.3各组鼻黏膜病理切片图见图1。

图1　各组鼻黏膜病理切片特征（HE染色，×40）

图1显示，空白对照组黏膜上皮未见增厚，黏膜下层未见炎性细胞浸润；模型对照组黏膜上皮明显增厚，并见黏膜下层大量嗜酸性粒细胞浸润（注:箭头所指的为嗜酸性细胞）；鼻炎康组黏膜上皮增厚，黏膜下层嗜酸性粒细胞较模型对照组少；丝瓜藤低剂量组黏膜下层嗜酸性粒细胞减少；丝瓜藤中剂量组嗜酸性粒细胞较模型对照组大量减少，但黏膜上皮层及黏膜下层增厚，腺体增多；丝瓜藤高剂量组未见嗜酸性粒细胞浸润，但黏膜上皮层及黏膜下层增厚，腺体增多较中剂量组少。

4　讨论

AR是IgE介导的Ⅰ型变态反应性疾病，其发病机理复杂，有多种炎症细胞及多种细胞因子参与，其中EOS作为变态反应主要效应细胞，其功能与其所产生和释放的化学性介质、颗粒相关蛋白和某些细胞因子有关。本试验研究显示，丝瓜藤提取物能降低鼻黏膜中EOS计数，改善小鼠鼻炎症状。

组胺是肥大细胞释放的主要炎性介质，是引起AR鼻痒、流涕和喷嚏症状的主要原因之一，组胺与鼻腔上皮细胞中的Hl受体结合，引起血管通透性增加和腺体分泌亢进，出现变态反应的症状。因此组胺在AR的发病机制中起着重要的作用。本试验结果显示，AR模型对照组血清中组胺的含量明显高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），说明AR发病时小鼠血清中组胺明显增多，使小鼠鼻黏膜毛细血管通透性增加，腺体分泌增多，产生并加重变态炎症性反应。用药后，与模型对照组比较，鼻炎康组及丝瓜藤高、中、低剂量组血清中组胺水平均显著降低（P＜0.05），表明鼻炎康和丝瓜藤提取物均能显著降低鼻炎小鼠血清中的组胺水平，使炎性介质的释放减少，并减少对鼻黏膜及其血管和腺体的刺激，减轻过敏反应症状，从而达到治疗AR的目的。

参考文献

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（编辑陈明伟）

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：2095-4441（2015）02-0001-03

收稿日期:2015-02-18

基金项目:广西卫生厅中医药科技专项课题（编号:GZKZ10-037）

作者简介:陈卫卫（1969-），女，广西北流人，教授，研究方向:新剂型、新制剂的研究

通信作者:李海涛，E-mail:lihaitao0003@sina.com

Study on the Mechanism of extracts in vine of Luffa on the Treatment of Allergic Rhinitis

CHEN Wei-wei1，2，LIANG Di1，LI Hai-tao2，LIANG Xiu-zhen1，LIU Hua-gang3，LI Yuan1
（1.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530001；2.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu，210029；3.Guangxi Food and Drug Administration，Nanning，Guangxi，530001）

Abstract:［Objective］To investigate the curative effects and its mechanism of extracts in vine of Luffa on the treatment of allergic rhinitis.［Methods］The mice model of allergic rhinitis were induced by ovalbumin and Al（OH）3so as to observe the symptoms of the mice and pathological changes of nasal mucosal morphology and to detect the histamine content and eosinophils of the nasal mucosa in the serum after 10 days of drenching corresponding drugs.［Results］The extracts in vine of Luffa can effectively change pathological alteration of nasal mucosa in rhinitis mice and reduce histamine levels and eosinophils of the nasal mucosa in the serum so as to cure rhinitis.［Conclusion］The functional mechanism of vine of Luffa in treating rhinitis can be achieved through decreasing histamine and eosnophils.

Keywords:Vine of Luffa；Allergic Rhinitis；Ovalbumin；Functional Mechanism