人体血浆微小RNA—499对急性心肌梗死患者的诊断价值

罗楚

[摘要] 目的 探讨人体血浆微小RNA-499（miRNA-499）对急性心肌梗死患者的诊断价值。 方法 选取本院2012年1～12月收治的60例急性心肌梗死患者作为观察组，另选择同期本院体检中心的60例无心脑血管疾病史的健康体检者作为对照组。以两组的miRNA-499为指标进行含量考察，比较急性心肌梗死患者的miRNA-499、cTn、CRP诊断符合率。 结果 观察组的miRNA-499相对表达量为3.623±1.123，显著高于对照组的0.819±0.017，差异有统计学意义（P<0.05）。60例AMI患者中，miRNA-499的阳性率为100%，cTnI与cTnT的阳性率均为96.7%，CRP的阳性率为86.7%。 结论 miRNA-499可作为急性心肌梗死的新标志物，进一步提高急性心肌梗死诊断的特异性。

[关键词] 血浆微小RNA-499；急性心肌梗死；早期诊断

[中图分类号] R542.2+2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）05（c）-0099-03

[Abstract] Objective To explore the diagnostic value of human plasma miRNA-499 for patients with acute myocardial infarction. Methods 60 patients with acute myocardial infarction from January 2012 to December in our hospital were selected as the observation group.60 cases with no history of cerebrovascular disease received health examination in the physical examination centre of our hospital were selected as the control group.The content of miRNA-499 in the two groups was investigated as the index，diagnostic accordance rates of miRNA-499，cTn and CRP in 60 patients with AMI was compared. Results The relative expression level of miRNA-499 in the observation group was 3.623±1.123，which was higher than 0.819±0.017 in the control group，with significant difference（P<0.05）.In 60 patients with AMI，the positive rate of miRNA-499 was 100%，the positive rate of cTnI and cTnT was 96.7% respectively，and the positive rate of CRP was 86.7%. Conclusion MiRNA-499 can be used as a new marker of acute myocardial infarction.and can further improve the specificity of acute myocardial infarction diagnosis.

[Key words] Plasma miRNA-499；Acute myocardial infarction；Early diagnosis

目前，心血管疾病严重影响着人类健康，其中急性心肌梗死患者的病情最重，死亡率最高，及时准确地确诊急性心肌梗死可以缓解病情，降低死亡率[1-2]。临床用于诊断急性心肌梗死的主要标志物为血清超敏心肌肌钙蛋白I和心肌肌钙蛋白I（cTnI），但确诊时间较长[3-5]。本研究采用qRT-PCR检测方法对本院收治的急性心肌梗死患者进行miRNA-499含量动态检测，旨在进一步了解miRNA-499对AMI的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2012年1～12月收治的60例急性心肌梗死患者作为观察组，其中男38例，女22例；年龄39～82 岁，平均（59.4±6.9）岁。另选择同期本院体检中心的60例无心脑血管疾病史的健康体检者作为对照组，其中男40例，女20例；年龄37～78岁，平均（56.4±7.1）岁。观察组的所有入选者均符合中华医学会心血管分会《急性心肌梗死诊断标准和指南》中的相关诊断标准，均在发病后24 h内入住CCU。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有AMI患者入院后均采集肘静脉血3 ml，发病后2、4、6、8、10、12、16 h分次抽血，分离血清后待用，直至miRNA-499峰出现，继续于第2、3、4、5、6、7天抽血，每天抽血2次直至miRNA-499含量恢复正常。所有患者在中心静脉置管处采血，加入EDTA抗凝血，采血后将采血管倒置数次，采集到的血样要在30 min内送达实验室，血样按照15 min之内两步离心法处理取上清液待测[3]。

1.2.2 检测方法 采用qRT-PCR检测方法检测miRNA-499含量，cTnT测定采用电化学发光法，cTnI采用金标法，CRP采用免疫透射比浊法测定。

1.3 试剂与仪器

Beckmen公司Access全自动微粒子免疫化学发光分析仪及配套试剂，TAKARA公司Two Step qRT-PCR Kit，德国Eppendorf公司台式高速冷冻离心机[5804R及小型高速离心机（5415D）]，美国Forma公司-80℃深低温冰箱，cTnI检测试剂盒，cTnT检测试剂盒。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组miRNA-499水平的比较

观察组的miRNA-499相对表达量为3.623±1.123，显著高于对照组的0.819±0.017，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 所有患者的miRNA-499、cTnI、cTnT阳性率情况

60例AMI患者中，miRNA-499的阳性率为100%，cTnI与cTnT的阳性率均为96.7%，CRP的阳性率为86.7%（表1）。

3 讨论

急性心肌梗死是由于冠状动脉病变的形成使心肌供血急剧减少或中断所致[6]，是心肌的缺血性坏死，具有发病快、死亡率高的特点。在急性心肌梗死的诊断方法中，肌酸激酶同工酶（CK-MB）以前一直被认为是诊断的最佳标准，但CK-MB在AMI早期、晚期诊断中灵敏度低、特异性差、升高持续时间短[7-9]。AMI患者的心肌细胞受损后，细胞膜的完整性和通透性均发生改变。在梗死部位，心肌细胞内的化学物质释放到外周血液中，可在血液中检测到这些化学物质，即为心肌损伤标志物，通过检测这些化学物质的含量即可诊断是否发生AMI。有研究显示，检测miRNA-499的含量变化是目前确诊AMI的最有效方法[10-12]。

微小RNA是一类小分子非编码RNA，由21～25个核苷酸构成，主要通过与靶mRNA 3′-非翻译区的碱基互补配对抑制靶mRNA翻译，在转录后水平调节靶基因表达。相关研究通过前降支动脉结扎法建立大鼠心肌梗死模型，应用定时定量RT-PCR法，发现17个与急性心肌梗死相关的miRNA座位候选标准，其中9个miRNA表达显著上高，包括miRNA-499，提示miRNA-499可作为心肌梗死的生物标记物和治疗靶点[13]。AMI发生时，miRNA-499出现早，在AMI出现2～4 h明显增加，具有持续时间长、特异性高等特点，可广泛应用于急性心肌梗死的临床诊断，为早期诊断急性心肌梗死提供重要的临床价值，而国外有关miR-499与急性心肌梗死关系的研究较少[14-15]。

本研究结果显示，而国外心肌梗死者患者的miRNA-499相对表达量为3.623±1.123，显著高于健康体检者的0.819±0.017，差异有统计学意义（P<0.05）。60例AMI患者中，miRNA-499的阳性率为100%，cTnI与cTnT的阳性率均为96.7%，CRP的阳性率为86.7%。

综上所述，miRNA-499可作为急性心肌梗死的新标志物，以进一步提高急性心肌梗死诊断的特异性。

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（收稿日期：2015-01-15 本文编辑：祁海文）