中药茺蔚子炮制工艺优化的研究

李智萌　张彦飞　蔡广知等

[摘要] 目的 改进中药茺蔚子的炮制工艺，考察影响中药茺蔚子的炮制因素。 方法 设计正交试验，考查中药茺蔚子的酒炒工艺，并对其进行多因素分析。考察标准以茺蔚子中盐酸水苏碱为指标，采用高效液相色谱结合蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）对其进行含量测定，采用方差分析等统计学方法分析数据，找出最佳的优化方案。 结果 水煎煮提取的最佳工艺为A1B3C3，即加水煎煮3次，第1次加8倍量水，浸泡1 h，煎煮1.5 h；第2次加6倍量水，煎煮1.5 h，第3次加6倍量水，煎煮1.5 h，滤过，合并滤液。炮制最佳工艺为A3B2C1D3，即使用25%加酒量浸润茺蔚子药材10 min后，将其在150℃下炒制5 min后即得。 结论 炮制的方法直接影响中药茺蔚子中盐酸水苏碱的含量，本研究为改进中药茺蔚子的最佳炮制工艺提供了参考依据。

[关键词] 茺蔚子；炮制工艺优化；盐酸水苏碱；高效液相色谱结合蒸发光散射检测器

[中图分类号] R283 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）05（c）-0016-04

[Abstract] Objective To improve the processing technology of the Chinese traditional medicine Motherwort fruit，and investigate the factors influencing for the processing of Chinese traditional medicine Motherwort fruit. Methods The orthogonal experiment was designed to investigate the fried wine processing of Chinese traditional medicine Motherwort fruit，and the multiple-factor analysis was given.Standard for Motherwort fruit was used Hydrochloric acid stachydrine as the index，which was used HPLC-ELSD to determine the content and the data were analyzed statistically by analysis of variance to find out the optimal scheme. Results Optimum water decoction was extracted for A1B3C3，was decocted three times，the first with 8 times amount of water，soaked for 1 h，boiled for 1.5 h；second times with 6 times amount of water，boiled for 1.5 h，third times with 6 times amount of water，decocted for 1.5 h，and then filtered and merged filtrate.The best processing technology for A3B2C1D3 was infiltrated 25% for liquor 10 min and under 150℃ fried for 5 min to obtain. Conclusion The processing methods is a direct impact on the content of stachydrine hydrochloride in Motherwort fruit，this study provides reference for optimizing the best processing method of Motherwort fruit.

[Key words] Motherwort fruit；Optimal processing method；Hydrochloric acid Stachydrine；HPLC-ELSD

中药茺蔚子又名益母草子，为唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的干燥成熟果实[1]。药材多秋季果实成熟时采割地上部分，晒干，打下果实，除去杂质。该中药首载于《神农本草经》，味辛、苦，性微寒。归心包、肝经，具有活血调经、清肝明目的功能，用于目赤肿痛或目生翳膜，酒炒品治疗头目之疾最佳[2-4]。“炒制”和“净制”两种炮制方法是目前中药茺蔚子的主要炮制方法。为传承其炮制理论和优化其炮制方法，进一步使中药茺蔚子更好地发挥功效，本研究以酒炒法为主要方法，考察影响酒炒工艺的因素和水平，采用正交试验的方法进一步优化和改进炮制工艺方法，对不同炮制方法制得的炮制样品进行试验比较。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（LC-10ATvP型，日本岛津公司），蒸发光散射检测器（上海分析仪器有限公司），空气压缩泵（天津市分析仪器厂），超声波提取器（上海分析仪器有限公司），85-2A数显测速恒温磁力搅拌器（金坛市荣华仪器制造有限公司），80-2型电动离心机（江苏金坛市金国胜实验仪器公司），百万分之一电子天平，十万分之一电子天平；水为超纯水，磷酸、乙腈为色谱纯；盐酸水苏碱对照品（批号：110710-201310，规格为20 mg，中国药品生物制品鉴定所）。

茺蔚子药材[5]，经长春中医药大学姜大成教授鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%乙醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取研磨后的茺蔚子粉末过四号筛，取过筛后的药材粉末约0.25 g，精密称定后记录其准确重量，转入完全干燥的50 ml具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，加塞，精密称定重量，记录，置入超声提取器中（频率40 kHz，功率250 W）处理30 min，待完全放冷后，再精密称定其重量，使用70%乙醇补足与第1次称量相比减少的重量，充分摇匀，置入漏斗中滤过，弃除滤液，精密取一定量续滤液，70%乙醇定容后即为供试品溶液[6-8]。

2.3 标准曲线的考察

取盐酸水苏碱对照品，精密称4.87 mg，完全转入10 ml棕色容量瓶中，先加一定量70%乙醇溶解，待溶解完全后，继续加乙醇定容至刻度，充分摇匀，即得（每1毫升含盐酸水苏碱对照品0.487mg）。分别精密吸取上述盐酸水苏碱对照品溶液1、3、5、7、9 μl，注入液相色谱仪，分别记录相应的峰面积值，其中，横坐标为进样量（μg）取对数后的值（X），纵坐标为峰面积积分取对数后的值（Y），制作标准曲线图（图1）。结果回归方程为Y=1.5503X+2.1495，r=0.9999，提示，盐酸水苏碱线性范围为0.487～4.383 μg时，进样量的对数值与峰面积积分的对数值之间有良好的线性关系[9-11]。

2.4 茺蔚子提取方法的考察

遵循中药汤剂的煎煮方法，确定水作为提取溶剂，提取方法选择热法提取，即煎煮法，且固液分离时应注意趁热滤过，使药效物质较少损失，以保证较高的提取率及临床疗效[12-13]。根据上述原则，对水煎煮提取工艺条件进行试验研究。试验考察了3个因素包括药材的加水量、煎煮时间及煎煮次数，其中每个因素考察了3个水平，根据因素和水平设计L9（34）的正交试验（表1），考虑到试验中可能存在误差的影响，每次试验平行3次。其中药材的浸泡时间采用单因素实验法，以直观考察进行评价；其他因素采取L9（34）正交设计实验法，以茺蔚子中有效成分盐酸水苏碱的含量为考察指标，优选最佳提取工艺参数。由方差分析表可知各因素影响的重要性顺序为B>C>A，提示对试验有显著性影响的主要因素为煎煮次数和煎煮时间，即主要影响因素是煎煮次数B和煎煮时间C，加水量A对试验结果影响较小，结合生产实际情况及实验操作，选择A1。综合分析结果，确定最佳提取工艺条件为A1B3C3，即加水煎煮3次，第1次加水8倍量，浸泡1 h，煎煮1.5 h，趁热滤过；第2次加水6倍量，煎煮1.5 h，趁热滤过；第3次加水6倍量，煎煮1.5 h，趁热滤过，合并滤液，即为供试品溶液（表2、表3）。

2.5 茺蔚子酒炒工艺的考察

茺蔚子酒炒工艺设计考察了酒炒温度、酒炒时间、浸润时间和加酒量4个因素，每个因素分别设了3个水平，根据因素和水平设计了L9（34）正交试验表（表4）。考虑到试验中可能存在误差的影响，每次试验平行3次[14-16]。使用最佳提取方法对炮制后茺蔚子进行提取，根据炮制后盐酸水苏碱含量优选炮制方法。正交试验的直观分析见表5，结果显示，炮制因素的主次为D>A>C >B，根据试验实际操作需求确定最佳组合为A3B1C1D3。由方差分析结果（表6）可知各因素影响试验结果的重要显著因素为A和D，由于B对试验影响不显著，故将其列入误差项处理。根据最终测得盐酸水苏碱含量和饮片外形特征为主要参考指标，A3B2C1D3为最终选择的最佳炮制工艺，即使用25%加酒量浸润茺蔚子药材10 min后，将其在150℃下炒制5 min后即得。

2.6 茺蔚子不同炮制品总浸膏量、盐酸水苏碱含量测定

取不同炮制品200 g，加水煎煮3次，第1次加8倍量水（其中2倍量是药材的吸水量），浸泡1 h，煎煮1.5 h；第2次加6倍量水，煎煮1.5 h；第3次加6倍量水，煎煮1.5 h，滤过合并滤液，比较不同炮制方法的浸膏量和盐酸水苏碱的含量。由实验结果可以看出，与生品比较，酒炒品总浸膏量、盐酸水苏碱含量差异显著（P<0.01）（表7），可见酒炒品在盐酸水苏碱含量上较高，说明优化后的酒炒工艺确实提高了炮制饮片的质量。

2.7 方法学考察

2.7.1 精密度试验 分别精密吸取已处理的供试品溶液及盐酸水苏碱对照品溶液各5 ml注入液相色谱仪，分别连续进样6次，按照上述色谱条件进行测定其峰面积，计算其相应的峰面积积分值可知，对照品溶液和供试品溶液峰面积的RSD值分别为1.59%、2.99%，表明该试验的仪器、方法的精密度良好[17]。

2.7.2 重复性试验 精密称取已过筛的茺蔚子药材粉末，按照“2.2”项下供试品溶液制备的方法进行处理，平行制备6份，依次独立测定，按上述色谱条件测定峰面积，计算茺蔚子药材中盐酸水苏碱的含量，考察试验方法的重复性，测定其盐酸水苏碱含量，结果平均含量为34.33 mg/g，RSD为1.67%，表明该试验方法具备良好的重复性。

2.7.3 稳定性试验 每隔一定时间，分别精密吸取茺蔚子药材供试品溶液和对照品溶液各5 μl注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定其峰面积，考察其稳定性。结果显示，在24 h内，测定对照品溶液和供试品溶液峰面积的RSD分别为1.84%、2.26%，表明盐酸水苏碱具备良好的稳定性，保证了其在24 h内测定结果准确可靠[18]。

2.7.4 加样回收率试验 精密称取茺蔚子药材样品，按照供试品制备项下方法处理，平行制备6份，且已测定其盐酸水苏碱的含量，向6份供试品中分别适量精密加入对照品，按照上述色谱条件进行测定，计算茺蔚子药材中的盐酸水苏碱加样回收率，经测定，其盐酸水苏碱平均加样回收率为97.96%，RSD值为0.92%，提示试验方法具备良好的准确度（表8）。

3 讨论

由于茺蔚子具有活血调经、清肝明目的作用，故本实验以茺蔚子中盐酸水苏碱作为主要指标对其炮制方法进行考察。优化后的酒炒法下盐酸水苏碱含量明显比生品高，可能与茺蔚子经酒制后增加了与酒相关的成分有关，炒制品的水溶性成分含量和盐酸水苏碱含量均高于生品，与中药传统炮制理论中“逢子必炒”的理论是相符合的[19-20]。此外，本试验确定茺蔚子的最佳酒炒工艺为使用25%加酒量浸润茺蔚子药材10 min后，将其在150℃下炒制5 min后即得，茺蔚子的最佳酒炒工艺为茺蔚子其他炮制工艺提供了参考依据。

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（收稿日期：2015-01-29 本文编辑：卫 轲）