微柱凝胶法在检测孕妇IgG效价中的应用研究

苗伶俐，孙海潮

微柱凝胶法在检测孕妇IgG效价中的应用研究

苗伶俐，孙海潮

目的比较微柱凝胶法与试管抗人球蛋白试验法检测O型RhD阳性孕妇血清中IgG抗-A、抗-B效价的差异，并界定微柱凝胶法检测孕妇IgG效价的阳性临界值。方法选择2012年8月～2014年9月血型为O型RhD阳性孕妇血清标本360例，均进行微柱凝胶法与试管抗人球蛋白试验法检测IgG抗-A、抗-B效价，比较两种检测方法的结果差异，确定微柱凝胶法检测孕妇IgG效价的阳性临界值。结果微柱凝胶法测定的IgG抗-A和IgG抗-B效价几何均数为试管抗人球蛋白试验法测定的2倍；微柱凝胶法检测IgG抗-A和IgG抗-B的阳性率为72.8%和67.8%，显著高于试管抗人球蛋白试验法检测的阳性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。微柱凝胶法与试管抗人球蛋白试验法测定IgG抗-A和IgG抗-B效价结果均呈高度正相关（rA= 0.869，rB=0.912,P＜0.05），根据回归方程计算微柱凝胶法具有临床意义的IgG抗-A和IgG抗-B效价的阳性临界值分别为128和121。结论微柱凝胶法检测孕妇IgG效价较试管抗人球蛋白试验法更简便、快捷，灵敏度高。对其阳性临界值的界定，可为临床诊断提供可靠的依据。

微柱凝胶法；试管抗人球蛋白试验法；孕妇；IgG；效价

新生儿溶血病是由于母婴血型不合，母体血清中的IgG类抗体通过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿红细胞破坏，导致胎儿不同程度溶血的一种免疫性溶血性疾病[1-2]。在疾病的预防中，动态检测孕妇血清IgG类抗-A和抗-B效价,是评估和诊断新生儿溶血病发生的重要指标[3]。传统检测方法是试管抗人球蛋白试验法，但是存在应用复杂、测定效果不敏感等缺点[4]。微柱凝胶法是一种利用凝胶中的孔径大小，通过离心分隔游离红细胞与凝集红细胞的方法[5]。离心后游离红细胞沉降于柱底，凝集红细胞浮于上方或分散于凝胶柱中[6]。其具有操作简单、重复性好、灵敏度高、结果易于判断等优点，并且凝胶中含抗人球蛋白，可检出浓度较低的IgG类抗体，可避免冷凝集素对配血造成的影响[7-8]。但微柱凝胶法检测孕妇IgG效价的参考值目前尚未确定，因此，本研究旨在比较微柱凝胶法与试管抗人球蛋白试验法检测O型RhD阳性孕妇血清中IgG抗-A、抗-B效价的差异，并界定微柱凝胶法检测孕妇IgG效价的阳性临界值，以期为临床诊疗提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2012年8月～2014年9月我院收治的血型为O型RhD阳性孕妇为研究对象，纳入标准：妊娠12~40 w；配偶均为非O型RhD阳性者；知情同意。共纳入360例，年龄23~39(31.92± 4.19)岁；平均妊娠(25.09±4.19)w；丈夫血型为A型180例，B型180例。

1.2 主要试剂与设备LB-37试剂卡孵育器，XHZ-111A型血小板恒温振荡保存箱，KJX-IA冰冻血浆解冻箱，微柱凝胶配血系统抗球蛋白试剂卡，抗人球蛋白试剂(羊免疫血清)、ABO血型反定型用红细胞试剂盒（4%标准红细胞）、ABO血型反定型用红细胞试剂盒（0.8%标准红细胞）均购自达美中国有限公司。

1.3 标本处理抽取360例受检孕妇血2 ml，置于37℃水浴1 h，离心分离血清与红细胞。取400μl血清标本与400μl 0.2 mol/L 2-ME应用液充分混匀，置37℃水浴3~4 min，充分裂解血清中抗体，并采用单克隆抗-A、抗-B做灭活对照。将经2-ME处理后的血清，用pH 7.0~7.4生理盐水做倍比稀释，稀释度分别为1∶2及其倍数，直到1∶256。用盐水法确定1∶2稀释度管IgM抗体已被破坏，取双管做平行试验，分别检测抗-A、抗-B效价。

1.4 微柱凝胶法测定取微柱凝胶配血系统抗球蛋白试剂卡，在微管内各加入50μl与孕妇丈夫同型的0.8%标准红细胞悬液，再依次加入上述处理的稀释度为1∶2及其倍数(直到1∶512)的血清50μl，置专用孵育器内37℃孵育15min，再放入专用离心机内离心5min(900 r/min，2min；1500 r/min，3min)，以出现1+凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。

1.5 试管抗人球蛋白试验法测定取经2-ME处理的稀释度为1∶2及其倍数(直到1∶512)血清各100μl，用4%A型、B型标准红细胞悬液，抗人球蛋白试剂做IgG抗-A、抗-B效价的测定，以出现1+凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。

1.6 统计学方法选择SPSS14.0软件进行数据分析，效价比较采用配对t检验，阳性率采用χ2检验，同时行直线相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测抗-A效价结果比较两种方法测定180份标本IgG抗-A效价结果见表1。微柱凝胶法测定的IgG抗-A效价几何均数为249.87，是试管抗人球蛋白试验法测定的IgG抗-A效价几何均数120.79的2.07倍(P＜0.05)。

表1两种方法测定180例标本l gG抗A效价分布(例）

表2 两种方法测定180例标本lgG抗B效价分布(例）

2.2 两种方法检测抗-B效价结果比较在180份标本中，微柱凝胶法测定的IgG抗-B效价几何均数为156.03，是试管抗人球蛋白试验法测定的IgG抗-B效价均数75.91的2.06倍(P＜0.05)。两种方法测定IgG抗-B效价结果见表2。

2.3 两种方法阳性检出率比较以临床上判断胎儿及新生儿溶血有意义的IgG抗-A效价≥64判为阳性，微柱凝胶法检测出IgG抗-A阳性131例，阳性率为72.8%，试管抗人球蛋白试验法检测出IgG抗-A阳性82例，阳性率为45.6%，差异有统计学意义(P＜0.05)；以临床上判断胎儿及新生儿溶血有意义的IgG抗-B效价≥64判为阳性，微柱凝胶法检测出IgG抗-B阳性122例，阳性率为67.8%，试管抗人球蛋白试验法检测出IgG抗-B阳性62例，阳性率为34.4%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.4 两种方法相关性及线性分析微柱凝胶法与试管抗人球蛋白试验法测定IgG抗-A效价结果呈高度正相关（rA=0.869，rB=0.912,P＜0.05），计算线性回归方程为YA=1.2047+0.9389X和YB=0.3214+ 1.1012X。以试管抗人球蛋白试验法IgG抗-B效价64为临床意义临界值，根据回归方程计算，微柱凝胶法具有临床意义临界值的IgG抗-A和IgG抗-B效价分别为128和121。

3 讨论

在输血中，准确的交叉配血是临床安全、有效输血的重要保证。而对于预防新生儿溶血病，积极进行交叉配血检测与监测意义重大[9]。由于新生儿溶血病的病情程度与母体血清IgG型抗-A(B)血型抗体效价存在一定的相关性，应用科学有效的方法检测孕产妇血清IgG抗-A(B)抗体效价，是临床上诊断新生儿溶血病的重要检查手段[10]。目前在临床上常用试管抗人球蛋白试验法检测孕妇血清IgG抗-A、抗-B效价，虽然应用范围比较广，但是操作繁琐，反应时间较长，不适用于大批量样本的检测[11]。

微柱凝胶试验(MGT)由于操作简单、重复性好、灵敏度高，已在国内广泛用于不完全抗体筛查、交叉配血、血型鉴定、抗体鉴定等[12]。本研究对360例O型RhD阳性孕妇血清标本检测结果显示，微柱凝胶法测定的IgG抗-A、抗-B效价几何均数为试管抗人球蛋白试验法测定的2倍；微柱凝胶法检测IgG抗-A和IgG抗-B的阳性率为72.8%和67.8%，显著高于试管抗人球蛋白试验法检测的阳性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。说明微柱凝胶法比试管抗人球蛋白试验法的敏感性高，主要在于其结果清晰易辨，灵敏度较高，能排除某些局限性干扰，如白细胞、血小板、纤维蛋白的干扰等。

当前临床上多以试管抗人球蛋白试验法测得IgG抗-A（B）效价64作为采取干预措施的临界值[13]。而微柱凝胶法检测具有更高的灵敏度，若以传统试管抗人球蛋白试验法的效价64为临界值，将会导致对患病风险的过高评估[14]。因此，应用微柱凝胶法测定IgG抗-A（B）效价，应重新确定其具有临床意义的临界值。本研究根据回归方程计算，微柱凝胶法具有临床意义临界值的IgG抗-A和IgG抗-B效价分别为128和121。

总之，微柱凝胶法用于检测孕妇IgG效价，较试管抗人球蛋白试验法更简便、快捷，灵敏度高。对其临界值的界定，可为临床诊断提供可靠的依据。

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Application ofmicro column gelmethod to detection of pregnantwomen's IgG titer

Miao Lingli1,Sun Haichao21.Department of Blood Transfusion;2.Department of Laboratory,Xingyuan Hospital of Yulin City, Yulin,Shaanxi,719000,China

Objective Tomake comparison between the differences in the detection of IgG anti-A and anti-B titer in the serum of pregnant women with O-blood type and positive RhD by the methods of micro column gel and vitro anti-human globulin test respectively,and to define the positively critical values of themicro column gelmethod for the detection of pregnantwomen's IgG titer.Methods Between August2012 and September 2014,there were 360 pregnantwomen with the O blood type and positive RhD whose serum sampleswere chosen to detect the IgG anti-A and anti-B titer by themethods ofmicro column gel and vitro anti-human globulin test respectively.Comparison wasmade between the results of the twomethods.The positively critical value of themicro column gel method for the detection of pregnant women's IgG titer was defined.Results The geometric mean of IgG anti-A and anti-B titer detected bymicro column gelmethod was twice than that detected by vitro anti-human globulin test.The positive rates of IgG anti-A and anti-B titer detected by micro column gel was 72.8%and 67.8%,which were significantly higher than those detected by vitro anti-human globulin test(45.6%and 34.4%)(P＜0.05).The results of IgG anti-A and anti-B titer detected by bothmethod all had a high positive correlation(rA=0.869,rB=0.912,P＜0.05).The positively critical values of the IgG anti-A and anti-B titerwere 128 and 121 according to the regression equation calculationmethod ofmicro column gel.Conclusion As to the detection of pregnantwomen's IgG blood group,micro column gelmethod ismore convenient and quicker and has higher sensitivity than vitro anti-human globulin test.The definition of the positively critical value by the formermethod can provide a reliable basis for the clinical diagnosis.

micro-column gelmethod;vitro anti-human globulin test;pregnantwoman;IgG;titer

R 446.119/714.15

A

1004-0188（2015）08-0859-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2015.08.016

2015-02-10）

719000陕西榆林，榆林市星元医院输血科（苗伶俐），检验科（孙海潮）