HPLC法对点地梅等七种民族药的槲皮素山奈酚的测定

何可群　吕昱　杨琼　赵宇中　卫亚丽

摘要：利用HPLC法测定了7种民族药——点地梅、阴地蕨、地桃花、华中铁角蕨、白马骨、刺三甲、飞龙掌血中的槲皮素和山奈酚含量。以C18色谱柱（100 mm×4.6 mm，5 μm）为固定相，以甲醇-0.4%磷酸水（45∶55，V/V）为流动相，柱温30 ℃，流速0.8 mL/min，检测波长360 nm。结果表明，槲皮素和山奈酚的线性范围为2.5～25.0 mg/mL，相关系数分别为0.999 8和0.999 9；精密度试验RSD（n=5）和稳定性试验RSD（n=5）均小于3%，加样回收率（n=5）达到98%以上。该法简单可靠，重现性好，适用于点地梅等民族药中的槲皮素及山奈酚分析。

关键词：HPLC；民族药；槲皮素；山奈酚

中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）10-2486-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.049

随着生命科学的发展和生活水平的提高，人类对药物质量提出了更高要求[1]。在开发高效、低毒绿色新药的过程中，一些少数民族特色药用植物越来越受到研究者的青睐，对民族药用植物开展系统研究是解释其药用功效和挖掘新药资源的重要途径[2]。点地梅、阴地蕨、地桃花、华中铁角蕨、白马骨、刺三甲、飞龙掌血等是中国西南地区白族、苗族等少数民族的常见名族药，其使用历史悠久、疗效确切[3-8]，但目前均未对其开展系统研究。槲皮素及山奈酚是重要的黄酮苷元，近年研究表明，槲皮素具有抗菌、祛痰、止咳、降血压、降血脂等功效；山奈酚具有抗菌、抗炎、止咳、抗癌等活性，常见于药用植物[9，10]。本试验采用HPLC法测定了点地梅等7种民族药用植物中的槲皮素及山奈酚含量，以期为相关民族药的开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

点地梅、阴地蕨、地桃花、华中铁角蕨、白马骨、刺三甲、飞龙掌血等样品信息见表1，标本保存于贵州民族大学化学与环境科学学院药学教研室。

槲皮素（117-39-5）及山奈酚（520-18-3）均购于贵州迪大科技有限责任公司。磷酸、无水甲醇均为色谱纯，浓盐酸为分析纯，去离子水。

1.2 仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent 1260 LC，美国安捷伦仪器有限公司），配备可变波长紫外检测器，756PC紫外-可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），METTLERAE240分析天平（上海天平仪器厂），数显恒温水浴锅（常州博远实验分析仪器有限公司）

1.3 方法

1.3.1 对照品储备液的配制 称取槲皮素、山奈酚各20 mg于50 mL容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，得400 mg/mL的单一对照品储备液备用。

1.3.2 供试品溶液制备 参照文献[11，12]，将自然晾干的点地梅等样品于60 ℃放置3 h，粉碎过40目筛，称取适量样品粉末，用体积分数80%的甲醇溶液20 mL浸泡，75 ℃水浴回流提取2次，每次1 h，合并提取液，冷却过滤，滤液用80%甲醇溶液补足至40 mL，加10 mL 35%（V/V）浓盐酸，85 ℃水浴回流水解1 h，迅速冷却，用甲醇定容至50 mL，摇匀，临用前过0.45 μm滤膜。

1.3.3 色谱分析 Agilent Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（45∶55，V/V），流速0.8 mL/min，检测波长360 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。

2 结果与分析

2.1 色谱分析

对照品及样品色谱图见图1。由图1可知，在该色谱条件下，目标物得到较好的分离。

2.2 线性关系考察

取标准溶液母液配制成槲皮素、山奈酚浓度均为2.5，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0 mg/mL的混合标准溶液，以0.45 μm滤膜过滤后，分别进样10 μL，在上述色谱条件下测定峰面积，以对照品溶液浓度X（mg/mL）为横坐标，峰面积YmAu·S为纵坐标绘制标准曲线，得槲皮素、山奈酚标准曲线回归方程、相关系数及线性范围分别为：槲皮素Y=43.86X-19.94，r=0.999 8；山奈酚Y=29.85X-13.24，r=0.999 9。结果表明，槲皮素及山奈酚在2.5～25.0 mg/mL范围内呈良好线性关系。

2.3 精密度试验

将质量浓度均为20.0 mg/mL的槲皮素、山奈酚混合对照品溶液，同上法分析，连续进样5次，槲皮素及山奈酚峰面积的RSD分别为0.98%、0.79%，表明方法精密度良好。

2.4 重复性试验

取同一批点地梅样品5份，同上法测定，计算槲皮素及山奈酚的平均质量分数，其RSD分别为1.86%和1.92%，表明方法重复性良好。

2.5 稳定性试验

将同一供试品溶液在0、2、4、8、10 h时，同上法测定，计算槲皮素及山奈酚的RSD分别为点地梅1.46%、1.92%；阴地蕨1.53%、1.39%；地桃花1.45%、1.79%；华中铁角蕨1.53%、2.18%；白马骨1.56%、2.07%；刺三甲1.97%、1.89%；飞龙掌血1.76%、2.09%。表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.6 回收率试验

称取5份已知含量的阴地蕨样品各0.250 g，分别加入山奈酚标准溶液适量；称取5份已知含量的阴地蕨样品各0.125 g，分别加入槲皮素标准溶液适量。同上法分析，结果见表2。

2.7 样品测定

称取7种民族药供试样品各3份，同上法分析，结果见表3。

3 小结

点地梅、阴地蕨、地桃花、华中铁角蕨、白马骨、刺三甲、飞龙掌血等是我国西南地区多个少数民族民间常用草药，但迄今为止，相关资源开发利用较为缓慢。本研究用HPLC法对它们的槲皮素及山奈酚含量进行研究，结果表明，点地梅、阴地蕨、地桃花中都含有丰富的槲皮素及山奈酚；华中铁角蕨含丰富的山奈酚而不含槲皮素；白马骨含有少量山奈酚而含槲皮素的量低于本方法检测下限；刺三甲及飞龙掌血都只含槲皮素而不含山奈酚。该结果可为挖掘上述民族药资源、研究民族药抗病机理提供参考。

参考文献：

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