萆术硝痛颗粒提取工艺研究

张文娓，崔 阔，谢 明，杨爽爽，宗可昕，范卓文

(1.黑龙江中医药大学实验中心，哈尔滨150040;2.北京秦脉医药咨询有限责任公司，北京100038)

近年来痛风的发病率逐渐升高，发病年龄提前，已成为危害人类健康的一种严重的代谢性疾病.萆术硝痛颗粒是由白术、土虫、萆薢等多味药材配伍而成，具有利湿浊、祛风湿、破瘀血的作用，临床用于治疗痛风具有良好疗效.方中白术具有抗炎、利尿作用[1－2].萆薢是治疗痛风和高尿酸血症的代表药物，萆薢提取物有显著的降尿酸作用[3－4].由于汤剂在临床应用中受到限制，因此在原方的基础上，以中医理论为指导，利用现代科技方法，选取正交实验，多指标综合考察，优化制剂的提取工艺[5－6]，为其成为中药成方制剂工艺研究奠定基础.

1 仪器与试药

1.1 仪 器

高效液相色谱仪(Waters1515，美国Waters公司);电热恒温减压干燥箱(DNP－9052，上海精宏实验设备有限公司);旋转蒸发仪(RE－3000A，上海亚容生化仪器厂);电子分析天平 (ESJ142－4，沈阳龙腾电子有限公司);电热恒温水浴锅(BC1，北京中西集团公司);超声波清洗仪SK250LH(上海科导超声仪器有限公司).

1.2 试 药

尿囊素(批号100431201203);甲醇(分析纯，天津天力化学试剂厂);甲醇(色谱纯，美国迪马公司);乙醇(分析纯);二乙胺(天津博迪化工股份有限公司).

2 实验方法

2.1 考察指标的测定

在一定实验因素和水平下，选择出膏率、浸出物和尿囊素及挥发质量浓度为考察指标.

2.1.1 出膏率测定

精密量取正交试验项下溶液40 mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，100℃干燥至恒重，计算干膏得率.

2.1.2 浸出物测定

将上述所得干膏研细，精密称定，按照2010年版《中国药典》一部附录ⅩA醇溶性浸出物测定法测定[7].

2.1.3 尿囊素质量浓度测定

色谱条件:色谱柱为AgilentExtend ODS反相柱(4.6 ×250 mm，5 μm);流动相为甲醇 － 水(90︰10);流速为1.0 mL/min;检测波长为205 nm;柱温35℃.

对照品溶液:精密称取尿囊素对照品4.0 mg，加50%甲醇溶液制成每1 mL含尿囊素0.4 mg的储备液.

供试品溶液:取正交试验项下的提取液10 mL，用石油醚(30～60℃)振摇提取2次，每次20 mL，合并石油醚提取液，低温蒸干，残渣加甲醇溶解，定量转移于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得.

线性关系:精密吸取尿囊素对照品溶液10 μL进入高效液相色谱仪，测定，以峰面积为纵坐标(Y)，质量浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，尿囊素线性回归方程为:Y=591.60X －37.509，r=0.999 1，线性范围是:2.0 ～12.0 μg.

精密度考察:精密吸取尿囊素对照品溶液10 μL，进入高效液相色谱仪，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD值(相对标准偏差).

稳定性考察:将供试样品室温放置，分别在0、1、2、4、8、12、24、48 h 时精密吸取 10 μL 进样，测定尿囊素的峰面积，计算RSD值.

重现性考察:精密吸取同一供试样品溶液10 μL进样，重复进样6次，测定尿囊素的峰面积，计算RSD值.

加样回收率考察:精密称取5份供试品溶液，分别加入一定量的尿囊素对照品，测定并计算加样回收率，加样回收率=((实测量－样品量)/加标量)×100%.

2.1.4 挥发油质量浓度测定

取正交试验项下提取液50 mL，按照2010年版《中国药典》附录XD挥发油测定法(甲法)测定.

2.2 正交设计试验

按1/2处方量称取药材约50 g，浸泡40 min，依据煎膏剂提取工艺的影响因素，以预试验结果为基础，选择L9(34)正交设计表，按正交试验顺序提取，合并每次提取液，滤过，即得.确定考察因素、水平及实验结果见表1、2.

表1 水提正交试验因素水平表

3 实验结果与分析

3.1 正交试验结果

出膏率、浸出物、尿囊素及挥发油质量浓度测定结果见表2.

表2 正交试验结果

3.2 方差分析结果

将正交试验结果进行方差分析，出膏率、浸出物百分含量、尿囊素及挥发油质量浓度方差分析结果分别见表3～6.

表3 出膏率的方差分析结果表

表4 浸出物方差分析表

表5 尿囊素质量浓度方差分析表

表6 挥发油质量浓度方差分析表

依据正交试验结果，方差分析结果表明:挥发油测定方法中，A、B因素差异显著(P＜0.05)，在尿囊素质量浓度测定方法中，优组合为A3B3C2，优水平为A＞C＞B.在出膏率测定方法中，提取次数(B)对试验指标影响较大，浸出物质量浓度测定方法中，优组合为A3B3C2，优水平为 C＞A＞B.故综合考虑本实验的优组合为A3B3C2，即萆术硝痛颗粒最佳提取工艺研究为:水提取次3次，第1次加水量为处方量的12倍，回流时间为1.5 h，第2次加10倍量水，回流时间为1 h，第3次加8倍量水，回流时间为0.5 h.

4 结语

萆术硝痛颗粒为治疗痛风的临床经验方剂，经多年加减运用，已经取得良好疗效.本制剂中药物组成为白术、土鳖虫、萆薢等，依据组成药物的有效化学成分及性质，尿囊素质量浓度测定方法简便，灵敏度高，重复性好，无干扰，方中白术主要成分为挥发油，土鳖虫、萆薢中也含有部分挥发油成分，故采用挥发油测定方法(甲法)进行测定，方法简便，稳定性好，故选用尿囊素及挥发油质量浓度作为测定指标具有一定的代表性和可控性，综合考虑出膏率、浸出物含量，优化提取工艺.试验结果表明，该提取工艺条件和方法稳定可行，适合大生产需求，为确保制剂稳定性及制备规模化奠定实验基础.

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