热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效观察△

包秀芳

内蒙古民族大学附属医院妇产科，内蒙古通辽028000

热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效观察△

包秀芳

内蒙古民族大学附属医院妇产科，内蒙古通辽028000

目的探讨热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效。方法将79例卵巢癌伴恶性腹腔积液患者按照随机数字表法随机分为对照组（n=39）与观察组（n=40），对照组仅采用顺铂进行常规治疗，观察组在此基础上联合热疗进行治疗。比较两组疗效、治疗48 h后SKOV3细胞凋亡情况、治疗前后免疫功能相关指标水平、生活质量及不良反应发生情况。结果①对照组临床总缓解率为58.97%，低于观察组的77.50%，差异有统计学意义（P＜0.05）；②观察组治疗48 h后SKOV3细胞凋亡率为72.5%，高于对照组的46.15%，差异有统计学意义（P＜0.05）；③观察组治疗后CD4及CD4/CD8水平均高于治疗前及对照组治疗后，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组治疗前后各免疫功能指标水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；④根据SF-12生活量表评分，观察组患者生活量表相关维度（总体健康、情感职能、躯体疼痛及精神健康）评分均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；⑤对照组不良反应发生率为38.46%，观察组为35.00%，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效显著。

卵巢癌；热疗；顺铂；恶性腹腔积液；SF-12生活量表

Oncol Prog,2015,13(6)

恶性腹腔积液（malignant peritoneal ascites，MPE）指的是由卵巢癌、肝癌及其他恶性肿瘤累及腹膜而造成的腹腔内液体的异常并发症之一[1]，特别是以卵巢癌以及肝癌患者居多。肿瘤造成毛细血管通透性增大以及淋巴回流减少是MPE产生的重要原因。由于MPE生长速度较快，可造成食欲降低、腹部疼痛、恶心、呕吐、呼吸窘迫等不良症状，进而导致恶液质、心肺功能障碍等并发症，对患者生活质量造成严重的影响[2]。临床上，25%～50%的卵巢癌患者晚期会出现不同程度的MPE。所以，对MPE进行有效的控制，对改善卵巢癌患者生存质量及延长患者生存周期具有十分重要的临床价值与意义。本研究采用热疗联合顺铂方案对卵巢癌患者进行治疗，探讨了该方案对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的效果，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

入组2009年9月至2014年12月内蒙古民族大学附属医院的79例卵巢MPE住院患者。纳入标准[3]：①患者均经病理学诊断确诊，且经B超、CT或X线检查证实为中等至大量腹腔积液；②患者均于1个月之内未接受化疗或放疗治疗，KPS评分在50分以上，均无化疗禁忌症者；③心电图、肝肾功能以及血常规检查等正常者；④所有患者均知情同意。排除标准[4]：①合并严重的心脏疾病；②体温≥38℃；③肌酐清除率＜60m l/m in；④WBC＜4×109/L，且PLT＜75.0×109/L；⑤腹腔灌注药物史；⑥患者不知情。按照随机数字表法随机将79例患者分为对照组（n=39）与观察组（n=40），两组患者基本特征见表1。由表1可知，两组患者的基本特征差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 治疗方法及疗效评价

1.2.1治疗方法经B超定位之后常规腹腔置管，注药前应该尽量减少腹腔积液，将25mg/m2顺铂溶解于42℃的0.9%NaCl 2000 m l中，剂量为12.5mg，1次/周，连续三周为一个疗程，将混合液灌入腹腔之中，然后腹腔内注入5.0mg地塞米松、浓度为2%利多卡因2m l缓解腹膜粘连，灌注之后封管，嘱患者多次进行变换体位。观察组应用浓度为42%条件下微波热疗1 h，灌注1次/周，连续三周为一个疗程，休息1周，连续使用两个疗程后对疗效进行评价。对照组仅采用顺铂进行治疗。

1.2.2临床疗效评价[5]①完全缓解（complete Rem ission,CR）：腹腔积液消失且持续时间≥4周；②部分缓解（partial rem ission,PR）：腹水减少50%以上且持续在4周以上；③稳定（numerical control, NC）：腹水减少50%以下或者增加小于25%以上，且持续时间为4周；④无效（progressive disease, PD）：腹水增加20%，症状加剧。临床总缓解率为完全缓解率与部分缓解率之和。

1.3 细胞学检测

1.3.1细胞培养 人卵巢癌SKOV3细胞生长于含有10m l/L小牛血清的RPM I-1640培养液中，置于37℃、浓度为5%的CO2的恒温箱中进行传代培养。

表1 两组患者基本特征比较

1.3.2噻唑蓝检测方法细胞增殖观察内容主要包括两种设计：①固定热疗时间：温度设置为42℃，加热温度为60 m in，观察顺铂不同浓度时SKOV3细胞的生长抑制率，顺铂浓度分别为0、1、10、20、40、80 ng/m l；②将固定热疗温度设置为42℃，热疗时间依次设置为0、30、60、90、120m in，并注意对不同时间SKOV3细胞生长抑制率进行观察。取对数生长期SKOV3细胞，经胰蛋白酶消化，计数仪7.0×104/m l的细胞浓度接种到96孔板中，每孔在100μl、37℃及浓度为5%的CO2恒温条件下培养24h。顺铂给药之后，共培养48 h，收集细胞，用噻唑蓝法对两组患者治疗后SKOV3细胞进行检测。

1.3.3流式细胞仪检测 收集两组经过处理的细胞，离心之后弃去上清液，PBS冲洗2次。按照双色细胞凋亡检测试剂盒上的说明书进行操作。

1.4 免疫功能相关指标检测方法

采集患者治疗前后清晨外周静脉血3m l，取一定量的新鲜肝素钠作为抗凝剂备用，主要采用S-P法对T细胞亚群相关指标进行检测分析，具体检测方法完全按照试剂盒上的说明书进行操作。使用高倍镜对经染色的视野进行仔细观察，并在此视野下共计数200个单核细胞；若计数的200个单核细胞中，表面具有红色标记物则属于阳性细胞。

1.5 生活质量评价

采用SF-12生活质量评价量表，Cronbach’sα系数为0.88，重测信度为0.83，主要包括8个领域：躯体功能、躯体角色、躯体疼痛、总的健康状况、活力、社会功能、情绪角色、心理卫生，每项分值为1～5分，分值越高，则表明患者生存质量越佳[6]。

1.6 统计学方法

采用SPSS19.0软件对数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的临床疗效比较

对照组临床总缓解率为58.97%，低于观察组的77.50%，差异有统计学意义（P=0.032），见表2。

表2 两组临床疗效比较（n，%）

2.2 两组患者治疗48 h后SKOV3细胞凋亡情况比较

观察组治疗48 h后SKOV3细胞凋亡率为72.5%，高于对照组的46.15%，差异有统计学意义（P=0.021），见表3。

表3 两组患者治疗48 h后SKOV3细胞凋亡情况比较（n，%）

2.3 两组患者治疗前后免疫功能相关指标水平比较

观察组治疗后CD4（%）及CD4/CD8水平均高于治疗前及对照组治疗后，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 两组患者治疗前后免疫功能相关指标水平比较（±s）

表4 两组患者治疗前后免疫功能相关指标水平比较（±s）

CD3（%）CD4（%）CD8（%）CD4/CD8组别对照组（n=39）治疗前治疗后观察组（n=40）治疗前治疗后57.19±4.34 56.02±3.89 31.82±2.99 30.03±2.56 25.52±2.08 24.49±1.96 1.27±0.34 1.28±0.38 57.38±4.90 60.29±5.77 31.67±2.72 42.20±3.83 25.45±2.11 22.78±1.78 1.25±0.32 1.87±0.54

2.4 两组患者治疗后生活质量对比

根据SF-12生活量表评分，观察组患者治疗后生活量表相关维度（总体健康、情感职能、躯体疼痛及精神健康）评分均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见图1。

2.5 两组患者不良反应发生率比较

观察组患者治疗过程中不良反应发生率为35%，对照组为38.46%，观察组较低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表5。

3 讨论

卵巢癌是老年女性患者最为常见的一种恶性肿瘤，其腹腔转移后很容易形成腹腔积液。顺铂腹腔热灌注是卵巢癌较为常见且有效的临床治疗手段，可有效对腹腔积液的形成加以控制。顺铂为剂量依赖性药物，但是大剂量的顺铂往往会造成严重的不良反应，对顺铂杀伤恶性肿瘤的效果产生了极大的影响[7]。所以，增强卵巢癌细胞对顺铂化疗的敏感性成为当前临床治疗卵巢癌的一个重要课题。

表5 两组患者不良反应发生率比较（n，%）

MPE是晚期恶性肿瘤较为常见的一种并发症，患者中位生存周期一般为几周到几个月不均，一年生存率在10%以下。患者往往会由于腹胀、双下肢重度水肿以及呼吸急促而对患者的生活质量产生严重的影响[8]。传统单一性治疗MPE的方法包括腹腔穿刺放液、腹腔内局部应用化疗药物以及生物反应调节剂等，具有不良反应重、耐受性差以及有效率低等方面的缺陷。由于腹腔提供了局部化疗的条件，所以极易获得水平较高的化疗药物，比全身给药高数倍，且能够在门静脉以及肝脏内形成持续、高水平的抗癌药物环境[9]。同时，由于化疗药物主要经门静脉吸收，对门静脉转移入肝的癌栓以及癌细胞具有更强的杀灭功能，而且还延长了化疗药物与肿瘤的直接接触时间，最大限度地发挥了抗癌效应，而且可通过机械冲刷性功能，对腹腔中游离的癌细胞进行清除作用。顺铂作为第一代铂类抗肿瘤药物，属于细胞周期非特异性药物，主要与DNA链上的碱基作用，从而对正常复制模板功能产生影响，导致DNA复制障碍，从而对肿瘤细胞分裂产生抑制性作用。顺铂进入腹腔之后不易通过腹膜屏障，使其在腹腔中的水平比血浆水平高，能够维持较长时间的有效水平，具有广谱、高渗等方面的特点，属于一种较为理想的腹腔内灌注抗癌类药物。热疗能够提供肿瘤内化疗药物的浓度，增强药物的抗癌效应，同时在很大程度上降低了化疗药物对未加热正常组织的毒性效果，且利于预防或者推迟耐药性的产生，从而起到增效以及减毒等方面的效果。

热疗近年来逐渐成为继放化疗、生物治疗之后的又一肿瘤治疗手段，腹腔热灌注治疗成为腹腔肿瘤控制的有效方法，不良反应相对较少，安全性好。有研究证实，温热对肿瘤细胞有直接的杀伤作用。热疗联合化疗可以提高抗肿瘤作用，顺铂是最早被发现与热疗有协同作用的化疗药物，腹腔热灌注顺铂可有效控制腹腔积液生成。热疗可以增加肿瘤细胞膜的通透性，提供细胞内的药物浓度，促进DNA与铂类药物结合，抑制DNA的修复，从而提高化疗药物的杀伤作用，还有助于逆转顺铂耐药的发生。本研究通过体外研究证实，热疗能显著增强顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用，诱导细胞发生凋亡，这为卵巢癌热化疗的临床应用提供了理论参考依据。在临床实践的过程中，60m in也是患者能够耐受且不良反应小的常用时间期限。过度延长热疗时间可能带来其他不良反应且使患者不易耐受。

热疗联合顺铂治疗卵巢癌的机制为[3]：①高温改变了毛细血管血流，从而改变了化疗药物在组织中的分布情况，通过对肿瘤内部血管产生的扩张性作用，加速了血液循环，增加了肿瘤组织内部化疗药物水平；②高温状态能够改变化疗药物在机体中的代谢，热疗可影响药物在肝脏与肿瘤线粒体中代谢为活性基团，从而提高临床治疗效果；③高温可使得恶性肿瘤细胞的通透性改变，使得药物极易进入肿瘤细胞之中，使得药物在细胞中保持较高水平；④高温改变了药物的细胞毒性作用，使得原来在37℃时无细胞毒性的药物，在高温条件下会对细胞产生毒性作用；⑤加热时瘤体内的温度是不均匀的，肿瘤中心温度比周边要高，肿瘤中心增生弱的部分比周围部分对热的敏感度更大。基于上述基础理论，本研究结果显示：观察组疗效优于对照组，且观察组治疗48 h后SKOV3细胞凋亡率高于对照组，观察组患者免疫功能改善优于对照组。此结果与相关文献报道相符[10]。但是本研究也存在一定的局限性，如选择的样本量较少，不能很好地反映疗效问题。在今后的研究中，笔者认为，应该加大研究的样本量，以增强临床数据的有效性。

综上所述，热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效显著，应加以推广。

［1］曲红光,高磊,贺丹,等.灵芝多糖对顺铂诱导卵巢癌细胞耐药株的逆转[J].中国老年学杂志,2011,31 (5):831-833.

［2］马焱,瞿全新,张秀艳,等.腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究[J].中国肿瘤临床,2010,37(20):1153-1156.

［3］任春振,曹军丽,胡宗兰,等.腹腔热灌注联合静脉化疗治疗晚期卵巢癌的临床观察[J].中国肿瘤临床,2010,37(24):1459-1461.

［4］巴明臣,崔书中,骆福添,等.腹腔热灌注化疗治疗进展期结直肠癌临床疗效及安全性的Meta分析[J].中国普外基础与临床杂志,2010,17(7):725-730.

［5］Keen A,Fitzgerald D,Bryant A,et a1.Management of drainage for malignant ascites in gynaeeological cancer [J]. Cochrane Database Syst Rev, 2010, 20(1): CD007794.

［6］WHO.The development of the WHO quality of life assessment instrument[S].Geneva:WHO,1993.

［7］周林静,张桂芳,慕竹青,等.香菇多糖联合顺铂治疗恶性胸腹腔积液的临床观察[J].肿瘤基础与临床,2010,23(1):56-57．

［8］詹敏娟.深静脉导管在腹腔积液穿刺引流中的应用及护理[J].现代中西医结合杂志,2008,17(15):2381-2382．

［9］李灿宇,张自森,薛长年,等.热灌注顺铂治疗晚期卵巢癌恶性腹腔积液的临床疗效[J].中国老年学杂志,2012,32(17):3656-3658.

［10］刘志敏,康琳,刘义冰,等.腹腔热灌注顺铂治疗恶性腹水的临床观察[J].肿瘤,2007,27(6):508,510．

Synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cellsand efficacy of the treatmentonmalignantascites in ovarian cancer

BAO Xiu-fang
Departmentof Obstetricsand Gynecology,Affiliated Hospitalof InnerMongolia University for the Nationalities, Tongliao 028000,InnerMongolia,China

ObjectiveTo investigate the synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cells and the efficacy of the treatment on malignant ascites in ovarian cancer patients.Method79 cases of ovarian cancer patients were randomized into either control group(n=39)or experimental group(n=40)according to random number table.The control group was given conventional cisplatin-based therapy,and cisplatin plus hypertherm ia was adm inistered in the experimental group.The efficacy,apoptosis of SKOV3 cells in 48h after treatment,the level of immune function related factors before and after treatment,quality of life(QoL)and adverse reactions of both groups were compared.Result1)The clinical overall response rate(ORR)was 58.97%in control group,which was significantly lower than that in the experimental group(77.50%)(P＜0.05);2)The SKOV3 apoptosis rate in 48 h after treatmentwas 72.5%in the experimental group,and was significantly higher than the 46.15%of the control group(P＜0.05);3)The CD4 and CD4/CD8 levels after treatment were significantly higher than those before treatment in the experimental group and those after treatment in the control group(P＜0.05),while those measures maintained stable after treatment in the control group(P＞0.05);4)According to SF-12 QoL scale results,the relevant dimensions of QoL(general health,emotional function,bodily pain and mental health)scores were significantly higher in the experimental group compared w ith the control group(P＜0.05);5)The incidence of adverse reactionswas 38.46%in the control group,and was 35.00%in the experimental group,w ith no significant differences observed(P＞0.05).ConclusionHypertherm ia combined w ith cisplatin is of significant synergistic toxicity on human ovarian cancer cells and is effective in the treatment ofmalignant ascites in ovarian cancer.

ovarian cancer;hyperthermia;malignant ascites;cisplatin;SF-12 life scale

R737.3

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.06.18

2015-05-25）