HPLC法测黄瓜籽中芸香苷、异槲皮苷含量

刘子明（吉林工程职业学院，吉林四平136001）

HPLC法测黄瓜籽中芸香苷、异槲皮苷含量

刘子明
（吉林工程职业学院，吉林四平136001）

摘要：建立HPLC双波长法同时测定黄瓜籽中芸香苷、异槲皮苷含量的方法。以shim-pack VP-ODS C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）为固定相，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为254、273 nm，柱温30℃。芸香苷、异槲皮苷分别在0.001 59 mg/mL～0.159 mg/mL（r=0.999 8）和0.001 06 mg/mL～0.106 mg/mL（r=0.999 5）线性范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.24%（RSD=0.4%，n=6）和98.56%（RSD=0.5%，n=6）。该方法快速、简便、准确、可靠。

关键词：芸香苷；异槲皮苷；黄瓜籽；HPLC；双波长；含量测定

黄瓜，又名青瓜，刺瓜，胡瓜和吊瓜等，为葫芦科一年生草本植物。黄瓜籽是葫芦科植物黄瓜的种子。黄瓜籽的主要成分为多种游离氨基酸（其中丙醇二酸在人体有减肥和预防冠心病的功效）和维生素、木糖、果糖以及芸香苷、异槲皮苷、精氨酸的葡萄糖苷等苷类、胡萝卜素及其它对人体有益的矿物质、硫胺素、核黄素。《百科全书》和《中国医药宝典》记载：“黄瓜籽具有补钙，接骨，壮骨的功能，对风湿，关节炎，肩周炎，颈椎病，腰椎病，股骨头坏死等疾病有很好的食疗效果。”

近几年，对黄瓜籽化学成分的研究有一些文献报道[1]，但对其含量测定方面的研究报道尚少。本文主要是以其成分芸香苷、异槲皮苷为研究对象，采用HPLC双波长法对其进行含量测定，并对其进行方法学验证。结果表明，该方法快速、简便、准确、可靠。

1　仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪（SHIMADZU 2010AHT）；Class-Vp色谱软件系统；FA2004电子天平：上海精密科学仪器厂；QW3200V型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。

1.2试药

芸香苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707）；异槲皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111809-201102）；黄瓜籽（市场购买）；乙腈（色谱纯）：天津市科德科技有限公司；磷酸（分析纯）：天津市福晨化学试剂厂；二次蒸馏水：食品药品分析与检验实验室自制。

2　方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备

分别精密称取干燥至恒重的芸香苷、异槲皮苷对照品适量，甲醇溶解并定容，分别配成各含0.5 g/L的对照品储备液。再分别精密量取适量各对照品储备液，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混合均匀，即得混合对照品溶液，备用。

2.1.2供试品溶液的制备

称取黄瓜籽适量，粉碎，称取黄瓜籽粉（过3号筛）10 g，精密称定，置250 mL三角瓶中，精密加入甲醇100 mL，超声处理50 min，放冷[2-3]，用甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，收集滤液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2色谱条件与系统适应性实验

色谱柱：shim-pack VP-ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）[4]；进样量：10 μL；流速1.0 mL/min；柱温：30℃；检测器：二极管阵列检测器；检测波长254、273 nm[5]。各主成分与相邻峰之间的分离度大于1.5，分离度良好。色谱条件见表1。

表1　色谱条件Table 1　Chromatographic condition

分别取对照品和供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行测定，结果见图1。

图1　高效液相色谱图Fig.1　The figure of High performance liquid chromatography

2.3线性关系考察

分别精密称取干燥至恒重的芸香苷、异槲皮苷对照品15.9、10.6 mg，分别置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取芸香苷、异槲皮苷对照品溶液0.1、0.5、1、2、5、10 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，注入液相色谱仪分析。以峰面积积分值对浓度做线性回归方程，得各成分回归方程，结果见表2。

表2　回归方程、相关系数和线性范围表（n=6）Table 2　The table of regression equation、related coefficient andlinearity range（n=6）

2.4精密度试验

分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，重复进样6次，计算得芸香苷、异槲皮苷峰面积积分值的RSD分别为1.31%、0.91%，表明仪器精密度良好。

2.5重复性试验

取同一批样品按照2.1.2项下供试品溶液的制备方法制备6份，各取10 μL进样测定，结果芸香苷、异槲皮苷含量的RSD分别为1.42%、1.13%，表明重复性良好。

2.6稳定性试验

取按2.1.2项下供试品溶液制备方法制备的同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、16、24 h进样10 μL，测定芸香苷、异槲皮苷峰面积积分值的RSD为2.03%、1.36%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.7加样回收率试验

精密取已知含量的同一批样品适量，共6份，分别精密加入芸香苷、异槲皮苷对照品适量，按照2.1.2项下制备，依法测定，计算回收率，结果表明，本法准确可靠，结果见表3。

表3　加样回收率测定结果（n=6）Table 3　The result of recovery rate test（n=6）

2.8样品测定

取黄瓜籽粉样品3份，每份做3个平行，按2.1.2项下供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算含量，结果见表4。

表4　样品测定结果（n=3）Table 4　The result of sample test（n=3）

3　讨论

3.1流动相的选择

本研究参考文献考察了乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸两种流动相，结果乙腈-0.2%磷酸（15∶85）系统能使芸香苷、异槲皮苷完全分离且没有拖尾现象。

3.2提取方法的选择

样品处理时，采用水和甲醇分别进行超声处理和回流处理。结果显示，甲醇的提取效率较高；采用超声50 min和加热回流2 h提取效率相当，考虑方便、节能，选择了超声处理样品。

3.3检测波长的选择

本研究均选用两种成分的最大吸收波长为设定波长，采用双波长方法检测分析，简便、快捷。

4　结论

以黄瓜籽中芸香苷、异槲皮苷为研究对象，采用HPLC双波长法对其进行含量测定。结果表明，该方法快速、简便、准确、可靠，可用于黄瓜籽中芸香苷、异槲皮苷的含量测定。

参考文献：

[1] 田桂丽,苗晗,张圣平,等.黄瓜籽化学成分及其功效[J].中国蔬菜, 2014(8):7-11

[2]黄兴富,黎其万,刘宏程,等.高效液相色谱法同时测定苦荞中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量[J].中成药,2011(2):345-347

[3]吴笛,王峥涛,张勉.高效液相色谱法同时测定款冬花中芦丁、异槲皮苷、绿原酸的含量[J].中国中药杂志,2010(20):2722-2725

[4]何洋,周洪波,刘建雄,等.HPLC法同时测定金钮扣中芦丁和异槲皮苷的含量[J].沈阳药科大学学报,2013(4):268-271

[5]史新,王立升,庞赛,等.一点红药材中异槲皮苷的分离鉴定及指纹图谱研究[J].药物分析杂志,2012(5):809-812

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.20.040

收稿日期：2015-02-03

作者简介：刘子明（1979—），男（汉），讲师，本科，学士，主要研究方向：食品药品分析与质量控制研究。

Determination of Isoquercitrin and Rutin in Cucumber Seeds by HPLC

LIU Zi-ming
（Jilin Engineering Vocational College，Siping 136001，Jilin，China）

Abstract：To set up an HPLC method of double-wavelength simultaneous determination of the content for rutin and isoquercitrin in Cucumber seeds.The solid phase was shim-pack VP-DOS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）. The mobile phase was composed of acetonitrile-0.2%Phosphoric acid（15∶85），the flow rate was 1.0 mL/min，the detection wavelength was set at 254 nm and 273 nm，the temperature of chromatographic column was 30℃. good linear relationships were found within the range of 0.001 59 mg/mL-0.159 mg/mL（r=0.999 8）of rutin and 0.001 06 mg/mL-0.106 mg/mL（r=0.999 5）of isoquercitrin the average of recovery rate was 99.24%（RSD= 0.4%，n=6）and 98.56%（RSD=0.5%，n=6）.The results of the study showed that this method was rapid，simple，accurate and reliable.

Key words：rutin；isoquercitrin；cucumber seeds；HPLC；double-wavelength；content determination