高效液相色谱法测定小儿清热口服液中绿原酸的含量

范友强（哈药集团中药二厂，黑龙江 哈尔滨 150000）

高效液相色谱法测定小儿清热口服液中绿原酸的含量

范友强
（哈药集团中药二厂，黑龙江 哈尔滨 150000）

摘 要：本文以高效液相色谱为主要的检测手段，来建立这种绿原酸检测方法，具体研究如下文所述。

关键词：高效液相色谱法；小儿清热口服液；绿原酸；含量；测定

作为一种较为常见的小儿清热退烧药物，在小儿清热口服液中，，绿原酸作为重要药效成分，其含量的多少会对口服液的退热效果产生直接影响，为此在生产小儿清热口服液时，一般都会对绿原酸的含量进行有效控制，这就需要一种高效便捷的测量方法来检测绿原酸的含量。现本文就以高效液相色谱为主要的检测手段，来建立这种绿原酸检测方法，具体研究如下文所述。

1 仪器和试药

本试验中所使用的仪器主要有高效液相色谱泵、检测仪和数据处理机。这些仪器设备均为试验室常用设备，且能够满足本试验的研究需要。所使用的试药为小儿清热口服药品，以及绿原酸对照品，这些药品和对照品均由相关单位检测合格，另外试验中所使用的其他试剂均为分析纯。

表1 小儿清热口服液中绿原酸的回收率测定结果

2 测定方法

2.1 色谱条件

YWG-C18柱（4.0mm×150mm，10μm）；流动相甲醇-水-四氢吠喃-冰醋酸（2.5∶97∶5∶1.5）；流速1.5mm·min-1；检测波长327nm；灵敏度0.05AUFS；纸速0.1mm·min-1。

2.2 绿原酸对照品溶液的配制

首先应该精密称取一定的绿原酸对照品，以便于配制一定的对照品溶液。本试验中称取了10.1mg的对照品，并将其放在10mL的容量瓶里进行稀释，稀释溶液使用浓度为50%的甲醇，稀释完后将溶液摇匀即可得到1号对照品溶液。之后再从1号对照品溶液中精密量取1mL，将其放置在10ml容量瓶中，继续稀释，摇匀，得到2号对照品溶液。

2.3 供试样品液的配制

在配备完对照品溶液后，就要配制相应的供试样品液。其配制方法与对照品溶液相同，均是精密量取后加50%甲醇进行稀释，摇匀。

2.4 阴性液的配制

由于绿原酸主要存在于金银花这一药材中，为了排除其他药材对绿原酸含量测量的影响，本实验还专门配制了阴性液加以对比分析。阴性液的配制主要是按照小儿清热口服液的制备工艺和相关工艺参数所制备出的不含金银花的小儿清热口服液，并以这一溶液为样品，采用与对照品溶液制备相同的方法制备出阴性液。

2.5 药材液的配制

同样需要进行精密称取，并将所称取的0.15g药材放置到到具塞锥形瓶中，加入50mL浓度为50%的甲醇溶液之后将瓶塞塞紧，然后称量其重量，并对其进行时长为半个小时的超声处理。然后待溶液冷却后，再称量其重量，并用50%甲醇将所损失的重量补充回来，并摇匀。

2.6 标准曲线的绘制

精密量取绿原酸对照品2号溶液2，4，5，6，8μl进样测定，以绿原酸进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘图。其回归方程为：Y=781483.90，X-15316.87， r=0.9999，绿原酸标准品在0. 201～0. 807μg与峰面积有良好的线性关系。

2.7 精密度试验

按照测定方法重复进样5次，绿原酸峰面积积分值相对标准偏差RSD = 1.33%。

2.8 重现性试验

按照测定方法重复测定5份样品，绿原酸含量的相对标准偏差RSD=0. 4%。

2.9 加样回收率试验

精密量取5份样品（批号：110618）各0.5mL，置50mL，容量瓶中，精密吸取各样品液，分别精密加入绿原酸对照品2号溶液0.90mL、1.09mL、1.00mL、1.04mL、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，摇匀即得。按上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果如表1结果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 样品测定

精密量取样品液l0μL进样，依照上述色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 绿原酸含量测定结果

结语

由本实验可以得知，在对小儿清热口服液中的绿原酸含量进行测定时，采用高效液相色谱法是非常可行的。而其测定效果与效率在很大程度上与流动相有较大关联。在本试验中，最初使用的流动相：甲醇-水-乙腈-冰醋酸的比例为3：97：12：3，在测定期间发现在此流动相下样品的分离效果不理想，很容易造成绿原酸峰拖尾问题，为此我们对流动相进行了一定的变动，将乙腈换位了四氢呋喃。在经过调整后，样品的分离达到了理想效果。并为之后的绿原酸含量测定提供了良好条件。在对绿原酸进行含量测定时采用高效液相色谱法不但操作简便，且检测效果好，能够使绿原酸和其他成分实现基线分离，保证了检测结果的准确性。

事实上，绿原酸含量检测不但对小儿清热口服液的生产质量保证有很大意义，其在其他请热类药物的生产中也往往需要进行要有效检测。因为绿原酸本身存在于金银花中，所以只要药物成分中有金银花都会有绿原酸，绿原酸的杀菌功能较为显著，在多种感冒清热药物中发挥积极作用，为此必须要确保这类药物中绿原酸的含量符合相关要求。而高效液相色谱法完全可以作为一种检测方法应用在这些药物的绿原酸含量检测中。

参考文献

[1]崔岚，祝德秋，王晓珉，罗启剑，曹惠明.反相高效液相色谱法测定清炎颗粒中绿原酸的含量[J].中国药房，2004（06）.

[2]赵霞，杨丽.HPLC法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量[J]. 中国药事，2012（01）.

中图分类号：R286

文献标识码：A