高效液相色谱法测定罗库溴铵注射液含量

李明玥

哈药集团生物工程有限公司

高效液相色谱法测定罗库溴铵注射液含量

李明玥

哈药集团生物工程有限公司

目的建立罗库溴铵注射液含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为硅胶柱（0.25m×4.6mm），流动相为乙腈（900ml）：四甲基氢氧化铵溶液100ml（4.53g/L，用磷酸调pH至7.4），检测波长为210nm，系统适用性为取杂质H，加乙腈制成约0.1mg/ml的溶液。取供试品溶液1ml于10容量瓶中，向其中加入1ml杂质H溶液，加乙腈稀释至刻度（重复配制6次），重复测定结果应符合规定。专属性试验结果表明辅料氯化钠及醋酸钠不干扰含量测定，准确度回收率为99.6%，相对标准偏差为1.2%，线性试验研究结果表明溶液浓度在0.8mg/ml至1.2 mg/ml的范围内，线性关系良好，重复性及中间精密度试验符合规定，定量限试验结果表明在信噪比约为10：1时溶液的浓度为2.1ug/ml。结果方法学试验符合规定，所建立含量测定方法可用于本品含量测定，系统适用性试验需考察杂质H与主峰分离度。

系统适用性；方法学；含量测定

罗库溴铵是非去极化神经肌肉阻滞剂，与其它非去极化药物一样，它竞争性地与运动神经末梢突触上的胆碱能受体结合，以拮抗乙酰胆碱的作用。由于其起效快，作用时间短而被广泛地用于气管内插管。在非去极化神经肌肉阻断剂中，本品起效最快，一般在静脉注射60秒钟后就能为插管提供极好的条件。本文对罗库溴铵含量测定方法进行筛选并验证，建立罗库溴铵注射液含量测定方法。

一、仪器与试药

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪，乙腈、四甲基氢氧化铵及磷酸为色谱纯，pB-10型pH计（德国赛多利斯），罗库溴铵对照品（纯度99.8%，购自美国药典委员会），色谱柱安捷伦硅胶柱（250mm*4.6mm,5mm），罗库溴铵注射液供试品由哈药集团生物工程公司提供，罗库溴铵注射液对比制剂为浙江仙倨药业股份有限公司，其它试剂均为分析纯。

二、系统适用性试验

杂质H为罗库溴铵降解产物，与罗库溴铵极性相似，在色谱条件发生微小变化时可能与罗库溴铵不易分离，我们先对罗库溴铵与杂质H进行分离度考察，方法参照美国药典方法进行，取杂质H，加乙腈制成约0.1mg/ml的溶液。取供试品溶液1ml于10容量瓶中，向其中加入1ml杂质H溶液，加乙腈稀释至刻度（重复配制6次），重复6次测定，结果杂质H与主峰分离度符合规定，相对标准偏差为0.8%，对主峰进行峰纯度监测，结果符合规定，说明罗库溴铵与其它杂质可有效分离。

三、专属性

称取处方量的醋酸钠及氯化钠，加水使溶解制成每1ml含醋酸钠0.2mg、氯化钠0.33mg的溶液，作为空白对照溶液，取空白对照溶液进样。结果氯化钠及醋酸钠不干扰罗库溴铵的含量测定，专属性符合规定。

四、线性

取罗库溴铵对照品，加乙腈使溶解，制成罗库溴铵对照品储备溶液，精密量取对照品适量，加乙腈稀释制成浓度分别为为0.8mg/ ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml、1.1mg/ml、1.2 mg/ml的溶液，作为线性试验的对照品溶液，取上述线性溶液进样，分别测定其主峰的面积。以溶液浓度为横坐标（X），主峰峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。结果线性试验符合规定，溶液浓度在0.8～1.2 mg/ml的浓度范围内线性关系良好。

五、准确度

采用加入法测定回收率，分别配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。取罗库溴铵对照品，加乙腈制备成2mg/ml的溶液（10ml），作为对照品储备液，备用；取罗库溴铵注射液2ml于10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，作为供试品储备液，备用。溶液Ⅰ制备（80%）：取对照品储备液、供试品储备液各2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，重复配制3次。溶液Ⅱ制备（100%）：取对照品储备液3.0ml、供试品储备液2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度。溶液Ⅲ制备（120%）：取对照品储备液4.0ml、供试品储备液2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度。精密称取对照品约10.1mg，加乙腈溶解稀释至刻度，作为对照品溶液。取上述溶液，按照测定法测定，计算计算回收率。准确定平均回收率为99.8%，符合规定。

六、重复性

配制6份相同浓度（1.0mg/ml）的供试品溶液，重复测定6次，测定结果相对标准偏差为0.6%，重复性试验符合规定。

七、中间精密度

分别由两个分析人员使用不同的仪器（安捷伦、岛津）与试剂进行测试，结果中间精密度测定结果的相对标准偏差为0.9%，中间精密度符合规定。

八、定量限

取罗库溴铵对照品，制备成一定浓度溶液，进样，主峰与噪音峰信号的强度比约为10：1。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，计算6份溶液主峰相对保留时间。结果在信噪比约为10：1时溶液的浓度为2.1ug/ml。6份样品溶液的主峰相对保留时间符合规定。

九、样品含量测定

取罗库溴铵注射液样品及对比制剂，按照确定测定方法测定罗库溴铵注射液含量，结果主峰与杂质H分离度符合规定，供试品溶液及对比制剂含量测定结果分别为99.6%、99.1%、100.3%和99.8%，含量测定结果符合规定。

十、讨论

本品含量测定关键因素为杂质H与主峰分离度，系统适用性试验结果表明杂质H与主峰分离度符合规定，主峰峰纯度符合规定，方法验证结果符合规定，所建立含量测定方法可行。

[1]董军杰，庞文哲，宋更申，姜建国.高效液相色谱法测定罗库溴铵含量的不确定度评定.河北中医，2011年12月第33卷第12期：1193-1194.

李明玥（1984-），女，黑龙江哈尔滨市，本科，哈药集团生物工程有限公司，化验员，工程师。