藏药方剂石榴健胃丸质量标准研究

王天臻 杨金草

(甘肃省甘南州食品药品检验检测所，甘肃 合作 74700)

藏药石榴健胃丸为常用藏药制剂，由石榴子、肉桂、荜茇、红花、豆蔻5 味药材组成，石榴健胃丸适用于温胃益火。用于消化不良，食欲不振，寒性腹泻等疾病。收载于卫生部药品标准藏药第一册，原标准仅有显微鉴别项和石榴子药材的薄层色谱鉴别及常规检查项，不利于药品的质量控制，为了进一步控制该制剂的质量，本实验采用对肉桂定性鉴别，用HPLC 法测定了该制剂中红花的有效成分羟基红花黄色素A 含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器：岛津SPD-20A 高效液相色谱仪(日本岛津)及其配套工作站，包括：紫外检测器SPD -20A、LC -20A 泵(四元梯度单元)、SIL-20A 自动进样器、CTO -10AS 柱温箱、CBM-20A 控制器、SUS20A 混合器、流路在线脱气机;BT224S 型分析天平、CP-225D 型分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司);KH-250DB 型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);硅胶H 薄层板，硅胶G 薄层板(青岛海洋化工厂);薄层呈像系统(Visualizer CAMAG)

1.2 试药：羟基红花黄色素A 对照品(批号：111637 -201207，中国药品生物制品检定所);桂皮醛对照品(批号：110710 -201217 中国药品生物制品检定所);乙腈、甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限责任公司);水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯;石榴健胃丸(批号：20130315 20130502 20130709 20131006 20131102 )及阴性对照品(甘南藏族自治州碌曲县西仓寺院藏医院医院制剂)。

2 肉桂TLC 鉴别

称样品5g，加入乙醇15mL，密塞，静置20min，取上清液做为供试品溶液。另取缺肉桂的阴性对照5g，同法制成阴性对照溶液。再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1mg/1mL 的溶液做对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取对照品2μL、供试品溶液和阴性对照溶液各5μL 分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚(60 -90℃)：乙酸乙酯(17：3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷二硝基苯肼乙醇试液显色剂，日光下检视。供试品色谱中，在与照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰，见图1

3 羟基红花黄色素A 含量测定

3.1 色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂;Thermo C18 色谱柱：(250 mm ×4.6 mm，5μm);甲醇：乙腈：0.7%磷酸溶液(26：2：72)为流动相;检测波长：403 nm;流速：0.8 mL·min-1;柱温：30 ℃;进样量：10 μL;理论板数按羟基红花黄色素A 峰计算应不低于3000。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品0.01268g 置50mL 容量瓶中，加25%甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，制成约0.13mg/ mL 的对照溶液，即得。

3.2.2 供试品溶液的制备：精密称取本品细粉约1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHZ)40min，放冷，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.2.3 阴性对照溶液的制备：按处方制备工艺制成缺红花的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

3.3 干扰试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL 按照上述色谱条件，分别注入液相色谱仪。结果：供试品羟基红花黄色素A 中与相邻组分基线完全分离，且峰形良好，样品中其他组分对羟基红花黄色素A 的测定无干扰，见图2

3.4 精密度试验：取“3.2.1”项下对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样5 次，以峰面积的值为指标计算RSD，考察精密度。结果羟基红花黄色素A 的RSD 为0.59%，表明仪器精密度良好。

3.5 线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL，按上述色谱条件分别进样，测定峰面积。以羟基红花黄色素A 对照品的进样量(μg)的常用对数值为横坐标，以峰面积的常用对数值为纵坐标，进行线性回归。Y =20270318X -12146(r =0.9999);结果表明：羟基红花黄色素A 在0.5432 ～2.716μg 范围内呈良好的线性。

3.6 重复性试验：取同一批样品(批号：20130502 )6 份，按“3.2.2.”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果羟基红花黄色素A 平均值(n=6)为4.4276 mg·g-1;RSD 分别为0.763%，表明本方法重复性较好。

3.7 稳定性试验：取“3.2.2.”项下供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，8，12，24 h 在上述色谱条件下进样10μL测定，测得峰面积约4760903。计算RSD 为0.98%。表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

3.8 加样回收率试验：精密称取已知含量(4.1968mg/g)的同一批样品(批号：20130315 )6 份，每份各精密加入对照品溶液(1.0082mg/mL)2mL，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.9”项下方法测定样品含量，计算加样回收率，结果见表1。

3.9 样品含量测定：取5 批样品，分别按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液。分别取对照品溶液10μL，供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算样品中羟基红花黄色素A 含量。结果见表2。

编号 批号 羟基红花黄色素Amg·g -1 20130315 4.1968 2 20130502 4.2198 3 20130709 4.1866 4 20131006 3.9978 1 20131102 4.1201 5

组别 样品中images/BZ_87_422_409_423_411.png含量/mg加入对照品量/mg实测量/mg回收率/% /% RSD/%1 2.0126 2.0165 4.1762 99.45 2 2.1002 2.0165 4.0962 98.27 3 2.2166 2.0165 4.1631 98.69 4 2.0057 2.0165 3.9862 97.16 5 2.0106 2.0165 4.1276 98.49 98.15 0.78 6 2.0581 2.0165 3.9066 96.8 6

4 讨 论

TLC 鉴别在溶剂选择上，分别用氯仿和乙醇不同提取，展开剂使用上，分别用苯-乙酸乙酯(10：3)和石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17：3)进行比较，最后发现肉桂在乙醇提取下，用石油醚(60 ～90℃)-乙酸乙酯(17：3)进行展开，喷以二硝基苯肼乙醇溶液，斑点显色，分离效果最佳。

在样品中羟基红花黄色素A 的测定实验中发现，样品采用25%甲醇超声提取，提取液过滤较慢，样品采用50%甲醇、75%甲醇超声提取，较采用25%甲醇超声提取，提取液过滤速度末能得到有效改善，采用甲醇提取提取液过滤速度得到很大改善，但提取不完全，含量较低。最后选用25%甲醇。

在流动相的优化中，参考文献资料，选用了乙腈、甲醇、磷酸系统的不同配比进行试验，以甲醇：乙腈：0.7%磷酸溶液(26：2：72)为流动相时，能够获得较好的分离效果，理论板数应不低于5000，所以选择此流动相系统作为本试验的流动相。

在检测波长的选择上，参考文献资料，我先将对照品溶液在紫外分光光度仪下进行200nm ～700nm 范围内扫描，结果在402.5nm 处有最大吸收，因此选择403nm 作为检测波长。

［1］国家药典委员会.卫生部药品标准藏药［S］.1995：302

［2］国家药典委员会.中国药典(一部)［S］.中国医药科技出版社，2010.

［3］常新全，丁丽霞.中药活性成分分析手册(上册)［M］.

［4］吴锋，豆久锋，陈忠良.HPLC 测定祛风止痛胶囊中羟基红花黄色素A［J］.中草药，2010，11.

［5］许波，苌玲，高玲，等.HPLC 测定肤痒颗粒中羟基红花黄色素A 的含量［J］.中国医院药学杂志2008，28(21).

［6］彭伟文，高玉桥，梅全喜，等.HPLC 法测定骨科洗剂1号方中羟基红花黄色素A 的含量［J］.中国药房，2006：24.