针对PEDV的运输车辆消毒方法效果比较

朱秀高（武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042）

回盛“猪医生”专栏

针对PEDV的运输车辆消毒方法效果比较

朱秀高
（武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042）

摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PDEV）引起的，其在猪群内部和猪群之间的传播往往由运输车辆的污染引起，本文用4个试验分别评估了时间和温度、消毒剂Staloan F粉、Accel消毒剂、清洗+消毒+热辅助干燥和净化（TADD）对被PDEV污染的运输车辆的消毒效果，发现对运输车辆加热至71℃持续10分钟或于20℃（室温）至少7天均可有效地杀灭PEDV；Stalosan F消毒粉不能有效地杀灭PDEV；Accel消毒剂在不同病毒含量下均可有效地杀灭PEDV；清洗+消毒+TADD也可有效地杀灭PDEV。

关键词：猪流行性腹泻病毒；运输车辆；消毒

1971年，猪流行性腹泻（PED）在英格兰的育肥猪群中被首次发现，猪流行性腹泻病毒（PEDV）的病原在1978年被分离确认。从20世纪70年代到80年代，该病毒在欧洲其他地区快速传播，造成了猪只严重的腹泻与养猪业巨大的经济损失。目前PEDV是欧洲的一种地方性病原，但并未引起大范围的发病。亚洲一些地区在1982年首次发现该病后，就一直没有停止。2013年5月，美国首次在猪群中发现了PEDV，病毒导致母猪和仔猪出现了严重的腹泻，并造成美国全境感染仔猪近乎100%的死亡。基因分析显示引起美国猪群发病的病毒与中国分离株的同源性接近99%，但目前还不能确定病毒是如何进入美国的。

尽管病毒进入美国的途径还不明确，但目前已经知道受PEDV污染的运输车辆往往是PED在猪群内部和猪群之间传播的源头，具有极大的传播风险，这与对其他病毒如高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）传播途径的认识是一致的。过去，运输工具这一潜在传播风险的消除需要通过一系列措施，包括清洗、消毒以及热辅助干燥和净化（TADD）等。根据对TGEV的控制效果，这些措施应该对与其结构相似的PEDV具有非常好的消毒效果，可以用于被PEDV污染车辆的消毒。

1　试验设计

2013—2014年，共进行了4次不同的试验，以分别评价不同的车辆消毒方法。试验一主要测定了杀灭粪便中PEDV所需要的时间和温度；试验二对消毒剂Staloan F粉（施立安）杀灭粪便中PEDV的效果进行了评估；试验三测定了Accel消毒剂杀灭粪便中PEDV的效果（为测定没有进行车辆清洁时消毒剂的消毒效果，在进行试验一和试验三时没有清除设备上的粪便）；试验四评估了多种车辆消毒方法，其中包括清洗、消毒和TADD。

1.1试验一

本试验设计了8对不同时间和温度的处理组合。将5 mL未稀释的PEDV阳性粪便样品（阴性对照组用阴性粪便样品）随机散布在面积为15.24 cm×15.24 cm×2.54 cm的铝盘底面（类似于运输车辆的底盘）。然后按照表1的设计进行处理，处理后将粪便用10 mL生理盐水稀释并重新收集，再灌胃感染4周龄大小的PEDV阴性仔猪，灌服后观察仔猪有无出现腹泻的临床症状，并采集感染后3～7天的粪便拭子，用RT-PCR检测PEDV的感染状态，每个处理组内含4个重复。试验结果见表1。

表1　试验一各组的处理方式及效果

1.2试验二

本试验中设置了三个不同的处理组：Stalosan F消毒粉（施立安）组、阳性对照组和阴性对照组。将5 mL未稀释的PEDV阳性粪便样品（阴性对照组用阴性粪便样品）随机散布在面积为15.24 cm×15.24 cm ×2.54 cm铝盘底面（类似于运输车辆的底盘）。处理过程中，阴性对照组和阳性对照组用密闭的罩子覆盖，以防止与Stalosan F消毒粉接触。把撒布样品后的铝盘放在商业运猪车的底面和两侧，将Stalosan F消毒粉用电动喷粉器按81 g/㎡的标准喷洒在整个车厢内，1小时后将铝盘从车厢内取出置于20℃（室温），然后用10 mL缓冲液冲洗稀释粪便并收集，其中4 mL做他用，剩下约6～8 mL灌服给4周龄大小的PEDV阴性仔猪，每头猪对应一个铝盘。灌服后观察仔猪有无出现腹泻的临床症状，并采集感染后3～7天的粪便拭子，用RT-PCR检测PEDV的感染状态，每个处理组内含8个重复。试验结果见表2。

表2　试验二各组的处理方式及结果

1.3试验三

本试验根据粪便污染程度（轻Vs重）和消毒剂浓度（1∶16 vs 1∶32）不同设置了6个处理组。将5 mL或10 mL未稀释的PEDV阳性粪便样品（阴性对照组用阴性粪便样品）随机散布在面积为15.24 cm× 15.24 cm×2.54 cm铝盘底面（类似于运输车辆的底盘）。然后按表3的设计对各处理组用Accel消毒剂进行处理，再用10 mL缓冲液稀释并回收粪便，给4周龄大小的PEDV阴性仔猪灌服。灌服后观察仔猪有无出现腹泻的临床症状，并采集感染后3—7天的粪便拭子，用RT-PCR检测PEDV的感染状态，每个处理组内含4个重复。试验结果见表3。

1.4试验四

本试验中设置了9个不同的处理组。每个处理组中均用10 mL未稀释的PEDV阳性粪便样品（阴性对照组用阴性粪便样品）随机散布在面积为15.24 cm×15.24 cm× 2.54 cm铝盘底面（类似于运输车辆的底盘）。然后将铝盘按不同组合的TADD程序进行处理。再用10 mL缓冲液稀释并回收粪便，给4周龄大小的PEDV阴性仔猪灌服。灌服后观察仔猪有无出现腹泻的临床症状，并采集感染后3～7天的粪便拭子，用RT-PCR检测PEDV的感染状态，每个处理组内含4个重复。试验结果见表4。

表3　试验三各组的处理方式及结果

表4　试验4内各组的处理方式及结果

1.5试验结果

试验一中，71C-10M和20C-7D组均能100%杀灭PEDV病毒，与阳性对照组相比差异显著；试验二中，Stalosan F处理组与阳性对照组相比没有显著性差异；试验三和试验四中，所有处理组均能100%杀灭PEDV，与阳性对照组相比差异显著。

2　讨论

根据上述结果，对运输车辆加热至71℃持续10分钟或于20℃（室温）至少7天均可有效杀灭PEDV。

此外，消毒剂Accel在不同病毒含量下均可有效杀灭PEDV；而Stalosan F消毒粉不能完全杀死粪便中的PEDV。这提示我们针对不同的环境条件，需要选择合适的消毒剂。消毒剂的广谱性不仅体现在它们的抗菌谱广，更为重要的是它们的理化特性复杂，这些特性包括液体、粉剂和不同的泡沫质量等。对消毒剂来说抗菌谱活性非常重要，但这些理化特性更重要，因为这些特性能够影响它们的应用范围和在不同条件下的消毒效果。试验四的结果显示出一个完整的车辆消毒措施的重要性，它包括冲洗、消毒和最后的烘干（干燥），在这一试验中，所有处理组均能有效杀灭PEDV。此外，值得注意的是，一般来说，温度在车辆进行冲洗和消毒后对杀灭病毒非常重要，而在试验一中，温度的作用并不十分明显。

中图分类号：S851.34+7.6

文献标识码：A

文章编号：1673-4645(2015)03-0073-03

收稿时间：2015-03-09